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壳寡糖与D-氨基葡萄糖盐酸盐体外对小鼠淋巴细胞和腹腔巨噬细胞作用的比较
目的:观察壳寡糖和D-氨基葡萄糖盐酸盐(GAH)体外对小鼠免疫细胞作用.方法:应用MTT法观察体外壳寡糖和GAH对小鼠脾淋巴细胞细胞增殖的影响,应用巨噬细胞吞噬中性红试验观察壳寡糖和GAH对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响.结果:GAH浓度在200、100mg·L-1时,能显著促进ConA诱导的小鼠脾细胞增殖,壳寡糖浓度为200,40mg·L-1时,能增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力.结论:结果表明壳寡糖和GHA对免疫细胞的调节作用是通过不同的途径实现的.
关键词： 壳寡糖 D-氨基葡萄糖盐酸盐(GAH) 淋巴细胞增殖 巨噬细胞 -
肌力康饮对正常小鼠免疫功能的影响
目的:观察中药复方肌力康饮对正常小鼠免疫功能的影响.方法:小鼠随机分为6组,即正常对照组,地塞米松组(0.25mg/kg·d),环磷酰胺组(80mg/kg·d),肌力康饮低、中、高剂量组(2、4、8g/kg·d).给药14天后,测定免疫器官指数来观察肌力康饮对免疫器官的影响；应用刀豆球蛋白A(ConA)、细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠淋巴细胞增殖,观察肌力康饮对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响.结果:与对照组比较,地塞米松、环磷酰胺均能显著降低小鼠胸腺和脾脏指数,对ConA、LPS所诱导小鼠脾T、B淋巴细胞增值有明显抑制作用(P＜0.01)；肌力康饮各剂量组胸腺和脾脏指数稍降低,但无显著性差异,中、高剂量组能显著增强小鼠脾T、B淋巴细胞增值能力(P＜0.01).结论:肌力康饮对正常免疫器官没有抑制作用,对细胞免疫和体液免疫有显著的增强作用.
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守宫木提取物对小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞功能的影响
守宫木[Sauropus androgynus(L)Merr,SA],大戟科守宫木属,别名天绿香、树仔菜、树菜、越南菜和泰国枸杞菜等,在我国华南地区和东南亚地区有较长食用历史~([1]).郭巨先等~([2])曾对小鼠的实验研究表明守宫木可能有一定蓄积毒性,不适宜作为蔬菜长期日常食用,这项研究结果的公布引起媒体、市民和商家的极大反响.
关键词： 守宫木 淋巴细胞增殖 Th1/Th2细胞因子 吞噬功能 -
MTS-PMS法测定脾细胞增殖及NK细胞活性的实验条件优化
四唑蓝比色法(MTT法)是检测小鼠脾淋巴细胞增殖实验比较常用的方法.但采用该方法检测悬浮生长细胞增殖活性时,取出培养上清液时容易将培养的细胞一同去除,导致误差,对形成的甲瓒产物需加入二甲基亚砜(DMSO)溶解后方可测定,操作步骤不易执行,造成实验结果不稳定,实验耗时长.MTS-PMS法检测细胞生长活力是美国学者Buttke[1]于1993年建立的.MTS [3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-5(3-羧甲酯基l)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑,内盐]是新合成的四唑氮衍生物,和MTT属于同类物质,其应用原理也相同.将MTS-PMS直接加入板孔的培养基中,孵育一段时间后,吸光度值可用酶标仪直接测得[纠,因而减少了实验误差,提高了数据的稳定性.本实验拟采用MTS-PMS法,以小鼠淋巴瘤细胞(YAC-1)和小鼠肝癌细胞(H22)作为靶细胞,探讨测定NK细胞活性的佳实验条件,为NK细胞活性检测提供更为稳定的实验方法.
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小鼠可溶性PD-1的克隆、原核表达及活性分析
目的:小鼠可溶性PD-1(sPD-1)原核表达载体的构建、表达、纯化及其生物学效应初步研究.方法:应用小鼠脾细胞总RNA,采用RT-PCR克隆sPD-1基因,将其重组到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达载体pGEX-4T-1-sPD-1,转化至E.coliDH5α,筛选阳性菌落,进行酶切及测序鉴定.将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-sPD-1转化至E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测,同时通过蛋白质纯化仪纯化GST-sPD-1融合蛋白.利用流式细胞术和Alamar Blue法,检测纯化的sPD-1融合蛋白对淋巴细胞增殖的影响,评价其生物学活性.结果:成功构建重组质粒pGEX-4T-1-sPD-1,并在E.coli BL21(DE3)中获得了成功表达,利用蛋白质纯化仪得到纯化的GST-sPD-1融合蛋白.流式细胞术和Alamar Blue法结果均显示,不同浓度的融合蛋白作用于混合淋巴细胞,与阴性对照相比,可明显促进淋巴细胞的增殖.结论:成功地克隆、表达和纯化了小鼠sPD-1蛋白,纯化的重组蛋白可有效促进淋巴细胞增殖,为进一步研究其功能和临床应用提供了条件.
