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中药小檗碱、薯芋皂苷对滋养细胞内糖代谢分子表达的调控
目的:探讨中药提取成份小檗碱、薯蓣皂苷对滋养细胞内糖代谢相关蛋白分子IRS-1,P1-3K,Glutl,PPAR γ表达的调控.方法:人早期妊娠绒毛滋养层细胞体外培养;利用Wortmaninn(WT)进行刺激,诱导细胞糖代谢障碍;采用中药提取成份小檗碱、薯蓣皂苷进行干预,设立曲格列酮(T),二甲双胍(R)为对照药物.利用RT-PCR检测基因表达;Western blot检测蛋白水平的表达;采用激光共聚焦显微技术(LSM)对相关蛋白分子的表达进行定位.结果:①WT诱导前后滋养细胞内葡萄糖代谢发生异常(P<0.05);②WT阻断PI-3K亚基P110的mRNA 90.2%的表达;③WT阻断后,IRS-1,PI-3K(P85),PPAR?的mRNA表达下调;④小檗碱可以明显提高IRS-1、P85、PPAR γ mRNA表达,对IRS-1和PPAR γ的调节与曲格列酮相似,药物干预前后分别增加23.94%,113.9%;在P85的调节上明显优于其他组药物,mRNA上调64.41%.蛋白表达与mRNA表达趋势相同,但调控水平不明显.结论:①小檗碱对多种糖代谢相关蛋白因子有调控作用,这可能是改善细胞糖代谢障碍的分子机制;薯蓣皂苷对滋养细胞糖代谢的调节作用较弱;②药物对蛋白表达的调节慢于基因的调节,要提高功能蛋白在细胞糖代谢中的作用是一个相对缓慢的过程.
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弓形虫速殖子抗原的提取及蛋白分析
弓形虫病是一种严重危害人民健康的人兽共患病.全球约有10亿人被弓形虫感染,我国弓形虫血清阳性率约5%[1].由于弓形虫的生物特性,人体感染后一般症状不明显,多呈隐性感染,无特异的临床症状与体征,且病原学检查难以查到病原体.因此,弓形虫感染的诊断多依靠免疫学方法.本研究主要对弓形虫RH株速殖子抗原的提取、纯化和制备进行初探,对速殖子抗原的蛋白分子进行试验分析,以提高免疫诊断的敏感性和特异性,并试图了解其功能性抗原.
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蛋白质磷酸化检测方法及原理
蛋白质是生命活动的物质基础,是机体细胞的重要组成部分.新生蛋白质多肽需要经过翻译后修饰才能转变为成熟蛋白质.翻译后修饰包括:甲基化、羟基化、羧基化、糖基化、脂酰化、异戊烯基化等共价修饰[1].蛋白质磷酸化是重要的蛋白质翻译后修饰之一,在蛋白激酶催化作用下,磷酸基团由供体分子转移到蛋白质的含有羟基的氨基酸侧链上,具有可逆性[2].蛋白质磷酸化和去磷酸化几乎调节着生命活动的全部过程,文献显示在任何时间内真核细胞蛋白分子中约有1/3的数量在发生磷酸化[3],主要发生在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸上,较少见的磷酸化氨基酸还有精氨酸、组氨酸、赖氨酸以及天冬氨酸和谷氨酸等.蛋白质磷酸化氨基酸有4种类型:①氧-磷酸盐,通过羟氨基酸的磷酸化形成;②氮-磷酸盐,通过精氨酸、赖氨酸或组氨酸的磷酸化形成;③酰基磷酸盐,通过天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成;④硫-磷酸盐,通过半胱氨酸磷酸化形成[4].
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白细胞介素-5增强嗜酸性粒细胞呈递抗原的能力
我们以前曾证实嗜酸性粒细胞(EOS)经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激后可以表达Ⅱ类主要组织相容性复合体基因所编码的蛋白分子(如人EOS的HLA-DR)[1]以及协同刺激分子如B7-1 (CE90)和B7-2 (CD86)等[2],并因此成为抗原呈递细胞,能够将抗原呈递给T细胞从而促使后者进行增殖.本研究的目的是探讨TH2淋巴细胞产生的白细胞介素-5(IL-5)能否增强EOS将抗原呈递给自体T淋巴细胞的能力.
