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蛇毒中趋化活性成分的分离、鉴定
蛇毒中的某些组分与趋化因子功能相似,都具有体内溶血、体外凝血的作用,可能其中含有某些趋化因子.我们利用电泳从蛇毒中分离出300多个分子量与趋化因子相近的小肽,并以此为样品库,利用趋化小室从中筛选出19种活性成分,将这19种活性成分用细胞微生理检测仪(Cytosensor)进行筛选.
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乳酸杆菌小分子抗菌肽产生菌的筛选及鉴定
乳酸链菌肽(Nisin)是由乳酸链球菌通过其核糖体合成产生的小分子抗菌肽,具有抑制细胞生长的作用,可用做食品天然防腐剂.其抑菌机制是小肽作用于细菌的细胞膜,在膜上形成离子通道,引起胞内物质的外漏使细菌失活.本文从酸菜汁中分离筛选出的乳酸杆菌HD1.7也能合成小分子抗菌肽,并且抑菌范围广.本研究扩大了小分子抗菌肽高产菌株的选育范围,有一定的实用意义.
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核糖体展示技术的原理与应用
通过构建分子文库(cDNA文库、随机肽库、抗体库及其它蛋白文库),采用合适的筛选技术可以非常方便、有效、快速地筛选生物活性物质.目前分子文库技术已经广泛应用于抗原表位分析、功能小肽分子(如肽类拮抗剂和激动剂)或功能蛋白分子(如抗体)的筛选和改造等领域.筛选技术主要有两类:1. 体内筛选技术,如噬菌体展示技术[1]、选择性感染噬菌体技术[2]等.
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小肽的吸收转运机制及生理学作用
小肽是蛋白质在胃肠道消化时的终产物中的主要组分之一,在蛋白质营养中具有重要作用.目前研究表明小肽可直接被肠道吸收进入循环系统,这也是体内蛋白质吸收的主要形式,但其转运体系与氨基酸的转运体系相互独立.本文就小肽的吸收转运体系、其用于肠内营养的优点及一些具有重要生理意义的小肽一一进行阐述.
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小肽促进α-突触核蛋白正常折叠的研究
目的:在大肠杆菌中研究小肽促进α-突触核蛋白(α-synuclein, α-Syn)(Α53T, S129Α)的正常折叠.方法:利用分子生物学和生物信息学技术,以α-Syn的疏水区域为基础,设计了4种小肽(Pn:P1~P4);构建融合蛋白α-Syn-GFP,使α-Syn基因位于GFP上游,各种小肽以双顺反子方式与α-Syn-GFP共同表达;以文献报道的有效促进α-Syn正常折叠的小肽Pc(MGGΑVVTGR)为对照,利用融合蛋白折叠在细菌中可视化技术研究小肽Pn影响α-Syn(Α53T, S129Α)的正常折叠的效果.结果:4种小肽均能更好地促进α-Syn(S129A)的正常折叠;和对照Pc相比,小肽P2(MRGGΑVVTGR)使α-Syn(A53T)正常折叠提高了10%,小肽P4(MRVGGΑVVR)使α-Syn(S129A)正常折叠提高了83%.结论:在大肠杆菌中,小肽可以不同程度的促进α-Syn(Α53T, S129Α)的正常折叠.
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人可溶性B淋巴细胞刺激因子结合小肽的筛选及其免疫抑制功能分析
目的筛选和鉴定B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的抑制性小肽.方法用重组人BLyS筛选噬菌体构象型7肽库,人工合成小肽鉴定其免疫抑制功能.结果经过筛选,得到两个阳性噬菌体克隆,人工合成的两个小肽在体外能特异性地抑制BLyS刺激细胞增生的活性.结论获得了两个能够抑制BlyS功能的小肽.
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hepcidin、铁代谢与感染
hepcidin是一近期确认的具有抗菌活性的小肽,是铁代谢的关键调节因子之一.体内铁的平衡与机体免疫力密切相关,过量的铁会损伤机体免疫力,使机体易受需铁细菌感染.hepcidin下调血清铁的浓度,增强机体抵御需铁细菌的能力,发挥其辅助抗菌作用.
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携带小肽的超声微泡造影剂制备方法学研究
目的:利用小肽的寻靶功能,制备携带精氨酸-精氨酸-亮氨酸的超声微泡造影剂Sonovue.方法:首先应用化学合成法制备"精氨酸-精氨酸-亮氨酸"小肽,将小肽稀释后与造影剂Sonovue微泡等体积均匀混合,调节pH值在4~5,放入4~5℃的冰箱,每30 min振荡1次,使其均匀混合,孵育3 h后洗涤3次.应用微泡荧光标记方法将一定量的荧光分子探针置于混合液中,按倍比稀释法配制成不同浓度的溶液,并进行涂片,在荧光显微镜下观察标记微泡的荧光亮度、并与普通Sonovue造影剂对照,观察"精氨酸-精氨酸-亮氨酸"小肽与标记荧光后微泡的结合浓度、分布、大小、形态. 结果:光镜下普通的Sonovue超声造影剂与化学合成的精氨酸-精氨酸-亮氨酸能紧密偶联.结论:携带精氨酸-精氨酸-亮氨酸的超声微泡造影剂Sonovue的制备成功,为靶向超声造影剂的研制奠定了一定的基础.