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资木瓜皂苷提取工艺优化及对大鼠佐剂性关节炎抗炎免疫机制研究
目的:研究资木瓜皂苷(SCS)提取工艺的优化及对大鼠佐剂性关节炎(AA)抗炎作用及免疫机制.方法:以SCS的提取总量为考察指标,采取正交试验法考察乙醇浓度、溶媒用量、提取时间、提取次数4个因素,每个因素设置三个水平.流式细胞术检测SCS对AA外周血CD4+、CD8+表达水平,MTT法检测SCS对AA外周T淋巴细胞增殖的影响.结果:SCS佳提取工艺为乙醇浓度70%,溶媒容量10倍,提取时间1 h,重复提取3次,提取得率为1.7%,对SCS得率有明显影响是提取次数及乙醇浓度;SCS能降低AA外周血CD4+表达水平,对CD8+表达水平无明显影响,对AA外周T淋巴细胞增殖有抑制作用.结论:佳提取条件为A2B1C2D3,SCS通过抑制T淋巴细胞增殖和降低CD8+表达水平而发挥抗炎免疫作用.
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养阴益气合剂对正常及糖皮质激素免疫抑制小鼠免疫功能的调节
目的研究养阴益气合剂对正常及外源性糖皮质激素免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用.方法实验应用外源性糖皮质激素肌肉注射小鼠造成免疫抑制后,灌服养阴益气合剂,高剂量组(10g生药/kg体重)、中剂量组(5g生药/kg体重)、低剂量组(2.5g生药/kg体重).采用淋巴细胞体外培养和甲基噻唑基四唑(MTT)法测定T、B淋巴细胞的增殖,中性红吞噬法测定腹腔巨噬细胞吞噬作用和NK细胞的细胞毒作用.结果养阴益气合剂对正常小鼠的T、B淋巴细胞的增殖及巨噬细胞的吞噬活力均无明显的提高作用;但对免疫抑制小鼠,养阴益气合剂高、中、低三剂量均可协同伴刀豆蛋白A(ConA)和细菌脂多糖(LPS)促进小鼠T、B淋巴细胞的增殖,增殖率分别是模型组的132.6%、82.8%、21.7%及110%、63.4%、19.7%;同时对免疫抑制小鼠的NK细胞杀伤活性及巨噬细胞吞噬活力都有一定的提高作用,分别比模型组提高77.9%、57.4%、17.6%及57.3%、9.3%、14.7%;养阴益气合剂还可提高免疫抑制后小鼠的脾指数,高、中剂量组分别比模型组提高89.3%、42.9%,在统计学上均有显著性差异. 结论提示养阴益气合剂对免疫功能低下者的特异性和非特异性免疫功能都有明显促进作用.这一结果为临床上提高SARS患者免疫功能及改善SARS患者外源性糖皮质激素治疗后免疫力低下状态提供了理论依据.
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健脾除湿汤抗炎及免疫调节作用研究
目的 观察健脾除湿汤的抗炎及免疫调节作用.方法 将ICR小鼠按不同实验方法随机分成不同药物组.用大黄造成小鼠脾虚模型,在脾虚模型上观察了健脾除湿汤对小鼠皮肤毛细血管通透性、小鼠足跖肿胀、小鼠皮肤迟发超敏反应、淋巴细胞增殖功能、腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响.此外还观察了对小鼠皮肤瘙痒的作用.结果 健脾除湿汤高、中剂量组能明显抑制小鼠皮肤毛细血管通透性增高(P＜0.01,P＜0.05);高剂量组能减轻蛋清所致小鼠足跖肿胀(P＜0.05),减轻2,4-二硝基氟苯造成的耳廓肿胀(P＜0.05);各中药剂量组均可促进淋巴细胞增殖及提高巨噬细胞吞噬功能(P＜0.01,P＜0.05).但止痒作用不明显(P＞0.05).结论 健脾除湿汤可有效抑制小鼠炎症反应,提高小鼠免疫功能.