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福赛斯拟杆菌与牙龈卟啉单胞菌表面蛋白间相互结合机制
福赛斯拟杆菌(Bacteroides forsythus, 简称B.forsythus)和牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromonas gingivalis,简称P.gingivalis)是人类牙髓根尖周疾病以及牙周疾病的重要致病菌,在慢性根尖周炎患牙根管内定植呈正相关关系.但两菌间相互结合的蛋白分子以及结合机制目前尚未见报道.本文采用Western blot技术探讨牙龈卟啉单胞菌与福赛斯拟杆菌相互作用及其作用机制.
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核糖体展示技术的原理与应用
通过构建分子文库(cDNA文库、随机肽库、抗体库及其它蛋白文库),采用合适的筛选技术可以非常方便、有效、快速地筛选生物活性物质.目前分子文库技术已经广泛应用于抗原表位分析、功能小肽分子(如肽类拮抗剂和激动剂)或功能蛋白分子(如抗体)的筛选和改造等领域.筛选技术主要有两类:1. 体内筛选技术,如噬菌体展示技术[1]、选择性感染噬菌体技术[2]等.
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以Angiopoietin-1,2为靶点靶向治疗口腔鳞癌的研究进展
针对肿瘤新生血管的靶向治疗已成为恶性肿瘤新的治疗策略.但目前尚缺乏有效针对口腔鳞癌抗血管生成治疗的靶向因子.Angiopoietin(Ang)是近年来发现的一族可特异性作用于血管酪氨酸激酶受体系统(receptor tyrosine kinase,RTK)的分泌性蛋白分子,在生理和病理血管新生中起重要作用.研究表明Ang 家族中Ang-1,2 和血管新生关系为密切,二者的表达调控及活性调节研究已成为目前阐明肿瘤性血管生成、发育机制并进行肿瘤抗血管生成治疗的研究热点.本文就Ang-1,2 在实体瘤及其在口腔鳞癌中的研究进展进行综述.
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晚期非小细胞肺癌靶向治疗的优化
近年来,以铂类为基础的细胞毒性化疗成为治疗晚期非小细胞肺癌的标准治疗方案,特别是与新一代化疗药物联合,取得了一定的进步,使缓解率(RR)达15%~36%,无进展生存期(PFS)达4~6个月,中位总生存期(OS)达8~10个月,但其疗效已达平台,很难让患者获得更大的收益。随着对肿瘤分子水平的深入研究,众多促进肿瘤生长发育的基因、蛋白分子等被发现,成为肿瘤治疗的靶点,因此,靶向治疗成为非小细胞肺癌治疗的热点和方向。目前,小分子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR TKI)厄洛替尼和吉非替尼,抗血管内皮细胞生长因子单克隆抗体(anti-VEGF)贝伐单抗等已应用于临床。厄洛替尼和吉非替尼初用于一线化疗失败的非小细胞肺癌的挽救性治疗,但研究结果并不一致,有的甚至很不理想。
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血清铁蛋白检测结果差异原因分析
1943年Granick分离出铁蛋白(Ferritin).铁蛋白是一种高分子铁结合蛋白,其外壳为蛋白质,核心部分为含量不等的铁.铁蛋白分子共有24个亚基,由H亚基与L亚基以不同比例组成.
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热休克蛋白在胃黏膜保护中的作用
热休克蛋白在细胞的正常发育和多种应激状态下维持细胞的稳定性具有重要的作用.热休克蛋白有多个家族,他们的细胞内定位和功能各不相同.胃黏膜细胞常常受到食物、酒精、氧化物及幽门螺杆菌感染的刺激,胃黏膜细胞在这些应激状态下会加速热休克蛋白的合成.热休克蛋白表达在转录和翻译两个水平上进行调节.蛋白质缺乏、肾上腺素能神经功能减退将减弱其表达,而迷走神经功能的削弱会增强热休克蛋白的表达;除此之外多种外源性因素也会影响其表达.热休克蛋白对于应激性溃疡的预防、胃黏膜细胞凋亡的抑制均有一定的保护作用.本文综述了主要的热休克蛋白分子的特性、胃黏膜细胞中热休克蛋白的表达诱导、调节以及在胃黏膜保护中的作用,并探讨了热休克蛋白诱导剂作为胃黏膜保护剂的可能性.
