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B淋巴细胞刺激因子及其免疫调节作用进展
从多个角度探讨了hsBLyS对免疫细胞特别是B淋巴细胞的发育分化乃至整体免疫系统的调控作用及其作用机制.
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Tα146-162-iMDC对实验性自身免疫性重症肌无力中B细胞活化的影响
目的 通过测定B淋巴细胞激活因子(BLyS)及TNF家族B细胞活化因子受体(BAFF-R)在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)小鼠模型脾脏及淋巴结中的表达.探讨不成熟树突状细胞(iMDC)负载免疫优势肽段Tα146-162对MG中B细胞活化的影响.方法 诱导小鼠骨髓细胞分化为iMDC并以其负载Tα146-162.将C57BL/6J小鼠随机分为发病组(A)、干预组(B)、正常对照组(C),每30 d以电鳗来源的乙酰胆碱受体(TAChR)免疫A组和B组,共3次,每次免疫后3 d以Ta146-162-iMDC皮下注射B组.第90天终止实验,用RT-PCR法检测脾脏BLyS、BAFF-R mRNA的表达.结果 (1)A组模型成功率75%,平均临床评分1.67分,B组分别为25%和0.33分,差异有统计学意义(P<0.01).(2)脾脏中BLyS mRNA的表达水平A组较C组明显上调(P<0.01),B组亦高于C组(P<0.05),但相对A组降低(P<0.01).(3)脾脏中BAFF-R mRNA的表达水平A组及B组相对C组下调(P<0.05),且A组显著低于B组(P<0.05).结论 应用Tα146-162-iMDC干预能降低EAMG的发病率及发病程度,其机制可能与BLyS/BAFF-R调控的B细胞活化密切相关.
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抗人BlyS嵌合抗体的研制及功能鉴定
目的:在具有中和功能的母本抗体基础上,进行人源化改造,获得具有相同功能的嵌合抗体.方法:本研究以一株具有中和活性的抗人BlyS鼠单抗(B20)为母本,将抗人BlyS鼠单抗B20的轻、重链可变区基因分别插入到含有人κ链和IgG1重链恒定区基因的真核表达载体中,构建了人-鼠嵌合抗体表达载体,转染真核细胞,通过ELISA、RT-PCR、免疫印迹、体外中和实验分别对嵌合抗体(CB20)进行检测.结果:RT-PCR结果显示,转染后细胞系有人-鼠嵌合抗体mRNA的转录;ELISA、免疫印迹实验鉴定表明,该嵌合抗体与人BlyS特异性结合;体外中和实验表明,此抗体能中和BlyS对B淋巴细胞促增殖效应.结论:成功地构建人-鼠嵌合抗体CB20.
关键词： BLyS 人-鼠嵌合抗体CB20 真核表达 中和抗体 -
B细胞活化因子在免疫性疾病中的研究进展
B细胞活化因子(BAFF)也称为B淋巴细胞刺激因子(BLyS),是1999年Schneider首次发现的肿瘤坏死因子超家族成员之一,把它命名为BAFF,先后有几个不同的实验室发现了该因子,因此以不同的名字命名.BAFF参与体液免疫,可以诱导B细胞的增殖、分化及生存,同时发现BAFF还可以参与T细胞的活化和应答.
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哮喘患者血清B细胞激活因子的异常表达及其临床意义
B细胞激活因子(B-cell activating factor,BAFF)又称B淋巴细胞刺激因子(B Lymphocyte Stimulator,BLyS),是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的成员,其主要作用是调节B细胞的功能,在B细胞的活化、增殖以及存活时间等方面发挥重要作用,同时作为共刺激因子调节T细胞的活化和应答.
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一株抗人BLys单克隆抗体的制备及其生物学功能研究
研究以稳定高表达BLys的基因转染细胞L-BLys为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,L-BLys细胞和天然表达BLys的HL60细胞为抗体筛选阳性细胞株,经免疫荧光标记分析反复筛选和以有限稀释法反复克隆化培养.将获得的克隆4F7培养细胞注射入经致敏的小鼠体内,抽取的腹水经Protein G亲和层析柱纯化.将纯化所得的抗体作用于经BLys分子刺激的扁桃体B细胞,3H-TdR检测细胞的增殖效率.结果获得1株持续、稳定分泌鼠抗人BLys单克隆抗体的杂交瘤细胞株.该细胞株所分泌的抗体能阻断膜型和可溶性BLys分子对扁桃体B细胞的促增殖作用.对这株单克隆抗体生物学功能的研究表明,这株单抗能特异性识别人BLys分子及阻断膜型和可溶性BLys发挥生物学活性.