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金黄扶正茶对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响
目的:探讨金黄扶正茶对免疫抑制小鼠脾脏T、B淋巴细胞增殖及腹腔巨噬细胞免疫功能的影响.方法:金黄扶正茶高、中、低剂量组分别连续给昆明种小鼠ig 10 d,同时隔日sc注射环磷酰胺(30 mg·kg-1)造成免疫抑制模型.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定刀豆蛋白A(Con A)诱导脾脏T淋巴细胞增殖和脂多糖(IPS)诱导B淋巴细胞增殖的影响及自然杀伤细胞(NK细胞)和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)活性,酶法检测腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮合酶(NOS)的活性,用全自动酶标仪检测巨噬细胞吞噬中性红能力.结果:金黄扶正茶低、中、高剂量组均能显著提高免疫抑制小鼠的T,B淋巴细胞的吸光度(A,P＜0.01)；而中、高剂量组能显著提高免疫抑制小鼠NK细胞、LAK细胞活性、腹腔巨噬细胞吞噬活性及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活力(P＜0.01或P＜0.05).结论:金黄扶正茶能促进免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖,增强NK细胞、LAK细胞活性,提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性,从而增强免疫抑制小鼠的细胞免疫功能.
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清解宁对小鼠免疫功能的影响
目的:研究清解宁对小鼠免疫功能的影响.方法:用绵羊红细胞(SRBC)免疫小鼠,分别用小鼠脚掌厚度测量法观察迟发性超敏反应(DTH)、溶血分光光度法观察体外抗体形成细胞数(PFC)、微量血凝法观察溶血素、MTT法观察脾T、B淋巴细胞的增殖功能,腹腔MΦ吞噬中性红比色法观察腹腔MΦ吞噬中性红的能力.结果:清解宁能明显抑制SRBC免疫小鼠的DTH、PFC、溶血素、脾T、B淋巴细胞的增殖以及腹腔MΦ吞噬中性红的能力.结论:清解宁对SRBC免疫小鼠的免疫功能具有明显的抑制作用.
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桂枝汤对痹证小鼠T淋巴细胞的调节作用
目的:探讨桂枝汤对痹证T淋巴细胞的调节作用.方法:外周全血中T淋巴细胞亚群用免疫荧光标记流式细胞仪计数,脾脏中T、B淋巴细胞增殖功能用MTT法测定.结果:外周全血中CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞在应用桂枝汤后数量均降低,脾脏来源的T淋巴细胞对丝裂原刀豆蛋白A(ConA)激活的增殖反应系数应用桂枝汤后降低,B淋巴细胞对丝裂原细菌脂多糖(LPS)激活的增殖反应系数应用桂枝汤后无变化.结论:桂枝汤能减少外周血中T淋巴细胞的数量且对脾脏中T淋巴细胞的功能具有抑制作用.
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养阴益气合剂增强外源性糖皮质激素小鼠免疫功能的研究
目的:研究养阴益气合剂对外源性糖皮质激素免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用.方法:实验应用外源性糖皮质激素肌肉注射小鼠造成免疫抑制后,灌服养阴益气合剂,高剂量组(10g生药/kg体重)、中剂量组(5g生药/kg体重)、低剂量组(2.5g生药/kg体重).采用淋巴细胞体外培养和MTT法测定T、B淋巴细胞的增殖、中性红吞噬法测定腹腔巨噬细胞吞噬作用和NK细胞的细胞毒作用.结果:养阴益气合剂高、中、低3个剂量组均可提高免疫抑制后小鼠的脾指数,高、中剂量组分别比模型组提高89.3%和42.9%,在统计学上均有显著性差异;均可协同ConA和LPS促进免疫抑制小鼠T、B淋巴细胞的增殖,增殖率分别是模型组的132.6%、82.8%和21.7%及110%、63.4%和19.7%;同时对免疫抑制小鼠的NK细胞杀伤活性及巨噬细胞吞噬活力都有一定的提高作用,分别比模型组提高77.9%、57.4%、17.6%及57.3%、9.3%和14.7%.结果:养阴益气合剂对免疫功能低下者的特异性和非特异性免疫功能都有明显促进作用,这一结果为临床上提高SARS患者免疫功能低下及改善SARS患者外源性糖皮质激素治疗后免疫力低下状态提供了理论依据.