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丙型肝炎病毒NS5A蛋白的反式激活作用研究
0引言丙型肝炎病毒(HCV)是一种单股正链RNA病毒,编码一种多蛋白分子,在病毒和宿主细胞蛋白酶的共同裂解作用下,至少裂解为3种结构蛋白(C、E1和E2)和6种非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)[1,2].NS5 A是非结构蛋白的一种,哺乳动物细胞表达的NS5A蛋白以两种形式存在,分子量分别为56 kD和58 kD.HCV NS5A是HCV基因组编码的一种为重要的具有多种生物学活性的非结构蛋白质[3-5],是HCV基因组编码的一种具有反式激活作用等多种生物学活性的非结构蛋白质.其基因序列的变异,决定部分HCV病毒株对于IFN-α治疗的疗效应答.HCV NS5A蛋白还具有结合双链RNA激酶(PKR)的生物学活性,对于HCV感染的靶细胞的细胞周期与细胞凋亡的分子生物学调节机制密切相关[6].
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乙型和丙型肝炎病毒蛋白对14-3-3蛋自信号转导的影响
0引言乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染靶细胞之后,在完成自身复制和表达的生活周期的同时,所产生的病毒大分子,如肝炎病毒的DNA/RNA和蛋白分子等这些外源性大分子,对于肝炎病毒感染的靶细胞产生一系列不同的影响[1-7].肝炎病毒大分子对于感染靶细胞的这些影响是肝炎病毒感染后致病机制的主要组成部分.因此,研究乙型和丙型肝炎病毒的核酸成分和蛋白质成分对肝细胞的影响具有十分重要的意义.由于肝炎病毒蛋白的产生,改变了肝炎病毒靶细胞的正常的信号转导途径,引起细胞的病变,甚至是恶性转化,以至于发生肿瘤[8-13].14-3-3蛋白家族是细胞主要的信号转导相关蛋白因子,研究表明,肝炎病毒对于14-3-3蛋白家族所介导的信号转导也具有显著的影响.
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吸入过敏原前后支气管哮喘患者可溶性CD86的变化及意义
嗜酸粒细胞(EOS)可作为抗原提呈细胞参与过敏性支气管哮喘(简称哮喘)的发病过程,而EOS要提呈抗原必须表达Ⅱ类主要组织相容性复合体基因编码的蛋白分子和协同刺激分子.CD86是重要的协同刺激分子之一.体外实验已证实EOS可表达一定水平的CD86[1].本组研究中,我们观测了过敏性哮喘患者吸入过敏原前、后痰液和血清可溶性CD86 (sCD86)水平的变化,探讨EOS在哮喘发病机制中可能的作用.
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全雄激素阻断前后前列腺癌细胞中Bcl-2和Bcl-XL基因表达改变
全雄激素阻断是前列腺癌(PCa)治疗的重要手段.虽然已发现一些蛋白分子涉及雄激素的调节[1],但其分子机理尚不清楚.
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受精生物学的重大突破--发现精子相关性精卵融合蛋白
受精生物学作为研究生命启动的一门学科,已成为生命科学研究的核心之一.20世纪50年代张民觉等提出精子获能理论,但受精的分子机理长期未能得到完满的解释,数十年来有关精卵融合的理论多次被修改,不少入选的蛋白分子逐一被淘汰.
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丙型肝炎病毒与细胞自噬相互作用研究进展
细胞自噬(autophagy)是细胞降解受损细胞器和错误折叠的蛋白分子,以及作为固有免疫应答的一部分来清除入侵病原体的一个动态连续的生理过程.自噬相关蛋白参与其吞噬底物的双层膜结构(double membrane vesicles,DMVs)的形成,自噬体与溶酶体融合完成自噬溶酶体的成熟,由自噬溶酶体来终完成降解底物的过程.多种因素可诱导自噬发生,如饥饿、药物、受损细胞器以及病原体等.在真核生物中细胞自噬已演变为一种应激反应,能调节细胞内能量和监控细胞器质量;同时自噬组件得到更高的分化,功能得到更好的完善,与细胞内广泛存在的信号通路相互作用并参与调节应答应激反应的多种防御机制.