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人Blys转染细胞对B细胞功能的影响
利用RT-PCR方法从经IFN-γ激发的正常人外周血单核细胞总RNA中扩增出全长Blys cDNA,继而将Blys cDNA插入真核表达载体逆转录病毒载体pSIV1中.以脂质体转染法将重组逆转录病毒载体与两个辅病毒载体共转染包装细胞293T,将含完整病毒颗粒的上清转染小鼠成纤维细胞L929,经G418筛选获得稳定表达Blys分子的L929细胞;RT-PCR和流式细胞术检测证实Blys分子在L929的稳定和高水平表达.继而以该转染细胞与PWM驱动的人扁桃体B细胞共培养,体外实验表明Blys介导的共刺激信号能促进该培养体系B淋巴细胞增殖,与抗μ抗体信号协同能刺激B细胞分泌IgG.
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异源性Th表位修饰的CTLA4-Ig-msBlys构建及融合蛋白表达
目的 构建异源性Th表位修饰的CTLA4-Ig-msBlys的原核表达质粒,并在E.coli BL21中诱导融合蛋白表达,初步检测蛋白特性.方法 采用PCR法从质粒pCMV-sBlys扩增sBlys片段,将与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th 表位重组后的msBlys连接CTLA4-Ig片段,克隆人pGEX-KG原核表达载体,用LB固体培养基抗生素筛选、酶切并经琼脂糖凝胶电泳鉴定;将质粒pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys转入E.coli BL21菌株中,实现插人基因的融合表达,用SDS-PAGE 和Western blot检测表达产物.结果 pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys构建正确且终转人E.coli BL21,得到融合蛋白的表达;CTLA4-Ig-msBlys融合蛋白在E.coli中获得表达,表达产物的相对分子质量同预期值一致.结论成功构建原核表达质粒pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys,并在E.coli BL21表达CTLA4-Ig-msBlys融合蛋白,为下一步探讨Blys在自身免疫性疾病患者的治疗作用莫定了基础.
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慢性HCV感染者血清B细胞激活因子水平的检测及其意义
B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLys)主要作用是刺激B淋巴细胞增殖、分化和分泌抗体,其正常表达对维持依赖和不依赖T细胞抗原刺激的B细胞活化和增殖至关重要.但BLys的过度表达可促使B淋巴细胞不断增殖并分泌自身抗体增多,从而导致一系列自身免疫性疾病BAFF及相关疾病.本研究旨在探讨BLys血清水平与HCV感染者自身免疫的关系.
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人BLyS基因克隆、表达和抗人BLyS单克隆抗体的制备
[目的]研制抗人BLyS单克隆抗体,以进一步探讨人BLyS与自身免疫性疾病的关系.[方法]将人BLyS基因克隆到融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒pGEX-4T-1/hBLyS,用此重组质粒转化大肠杆菌BL21,加IPTG诱导大肠杆菌表达GST-hBLyS融合蛋白,用此融合蛋白免疫BALB/c鼠,取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用ELISA法筛选阳性克隆,用免疫印迹和流式细胞仪进一步鉴定抗体的特异性.[结果]重组质粒双酶切结果和DNA序列测定以及表达蛋白SDS-PAGE电泳结果表明,pGEX-4T-1/hBLyS重组质粒可以正确表达GST-hBLyS融合蛋白;ELISA、免疫印迹和流式细胞仪检测结果表明,1c6杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体可以特异性结合人T淋巴细胞膜表面BLyS的膜外区,属于IgG2b亚类.[结论]所获得的单克隆抗体具有能够结合人T淋巴细胞上的BLyS特异性,可用于研究人BLyS与自身免疫性疾病的关系.