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99Tcm标记抗VEGF多肽ATWLPPR及其在正常小鼠体内生物学分布
血管内皮生长因子(VEGF)及其受体在肿瘤血管生成过程中发挥关键作用,已成为肿瘤诊断与治疗中一个新的靶向目标.丙氨酸-苏氨酸-色氨酸-亮氨酸-亮氨酸-精氨酸(Ala-Thr-Trp-Leu-Pro-Pro-Arg,ATWLPPR)是从随机噬菌体随机七肽库构建的合成肽库中筛选出来的小肽,能阻断VEGF与细胞表面受体的结合[1].故探讨ATWLPPR的锝标记方法以及标记物在正常小鼠体内的分布,对研究恶性肿瘤的早期、特异性诊断有积极的意义.
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开发小肽,筛选新药
讨论了从大分子蛋白质类药物到小分子肽类药物的必要性和可能性.介绍了5种目前已经使用的得到小肽类药物的方法,并强调要筛选到肽类药物的关键是建立有效的筛选模型.
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广西五步蛇毒小肽的分离纯化及抗肿瘤作用
目的:从广西五步蛇毒分离出小分子活性组分,研究其对肿瘤细胞株的抑制作用.方法:经Sephadex G-75凝胶过滤、超滤和DEAE-Sepharose-CL-6B离子交换层析法从广西五步蛇毒中分离纯化获得一种小分子的肽类,采用MTT法检测其对多种体外培养的癌细胞株的生长抑制情况.结果:从广西五步蛇毒中分离纯化得到的单一的小肽,其对卵巢癌细胞株(A2780)、人胃癌细胞(SGC-7901)以及鼠乳腺癌细胞株(782)有抑制作用并呈明显的剂量依赖关系,作用 24 h 的IC50分别为 0.264、0.648、0.173 μg/mL.结论:应用凝胶过滤和离子交换层析方法可以从广西五步蛇毒中分离出单一组分的小分子肽,其对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用.
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抗菌肽的研究现状和应用前景
抗菌肽(antibacteial peptides)又叫抗微生物肽(antibacteial peptides)、肽抗生素(peptide antibiotics),是指氨基酸数目小于100,常带正电荷,并且具广谱抗性的一类小肽[1].它是生物体内产生的一具有强抗菌作用的阳离子多肽,是生物先天免疫的重要组成成分[2].迄今为止,已在许多生物包括昆虫、鸟类、动物、植物及原核生物中发现600多种内源性抗菌活性肽[2].
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基于人HMGB1-B box的抑制性小肽筛选及其抗炎功能分析
目的 从噬菌体构象型7肽库中筛选人HMGB1-B box的抑制性小肽.方法 以重组人HMGB1-B box为靶分子对噬菌体构象型7肽库进行6轮亲和筛选,获得B box结合的克隆,并经ELISA验证.选取亲和力高的克隆进行DNA测序,并推导出呈现的多肽序列,通过IL-6 ELISA检测噬菌体呈现的小肽对人HMGB1-B box致炎功能的抑制作用.结果 经过6轮亲和筛选,噬菌体的回收率增加,阳性克隆得到富集.挑选15个结合力强的克隆进行测序,推导出2个多肽序列.所获两个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制人HMGB1-B box刺激THP-1细胞产生炎症因子的能力.结论 获得了噬菌体呈现的能够抑制人HMGB1-B box的两个小肽.
关键词: HMGB1-B box 噬菌体肽库 小肽 -
水蛭活性溶液脱腥脱色工艺研究
目的:采用不同方法对3种水蛭活性溶液进行脱腥脱色处理,评选出优工艺方法.方法:采用羟丙基-β-环糊精、β-环糊精、粉末(颗粒)活性炭、高岭土、酵母粉为脱腥脱色材料研究了3种水蛭活性溶液的脱腥脱色工艺方法,并以感官评分、有效肽含量、物质活力单位为指标,得出优脱腥脱色方法.结果:粉末活性炭-高岭土方法、酵母粉发酵方法的脱腥脱色效果良好,有效肽含量可以达到80%左右,活力基本不变,达到了脱腥脱色的目的.结论:粉末活性炭-高岭土方法、酵母粉发酵方法的脱腥脱色效果良好,为水蛭的后期开发利用奠定基础.