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去雄对雄激素依赖前列腺癌细胞中蛋白激酶活性的影响
临床去势治疗是前列腺癌治疗的重要手段.虽然已发现一些蛋白分子涉及雄激素的调节[1],但其分子机制尚欠清楚.通过活化有丝分裂激活蛋白激酶(MAPK),然后启动转录因子而使细胞生长和增生[2].已发现MAPK激活和人肿瘤发生及恶化相关.本研究采用雄激素依赖的人前列腺癌细胞株LNCaP, 检测去除雄激素后前列腺癌细胞MAPK活性改变,以探求去除雄激素抑制前列腺癌细胞生长的分子机制.
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睾丸免疫豁免机制的研究进展
精子的产生、分化的过程是在机体的免疫系统成熟之后,却并未引起机体的免疫排斥反应,这种独特的自我免疫耐受现象的出现是对机体免疫系统的一种挑战.初,人们观察到某些染料不能被睾丸生精上皮细胞吸收,随后进行的超微及生化实验证实睾丸支持细胞之间的高度特化的紧密连接能够限制大的亲水分子尤其是蛋白分子通过细胞间隙.依据这些初步的研究结果,人们将睾丸的免疫豁免现象简单地认为是由于存在血睾屏障的缘故,血睾屏障可保护自体生殖细胞及植入睾丸内的移植组织免受免疫排斥反应.然而近来研究发现,睾丸的免疫豁免机制是一个多因素参与的复杂体系.其中物理因素和免疫因素对于建立并维持这种免疫耐受环境尤为重要.
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SOCS3在复发性流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达及意义
复发性流产( RSA)是指连续两次或两次以上的自然流产,发病率占妊娠人群的1%~5%[1],其发病机制非常复杂,包括遗传、内分泌、免疫、解剖、感染等因素[2].辅助性T淋巴(Th)细胞在RSA中作用的研究已经较为广泛,Th1/Th2型细胞因子平衡是调节母胎界面免疫耐受的关键,正常母胎界面以Th2型细胞因子占优势,若Th1/Th2型细胞因子平衡向Th1偏移可导致不良妊娠[ 3].细胞因子信号转导负调控因子3(SOCS3)是一种可被多种细胞因子诱导产生的蛋白分子,已有研究表明,SOCS3对细胞因子信号通路产生负反馈调节,参与T淋巴细胞的分化和免疫调控,是Th2型细胞因子分化诱导者[4].为了解SOCS3是否通过调控Th1/Th2型细胞因子的平衡进而对RSA发挥作用,本研究检测了SOCS3在RSA患者和健康妊娠妇女绒毛及蜕膜组织中的表达,旨在评价SOCS3在维持正常母胎免疫耐受中的作用.
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胎盘生长因子及Flt-1受体在子癎前期/妊娠期高血压发病中的作用
妊娠期高血压疾病(hypertensive disease complicating pregnancy,HDCP)的病因与发病机理至今还不十分清楚,近年来的研究发现,其发生可能与胎盘"浅着床"有关.胎盘生长因子(placenta growth factor,PLGF)丰富表达于胎盘,主要合成部位是合体滋养细胞,其特异性结合的受体为酪氨酸酶受体(fms-like tyrosine kinase,Flt-1),该受体位于血管内皮细胞和滋养细胞,使PLGF成为一个对滋养细胞有自分泌作用和对血管生长有旁分泌作用的蛋白分子,因而引起人们的注意.PLGF及其受体的表达异常可能在子癎前期的发生发展中起重要作用.本研究通过检测不同程度HDCP孕妇PLGF蛋白、Flt-1受体蛋白及二者的mRNA在胎盘中的表达情况,以探讨PLGF及其特异性受体Flt-1与HDCP的关系.