首页 > 文献资料
-
几种肠道原虫主要表面蛋白的研究进展
在溶组织内阿米巴、隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫的致病过程中,一些表面蛋白发挥着重要的作用,介导了原虫与宿主细胞的粘附以及侵入宿主细胞的过程,本文综述了其主要表面蛋白的研究进展以及在诊断和治疗中的应用.
-
福赛斯拟杆菌与牙龈卟啉单胞菌表面蛋白间相互结合机制
福赛斯拟杆菌(Bacteroides forsythus, 简称B.forsythus)和牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromonas gingivalis,简称P.gingivalis)是人类牙髓根尖周疾病以及牙周疾病的重要致病菌,在慢性根尖周炎患牙根管内定植呈正相关关系.但两菌间相互结合的蛋白分子以及结合机制目前尚未见报道.本文采用Western blot技术探讨牙龈卟啉单胞菌与福赛斯拟杆菌相互作用及其作用机制.
-
Fba蛋白对化脓性链球菌结合FH和FHL-1的促进作用
A族链球菌(group A Streptococcus,GAS)在临床上存在着反复感染及难以治愈等问题.Cleary的研究[1]证明,GAS可以侵入细胞而逃避攻击.Fba,是一种新型表面蛋白,由M1血清型GAS 90-226分离株表达.以往研究资料显示,M1血清型GAS能通过其表面的Fba蛋白结合宿主补体旁路激活途径中协助Ⅰ因子降解C3b的两种重要蛋白FH、FHL-1,并以此促进GAS进入上皮细胞,可能与逃避抗生素作用及免疫系统攻击有关[2].本研究拟通过对5个临床分离的Fba菌株(Ⅰ~Ⅴ)的实验,了解Fba与FH/FHL-1的相互作用关系,为进一步阐明GAS致病机理提供实验依据.
-
路氏乳杆菌JCM1081黏附相关蛋白的初步鉴定
目的研究路氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri,也称罗伊氏乳杆菌)JCM1081菌体表面蛋白对其黏附HT-29细胞的影响.方法将路氏乳杆菌JCM1081菌体进行胰蛋白酶、蛋白酶K处理;用氯化锂和盐酸胍对乳杆菌表面的蛋白进行抽提,进行SDS-PAGE后与黏蛋白受体进行Western blot,并对杂交阳性蛋白进行质谱分析鉴定.结果路氏乳杆菌JCM1081菌体经胰蛋白酶、蛋白酶K处理后,其对HT-29细胞的黏附力显著下降(P<0.01);用氯化锂去除路氏乳杆菌JCM1081菌体外表面的S层蛋白后,路氏乳杆菌JCM1081对HT-29细胞的黏附力无显著变化;Western blot结果显示相对分子质量(Mr)为29×103和14×103的两种菌体表面蛋白与黏蛋白受体杂交中出现了强阳性;质谱分析结果显示29×103蛋白与路氏乳杆菌ATCC55730的lr0793蛋白相似性高达71.1%.结论路氏乳杆菌JCM1081菌体表面的蛋白参与了乳杆菌的黏附,其中29×103和14×103的两种胞壁表面蛋白能够特异地识别黏蛋白受体并与之结合,29×103蛋白属ABC转运蛋白家族.
-
B族链球菌表面蛋白Sip的制备及其免疫原性的研究
20世纪70年代以来,B族链球菌(Group B Streptococcus,GBS)成为引起新生儿感染的首位原因.疫苗是预防GBS疾病简便有效的方法,传统的荚膜多糖疫苗及单一的荚膜多糖结合疫苗因其保护作用范围有限而使其应用受到限制.用GBS表面保守的蛋白作为疫苗成分可能会对多种血清型GBS的感染提供保护作用,因此引起人们的关注.GBS表面免疫原性蛋白Sip是较保守的表面蛋白[1],本研究中用Sip的两种融合蛋白PET-Sip[2]、GP-Sip研究了Sip蛋白的免疫原性,为进一步研究Sip蛋白在GBS感染中的作用及GBS蛋白疫苗提供了基础资料.