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EGFR模拟表位肽筛选及其生物学活性鉴定
目的:帕尼单抗(Panitumumab)可抑制EGFR信号通路,临床用于治疗EGFR高表达的转移性结直肠癌患者。本研究以帕尼单抗为靶分子,应用噬菌体展示肽库进行筛选,获得可模拟与帕尼单抗结合的EGFR表位小肽,并对模拟表位肽的活性进行了初步鉴定。方法:应用噬菌体展示肽库技术筛选可与帕尼单抗结合的噬菌体单克隆,并对阳性噬菌体克隆进行DNA测序鉴定,获得对应的EGFR模拟表位肽序列。通过基因重组、蛋白表达、纯化,获取该小肽与GST的融合蛋白,并通过ELISA,免疫共沉淀和GST-Pull down检测小肽与帕尼单抗的结合,及其对帕尼单抗结合EGFR的竞争抑制作用。结果:通过筛选噬菌体肽库我们获得两种可同帕尼单抗特异性结合的噬菌体单克隆,P19和P26。应用基因重组技术构建GST-小肽融合蛋白表达载体,并在BL21中表达融合蛋白GST-P19、GST-P26。免疫共沉淀(Co-IP)以及GST-pulldown结果初步提示帕尼单抗同GST-P19和GST-P26具有相互作用。ELISA竞争抑制实验结果证明P19和P26可明显抑制帕尼单抗和EGFR蛋白的结合。结论:通过筛选噬菌肽库获得的帕尼单抗特异性结合性小肽有望成为新型EGFR肿瘤疫苗。
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精氨酸加压素的临床应用
精氨酸加压素(arginine vasopressin,AVP)是人体下丘脑合成的一种由九个氨基酸组成的小肽,其在渗透压调节、心血管功能控制中具有重要作用.自被成功分离及合成以来,AVP得到了广泛的研究与应用.目前已成功用于血管扩张性休克、心肺脑复苏、尿崩症及出血性疾病的治疗.本文主要就AVP临床应用作一综述.
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AEYLR小肽修饰的紫杉醇纳米结构脂质载体的制备及抗肿瘤效果评价
目的:制备序列为丙氨酸-谷氨酸-酪氨酸-亮氨酸-精氨酸(简称为"AEYLR")的小肽修饰的紫杉醇(PTX)纳米结构脂质载体(A-P-NLC),并对其体内外抗肿瘤效果进行评价.方法:采用熔融乳化-低温固化法制备纳米结构脂质载体(NLC)、PTX纳米结构脂质载体(P-NLC)和A-P-NLC,表征其外观形态、粒径、多分散指数(PDI)、Zeta电位,并检测其包封率、载药量及体外释放度;以NCI-H1299细胞和S180细胞为对象,采用CCK-8法对游离PTX、P-NLC、A-P-NLC(0.44~44.00μg/mL,以PTX计)的细胞抑制作用进行考察,并计算其半数抑制浓度(IC50);以S180荷瘤小鼠为模型动物,对游离PTX、P-NLC、A-P-NLC(5 mg/kg,以PTX计)的抑瘤效果进行评价.结果:P-NLC和A-P-NLC外观均呈类圆形、分布均匀;A-P-NLC的粒径、PDI、Zeta电位分别为(43.92±0.76)nm、0.203±0.034、(-19.77±1.16)mV,较P-NLC有所增加;A-P-NLC的包封率、载药量分别为(95.71±0.68)%、(1.97±0.25)%,较P-NLC有所降低;A-P-NLC在48 h内累积释放百分率达(35.17±2.08)%,较游离PTX表现出明显的缓释作用,且比P-NLC的释放更缓慢.与游离PTX和P-NLC比较,相同质量浓度的A-P-NLC对NCI-H1299细胞和S180细胞的抑制率大部分均显著升高,IC50值均显著降低;A-P-NLC给药处理的S180荷瘤小鼠无死亡现象,一般状态良好,且瘤体积显著缩小、瘤质量显著降低、瘤质量抑制率显著升高(P<0.05或P<0.01).结论:A-P-NLC具有明显的缓释作用,其对NCI-H1299细胞和S180细胞的体外抑制作用以及对小鼠S180实体瘤的抑制作用均优于游离PTX和P-NLC,且毒性有所降低.
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从噬菌体构象型7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽
目的:从噬菌体构象型7肽库中筛选BLS的抑制性短肽.方法:用重组人BLyS筛选噬菌体构象型7肽库,用间接ELISA、竞争ELISA和细胞增殖活性试验鉴定噬菌体克隆.结果:经过3轮亲和筛选,噬菌体的回收率增加,阳性克隆得到富集.所获两个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制BLyS刺激细胞增殖的活性.结论:获得了噬菌体呈现的能够抑制BLyS的两个短肽.
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白血病患者血浆内皮素测定的临床意义
内皮素(ET)是由21个氨基酸组成的单链小肽,有3种同种多肽,其中ET来源于血管内皮细胞,具有强烈的缩血管作用,对心肌和血管平滑肌亦有明显的促增殖作用,为血管内皮细胞的主要标志之一.ET作为内源性因素,在各系统疾病中的发病作用日益受到重视.我们应用放射免疫法测定了79例白血病患者血浆ET浓度,探讨其临床意义.