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天花粉多糖对人外周血单个核细胞的免疫活性作用
目的:建立天花粉多糖促人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)淋巴细胞增殖的方法,了解天花粉多糖对淋巴细胞增殖、活化作用,对T淋巴细胞亚群分群的影响和诱导产生TNF-α,IL-6水平的差异.方法:制备天花粉多糖提纯液.健康人PBMc作为药物筛选的靶细胞;采用MTT法测定不同浓度天花粉多糖(0.5,1.0,5.0,10.0,20.0,50.0 mmol·L~(-1))的促人PBMC淋巴细胞增殖作用;采用流式细胞术和ELISA法分别检测药物作用后人PBMC中T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+T细胞)的表达和诱导人PBMC分泌产生TNF-α,IL-α水平.结果:1.0-50.0mmol·L~(-1)天花粉多糖对人PBMc具有明显促增殖作用(P＜0.05);经5.0,10.0 mmol·L~(-1)天花粉多糖刺激后的人PBMC中,CD3+,CD4+,CD8+ T细胞的含量明显高于对照组(P＜0.05),1.0,5.0,10.0 mmol·L~(-1)天花粉多糖刺激人PBMc 8 h后,TNF-α,IL-6水平显著升高(P＜0.05).结论:天花粉多糖对人PBMC有明显促增殖和活化作用,不同程度地上调T淋巴细胞亚群中CD3+,CD4+,CD8+T细胞的含量,并可诱导入PBMC高水平分泌产生TNF-α,IL-6,为阐明天花粉多糖的免疫活性和作用机制奠定基础.
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中药复方别敏治疗变应性鼻炎的实验研究
目的 探索中药复方别敏对变应性鼻炎干预作用机制.方法 采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射造成变应性鼻炎小鼠模型,观察小鼠行为学变化、脾脏淋巴细胞增殖能力及血清总IgE和OVA特异性IgE含量的变化.结果 中药复方别敏能明显减少变应性鼻炎模型小鼠的抓鼻和喷嚏数;抑制植物血凝素A和OVA刺激引起的脾脏淋巴细胞增殖;降低血清总IgE和OVA特异性IgE含量.结论 中药复方别敏具有抑制脾脏淋巴细胞增殖,降低血清IgE等作用.
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当归芍药散加味方及其拆方对中老年大鼠淋巴细胞增殖的影响
目的:研究当归芍药散加味方(DSS)及其拆方对中老年大鼠淋巴细胞功能的影响.方法:选用中老年大鼠(18月龄),分组灌服DSS全方及其拆方水煎液,3周后,各组大鼠脾细胞分别加入ConA、异丙肾上腺素(ISO)、心得安或DSS大鼠血清诱导淋巴细胞增殖,用四氮唑蓝比色法比较各组大鼠淋巴细胞增殖(A值)变化.结果:全方组、君臣药组、佐药组大鼠淋巴细胞增殖的A值与对照组比较,差异有显著性(P＜0.01);加入ISO后全方组各ConA浓度A值明显减少(P＜0.01),再加入心得安或DSS大鼠血清后,A值又恢复到未加ISO水平.结论:DSS及其拆方均可促进老年大鼠淋巴细胞增殖,DSS可拮抗ISO的抑制淋巴细胞增殖作用.
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口腔鳞癌患者淋巴细胞对人疱疹病毒6型增殖应答受损
目的 研究口腔鳞癌患者淋巴细胞对人疱疹病毒6型(HHV-6)特异性增殖应答,初步探讨HHV-6在口腔鳞癌发病机制中的作用.方法 间接免疫荧光法(ⅡF)检测血浆中抗HHV-6 IgG;免疫微磁珠分离CD4+ T及CD8+ T细胞;3H-TdR法检测CD4+T和CD8+T细胞及PBMCs的增殖水平;FACS分析CD4+C25+调节性T细胞(Treg)的比例.结果 口腔鳞癌组血浆中抗HHV-6 IgG阳性数为8/8,正常对照组为12例(12/20);口腔鳞癌组PBMCs及CD4+T细胞对HHV-6的增殖水平显著低于HHV-6潜伏感染组与未感染组(P<0.05);HHV-6潜伏感染组PBMCs及CD4+T细胞对HHV-6的增殖水平显著低于未感染组(P<0.05);口腔鳞癌组外周血中CD4+C25+Treg比例明显高于HHV-6潜伏感染组与未感染组(P<0.05).结论 口腔鳞癌患者的HHV-6特异性CD4+T细胞增殖应答减弱,可能在口腔鳞癌的发生发展中起一定作用.