-
编码基因pac的DNA疫苗经胃肠粘膜免疫SD鼠的研究
变形链球菌(Streptococcus mutans, S.mutans)是主要的致龋菌,细菌表面蛋白PAc是其主要的毒力因子之一.抗PAc抗体能有效阻止S.mutans在牙面的非蔗糖依赖性粘附,从而可以预防龋病的发生.DNA防龋疫苗的成功研制[1,2],给免疫防龋的粘膜免疫提供了崭新的思路.核酸疫苗经粘膜免疫可以通过共同粘膜免疫系统(common mucosal immune system, CMIS)诱导循环及粘膜特异性抗体的反应,更重要的是粘膜IgA的应答,这无疑是免疫防龋的关键所在.本实验用bupivacaine(布比卡因)作为编码变形链球菌表面蛋白pac基因的表达质粒pCIA-P的载体,经由胃、直肠粘膜免疫SD鼠,评价DNA复合体疫苗的免疫效能,探索合适的防龋途径.
-
淋病奈瑟菌NspA基因疫苗诱导小鼠特异性体液免疫应答
1999年Martin等首先克隆了淋病奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria surface protein A,NspA)基因,发现其在细胞表面持续表达,菌株之间NspA氨基酸序列的同源性高达98%,提示NspA可能是研制淋病疫苗的理想抗原.我室已成功构建NspA真核表达载体pcNspA,本文研究了pcNspA基因免疫在小鼠体内诱生特异性抗体的作用.
-
乳杆菌细胞壁表面黏附相关蛋白的提取和鉴定
目的:提取和鉴定参与乳杆菌黏附肠上皮样细胞以及粘蛋白受体的细胞壁表面蛋白.方法:采用HRP标记的粘蛋白受体以及NHS-Biotin标记的HT-29细胞与提取的乳杆菌JCM1081的细胞壁表面蛋白进行蛋白印迹,对参与黏附的细胞壁表面蛋白进行初步鉴定.结果:Western blot结果显示Mr29000和Mr14000的两种细胞壁表面蛋白在与粘蛋白受体和HT-29细胞的杂交中都出现了强阳性.结论:存在于乳杆菌JCM1081细胞壁表面的Mr29 000和Mr14 000的两种蛋白能够特异性识别粘蛋白受体和细胞膜受体,并与之结合,为乳杆菌JCM1081的黏附相关蛋白.
-
乙型肝炎病毒表面蛋白反式调节作用的研究进展
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是严重危害人类健康的全球公共卫生问题,全世界有3.5亿~4亿感染者,其中20%~25%出现肝脏损伤,部分患者发展为肝硬化及肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC),每年因HBV感染死亡的人数为100万~200万[1-3].
-
变形链球菌表面蛋白遗传多态性与黏附作用关系的初步研究
表面蛋白P1是人类的主要致龋菌--变形链球菌(以下简称变链菌)重要的毒力因子之一,主要介导变链菌的非蔗糖依赖性黏附.不同菌株的黏附性能不同,而此差异是由其毒力因子遗传变异所决定的.我们通过对变链菌临床分离株表面蛋白P区及V区、C末端编码基因的研究,探讨其遗传多态性与黏附性能的关系.
-
含变链菌PAc蛋白编码基因保守区重组质粒pCIA-P的亚克隆构建
人类致龋菌变形链球菌(S.mutans)的一种表面蛋白PAc,由于参与介导细菌对牙面的粘附而被视作S.mutans的重要毒力因子,因此成为研制防龋疫苗的主要备选抗原.我们选择pac基因中编码PAc主要免疫活性区域的DNA序列, 制备出待表达DNA片段, 经亚克隆至pGEM-T质粒后,再克隆到高效哺乳动物表达质粒pCI中构建成含pac基因重要抗原决定簇编码区域的重组质粒,从而为防龋DNA疫苗的免疫实验研究完成了重要准备.