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rAAV-T-bet转染对实验哮喘小鼠Blys水平的影响
目的 观察携带T-bet基因的重组腺相关病毒(rAAV-T-bet)对卵清蛋白(OVA)诱发的哮喘模型小鼠Blys水平的影响,探讨T-bet基因传递对哮喘的免疫调节作用.方法 将40只Balb/c小鼠随机分为模型对照组(A组)、T-bet干预组(B组)、eGFP对照组(C组)、正常对照组(D组).用ELISA法检测小鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)和脾细胞上清液中Blys的水平.结果 A、C组BALF中Blys水平比正常对照组显著下降(P<0.05).rAAV-T-bet干预后,BALF中Blys水平明显增高,并具有统计学意义(P<0.05).各组小鼠血清和脾细胞上清液中Blys的水平变化类似BALF.结论 应用rAAV-T-bet的哮喘小鼠气道炎症有明显减轻,其机制可能与表达的T-bet上调Th1/Th2比值,进而调整机体的免疫平衡有关.
关键词： rAAV-T-bet 哮喘 BLyS -
狼疮2号方治疗缓解期系统性红斑狼疮的临床研究
目的:研究中西医结合治疗对系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中B淋巴细胞刺激因子(Blys)的影响,并将其前后差值与系统性红斑狼疮活动指数( SLEDAI)积分差值进行相关及回归分析,了解其对SLEDAI的敏感性.方法:将78例缓解期SLE患者分为狼疮2号方加西药治疗的中西药结合治疗组和单纯西药加安慰剂治疗的对照组.结果:两组中医症候疗效评价的比较,治疗组优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)；Blys差值与SLEDAI积分差值相关系数为0.936,两者高度相关,差异有统计学意义(P＜0.05)；以Blys差值为自变量,SLEDAI积分差值为因变量进行线性回归分析,其线性回归模型成立(P＜0.05),提示Blys可能是红斑狼疮总体疗效评价的相关敏感指标.结论:Blys可能是红斑狼疮总体疗效评价的相关敏感指标.中西医结合治疗优于单纯西药治疗.
关键词： 系统性红斑狼疮 狼疮2号方 BLyS 系统性红斑狼疮活动指数 -
从噬菌体构象型7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽
目的:从噬菌体构象型7肽库中筛选BLS的抑制性短肽.方法:用重组人BLyS筛选噬菌体构象型7肽库,用间接ELISA、竞争ELISA和细胞增殖活性试验鉴定噬菌体克隆.结果:经过3轮亲和筛选,噬菌体的回收率增加,阳性克隆得到富集.所获两个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制BLyS刺激细胞增殖的活性.结论:获得了噬菌体呈现的能够抑制BLyS的两个短肽.
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银苓消肿丸对湿热痹阻型类风湿关节炎患者血清IL-1、IL-6、BlyS表达的影响
目的:观察银苓消肿丸对湿热痹阻型类风湿关节炎的临床疗效及对外周血中白细胞介素(IL)-1、IL-6和B淋巴细胞刺激因子(BlyS)的影响.方法:将100例湿热痹阻型类风湿关节炎患者随机分为治疗组和对照组,每组50例.对照组采用来氟米特和甲氨蝶呤治疗,治疗组在对照组的基础上加用银苓消肿丸治疗.2组均以16周为1个疗程.观察2组临床疗效及治疗前后晨僵时间、关节压痛数、关节肿胀数、红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、IL-1、IL-6、BlyS的变化.结果:治疗组显效8例,有效17例,改善22例,无效3例,总有效率为94.00%;对照组显效6例,有效14例,改善19例,无效11例,总有效率为78.00%.2组比较,差异有统计学意义(P<0.05).治疗后,2组晨僵时间、关节压痛数、关节肿胀数、ESR、CRP、IL-1、IL-6、BlyS含量较治疗前均有改善(P<0.01或P<0.05),且治疗组优于对照组(P<0.05).结论:慢作用抗风湿药联合银苓消肿丸治疗类风湿关节炎具有较好的临床疗效,对改善关节功能及降低活动期炎性指标具有较好的作用,且能明显降低外周血清中IL-1、IL-6、BlyS的表达水平.