关键词： 人疱疹病毒6型 口腔鳞癌 淋巴细胞增殖 CD4+C25+调节性T细胞 -
HLA-G参与羊膜间充质干细胞抑制淋巴细胞增殖的机制研究
本研究旨在探讨羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,HAMSC)抑制淋巴细胞增殖的作用机制,证明人类白细胞抗原G(HLA-G)参与了HAMC的免疫抑制功能.从胎膜上分离、培养和扩增HAM-SC,用流式细胞术进行表型鉴定,同时检测膜表面和胞质中HLA-G的含量;用ELISA法检测培养上清中HLA-G的含量;MTT法检测混合培养后HAMSC对淋巴细胞增殖的影响.结果表明,HAMSC膜表面和胞质均表达HLA-G,膜表面和胞质HLA-G的含量分别是(16.75±3.871)％和(39.14 ±4.274)％,在细胞培养上清中的含量是5.2ng/ml.HAMSC及其上清加入淋巴细胞混合培养后,淋巴细胞抑制率增高,当HLA-G特异性抗体加入后这种抑制效应减低.结论:HAMSC表面和胞质都表达HLLA-G,同时也分泌HLA-G到上清液中.HLA-G是HAMSC的免疫抑制功能的关键因素之一,这为HAMSC在移植后抑制排斥反应的临床应用提供了理论依据.
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金黄葡萄球菌肠毒素A诱导的免疫应答
目的 研究超抗原金黄葡萄球菌A型肠毒素(SEA)在体内诱导的体液免疫反应、T淋巴细胞增殖及免疫无应答的规律和作用.方法 利用重组SEA蛋白免疫小鼠,酶联免疫吸咐试验(ELISA)检测特异性抗体及其亚类水平,观察两者的产生过程及变化规律.RT-PCR反应检测免疫后小鼠脾脏内细胞因子的mRNA表达水平,EUSPOT法检测rSEA对脾细胞分泌IFN-γ能力的影响,流式细胞术检测T淋巴细胞表面抑制性受体PD-1的表达.结果 BALB/c小鼠在低剂量的rSEA初次免疫后2周,即产生了高水平的特异性抗体,此时体内以体液免疫应答为主,IgG2a/IgG1＜1;而在免疫早期,Th1型细胞因子的mRNA表达水平高于Th2型,以细胞免疫应答为主.短时期内进行再次免疫后脾细胞的IFN-γ分泌频率显著下降;流式细胞仪在rSEA激活的T淋巴细胞表面检测到了PD-1(programmed death-1)分子的表达,其表达量随时间及免疫次数增加.结论 超抗原SEA初次免疫即能引起强大的体液免疫应答与细胞免疫应答;再次免疫引起了免疫无应答,这与PD-1介导的抑制作用增强有关.
关键词： 金黄葡萄球菌A型肠毒素 超抗原 淋巴细胞增殖 免疫无应答 抑制性受体PD-1 -
参麦注射液对烧伤患者外周血T淋巴细胞增殖和白细胞介素2产生的调理作用
目的 探讨参麦注射液对烧伤患者细胞介导的免疫功能的调理作用.方法 用参麦注射液治疗烧伤患者,并测定外周血T淋巴细胞增殖反应和白细胞介素-2(IL-2)产生能力,以判定其疗效.结果 用药后5 d外周血T淋巴细胞开始回升,10～20 d增殖反应明显;IL-2产生能力与T淋巴细胞增殖反应一致(P<0.05或P<0.01).结论 参麦注射液对烧伤患者细胞介导的免疫功能有调理作用.
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中药促进血虚动物白细胞增殖的药理实验研究
目的 观察中药"生白片"对小鼠血虚模型的升高白细胞、促进淋巴细胞增殖和保护DNA 免受损伤的作用.方法 以环磷酰胺制备小鼠血虚模型,以"生白片"加以治疗,观察治疗前后白细胞、淋巴细胞数量和微核细胞率的改变.结果 "生白片"组小鼠的白细胞计数为(7.470±1.852)×109/L,淋巴细胞增殖为(14768.23±8316.86)/min,骨髓细胞微核率为(6.02±1.72)‰,均明显优于血虚模型组( P＜0.01).结论 "生白片"具有明显升高白细胞、提高淋巴细胞增殖能力和降低细胞微核率的作用.