-
在大肠杆菌中表达和提取纯化变形链球菌GTF-Ⅰ
葡糖基转移酶是变形链球菌(S. mutans)的重要致龋毒力因子,其中gtfB基因编码的GTF-Ⅰ能够催化水不溶性葡聚糖的合成,介导变链菌与牙面的蔗糖依赖性粘附,在龋病的发生和发展中起重要作用.目前我们已研制了针对变链菌的表面蛋白PAc和GTF的融合防龋DNA疫苗[1],为了进一步鉴定和加强其免疫效果,我们以金属螯合亲和层析法从大肠杆菌中表达、提取和纯化了重组葡糖基转移酶GTF-Ⅰ.
-
基因治疗中反转录病毒的细胞导向性基因转移
成功的基因治疗要求将治疗基因高效、细胞特异性地传递到靶组织并稳定表达.因此需要发展细胞导向性转移基因的基因治疗载体.反转录病毒(Retrovirus,RV)是目前常用、也是成功率高的基因治疗载体,但普遍缺乏细胞导向性.RV载体靶向转移基因可以通过两种水平来实现:1.基因传递水平,利用天然或修饰RV包膜糖蛋白与细胞特异性表面蛋白的相互作用使基因定向传递到靶组织;2.基因传递水平,利用组织特异性启动子控制基因在特定组织表达.本文主要讨论RV载体在基因传递水平靶向转移基因方面的研究进展.
-
树突细胞特异性非整合素与人免疫缺陷病毒
树突细胞特异性非整合素(DC-SIGN,dendritic-cell specific ICAM-3 grabbing non-intesrin),又称CD209,是一种主要由树突状细胞(dendritic-cell,DC)汾泌的细胞膜表面分子.DC-SIGN属Ⅱ类C-型凝集素膜受体(CRL)能与细胞间黏附分子(intercelluar adhesion molecule,ICAM)以及病毒、细菌、寄生虫等多种病原结合,如能与人免疫缺陷病毒表面蛋白gp120,并介导病毒感染靶细胞.研究表明DC-SIGN在HIV传播与致病中有重要作用.
-
一氧化氮对腹膜间皮细胞表面蛋白-A表达的影响
目的:探讨在体外一氧化氮对腹膜间皮细胞表面蛋白-A(SP-A )mRNA和蛋白表达的影响.方法:Ⅱ级SD雄性大鼠,腹腔注射25 ml 0.25%胰蛋白酶消化液后,2 h后处死大鼠,获取的腹膜间皮细胞用DMEM/F12培养液(含10%FBS)培养于6孔培养板中,待细胞传致第3代时,加入不同浓度的SNAP(nirtic oxide donor)分为:正常对照组、0.6 μmol/L SNAP组、0.9 μmol/L SNAP组、1.2 μmol/L SNAP组、2.4 μmol/L SNAP组,每个组6孔,培养24 h后提取细胞RNA及蛋白;另外,将1.2 μmol/L SNAP与腹膜间皮一起培养,分别于0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h及48 h时提取细胞RNA及蛋白.分别用RT-PCR及Western blot检测腹膜间皮细胞SP-A mRNA的表达和蛋白的合成.结果:与正常对照组相比,SNAP能抑制SP-A mRNA的表达和蛋白的合成(P<0.05),且随着SNAP浓度的增高而增加,当SNAP浓度为1.2 μmol/L时,随着培养时间的增加,SP-A mRNA的表达和蛋白的合成也逐渐被抑制.结论:一氧化氮能抑制腹膜间皮细胞SP-A mRNA的表达和蛋白的合成,且呈剂量及时间依赖性.
-
变形链球菌表面蛋白可变区(V+)基因克隆与表达
目的分离变形链球菌表面蛋白可变区(V+)基因,构建V+表达克隆.方法用PCR从sr基因中扩增目的基因片段V(+),亚克隆入中间载体pCR2.1和表达载体pET21a(+).对重组体进行诱导表达并对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析.结果 PCR扩增产物为1.16kb的DNA带,亚克隆入载体,获得重组克隆pCVf和重组表达克隆pSRVf,表达产物为43kDa抗原,可以被抗Ⅰ/Ⅱ抗体特异性地识别.结论本试验成功地构建了携带V+基因片段的表达克隆pSRVf.
-
乳酸菌表面蛋白对免疫细胞的诱导增殖及粘附抑制效应
目的 研究表面蛋白在乳酸菌体外粘附和激活免疫细胞中的作用.方法 应用5 mol/L氯化锂结合盐酸胍提取植物乳杆菌LpYZU09、干酪乳杆菌LcYZU02、鼠李糖乳杆菌LrGG、发酵乳杆菌LfY-ZU15及戊糖片球菌PpYZU32的表面蛋白,并分析提取物对乳酸菌粘附鼠肠上皮细胞、巨噬细胞和脾细胞的抑制作用及诱导增殖效应.结果 表面蛋白对3种细胞粘附菌体均具有显著抑制效应,抑制作用具有细胞和菌株差异性,其中菌株LrGG表面蛋白对巨噬细胞粘附5种菌体普遍显示了较强的抑制作用,抑制率为38.7%~76.0%.不同菌株表面蛋白对肠上皮细胞的诱导增殖指数为0.05~0.35,对巨噬细胞为0.05~0.42,对脾细胞为0.02~0.40,诱导效应具有菌株和剂量依赖性,菌株LrGG的诱导增殖指数显著高于其他四种.结论 乳酸菌表面的蛋白类因子在粘附和激活免疫细胞中发挥了重要作用.
-
干酪乳杆菌LC2W表面黏附相关蛋白的提取与鉴定
目的 提取和鉴定干酪乳杆菌LC2W表面黏附相关蛋白,初步探索LC2W对胃癌细胞MKN-45细胞的黏附机制.方法 LiCl处理、Sephadex G-75柱层析分离提取LC2W的表面蛋白,用黏附试验、电镜观察和SDS-PAGE电泳进行黏附相关蛋白的鉴定.结果 LC2W经LiCl处理后,扫描电镜结果发现菌体表面粗糙但仍完整,黏附试验表明其对MKN-45细胞的黏附能力显著降低.提取到的表面蛋白的分子量分别为41.6、63.5、66.2 kDa.粗提物经柱层析后发现分子量为41.6 kDa的组分可以明显增强经LiCl处理过的菌体的黏附,而与未经处理的菌体黏附情况类似.结论 表面蛋白参与了LC2W对MKN-45细胞的黏附,其主要活性成分的分子量为41.6 kDa.
-
宿主因素与丙型肝炎慢性化
丙型肝炎病毒(HCV)感染呈世界性分布,约50%~80%可发展为慢性肝炎,部分病例可发展为肝纤维化和肝细胞癌[1,2].丙型肝炎慢性化的影响因素主要包括病毒和宿主两方面.病毒因素主要包括HCV的高度变异性、泛嗜性、基因型的差异、与抗体结合表面蛋白的缺失、HCV与脂蛋白的结合等;宿主因素包括宿主的遗传性差异、免疫耐受、CD4+和CD8+T 细胞应答低下、Th1/Th2失调、树突状细胞功能低下、中和抗体的免疫压力选择等.本文主要综述宿主相关的一些因素对丙型肝炎慢性化的影响.
-
禽流感病毒
一、禽流感流感病毒依其内部核蛋白(NP)和基质蛋白(M1)抗原性,分作甲(A)、乙(B)、丙(C)3型,禽流感(avian influenza)乃系甲型流感病毒感染而引起禽类发病的统称.甲型流感病毒又因其表面蛋白红细胞凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原性可区分亚型(H1~H15和N1~N9)(图1),例如有H1N2组合而成的亚型.