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表达绿色荧光蛋白的重组腺病毒伴随病毒的产生
来源于维多利亚水母(Aequorea victoria)的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)是近年来发现的一种新的报告基因,由于其具有产生荧光不需任何底物或辅助因子、可以活体观察等特点,因此在目前的基因转移、基因治疗研究中得到了广泛的应用[1].重组腺病毒伴随病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)具有安全性好、可介导外源基因长期稳定表达等特点,是目前比较理想的基因治疗载体.构建表达GFP的rAAV载体(rAAV-GFP)对于应用rAAV进行基因转移和基因治疗研究非常必要,如评估rAAV生产系统的生产效率、估计rAAV的转导效率、研究rAAV进入体内后的分布及表达情况等.
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光化学基因转染技术
肿瘤基因转染技术虽然发展很快,仍有许多限制因素制约着它的临床应用,特别是缺乏有效而特异的体内基因转递技术,难以保证基因转染效率.大量研究表明,尽管目前基因治疗载体种类很多,但无论病毒载体或是合成载体都存在着生物安全性、体内转染效率等方面的限制.特别是多数基因载体被靶细胞胞吞后大部分只能滞留在内吞泡中终被溶酶体降解,只有少数能从内吞泡中逸出进入胞浆,转运入核内发挥转录作用,大大影响了转染效率,难以达到预期目的[1].
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慢性乙型肝炎病毒清除自杀基因平衡制约载体系统的构建
目的:建立清除乙型肝炎病毒(HBV)自杀基因平衡制约载体系统,靶向清除HBV感染的肝细胞,抑制慢性乙型肝炎和肝硬化患者免疫再活动.方法:逆转录PCR(RT-PCR)扩增丙型肝炎病毒(HCV)基因组中核糖体插入位点(IRES),以pcDNA3载体为基础,构建双顺反子表达载体.同时在IRES位点的上游克隆HBV表面基因的部分反义序列和HCV全长核心基因,在IRES位点下游克隆胸腺苷激酶基因,PCR、酶切和测序鉴定.构建的清除乙型肝炎病毒(HBV)自杀基因平衡制约载体系统分别转染培养基含有更昔洛韦的HepG2细胞和2.2.15细胞.结果:构建的清除乙型肝炎病毒(HBV)自杀基因平衡制约载体系统可以选择性促使2.215细胞凋亡(实验组细胞凋亡率为15%,而对照组仅为6%);抑制2.2.15细胞在培养基中分泌乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg),统计学分析表明,HBsAg在培养基中检测滴度,在两组之间有显著性差异(P<0.05).结论:构建以HBV表面基因为靶基因,自杀基因为效应基因的自杀基因制约平衡系统,可能为下一步慢性乙型肝炎的基因治疗提供理想的基因治疗载体.
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减毒沙门氏菌在消化系肿瘤中的研究进展
消化系肿瘤在我国是常见的恶性肿瘤,随着现代生活节奏的加快,消化系肿瘤的发病率有增高趋势,年轻化的趋势也愈加明显.减毒沙门氏菌作为一个胞内寄生菌,本省具有抗肿瘤特性,同时可以作为肿瘤基因治疗的载体进行抗肿瘤治疗.本文就减毒沙门氏菌及作为治疗载体在肝癌、胃癌、大肠癌的体内外应用进展进行综述.
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两种启动子调控下PNP基因载体的构建和差异性表达
目的:分别构建巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)通用启动子和甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)杂合启动子[HRE]AF调控的PNP基因表达载体并检测、分析二者的差异表达.方法:将[HRE]AF启动子插入载体pcDNA3.0,构建肝癌细胞特异表达载体p[HRE]AF;将PNP基因分别插入pcDNA3.0和p[HRE]AF,构建两种启动子调控的PNP基因表达载体pcDNA3.0/PNP和p[HRE]AF/PNP;经酶切、PCR及测序鉴定各重组体.用脂质体介导法将两PNP基因载体转染不同细胞株,RT-PCR检测PNP基因在各细胞株中表达,分析二者表达的特点.结果:各目的片段均成功插入相应载体中,CMV启动子调控的PNP基因在各株细胞中均实现了表达,而[HRE]AF启动子调控的PNP基因则在AFP阳性和阴性肝癌细胞中实现了组织特异性表达.结论:两PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效的治疗载体,p[HRE]AF/PNP还实现了在AFP阳性,尤其是AFP阴性肝癌细胞中的靶向性表达.
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心肌基因治疗
经过十几年的临床前期和工期临床研究,基因治疗已真正成为冠心病和充血性心力衰竭的治疗手段,并可能会改变心脏病专家处理这两种疾病方式.本文将介绍基因治疗在缺血性心脏病和心衰中的应用,包括现有的基因治疗载体、基因传输工具、转移基因(transgene)和有关基因治疗安全及功效的认识.
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AAV诱导可耐受供肝方法学的实验研究
rAAV载体是许多肝脏疾病的有效基因治疗载体,目前的临床学研究和临床研究多应用rAAV-2载体亚型.
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阴茎勃起功能障碍的基因治疗
近20年来,随着勃起神经递质(NO等)和海绵体平滑肌功能等有关阴茎勃起机制研究的巨大进展,出现了许多治疗阴茎勃起功能障碍的方法,如西地那非等药物口服、血管活性药物海绵体注射、阴茎血管手术及阴茎假体置入等.上述方法治疗勃起功能障碍取得了较好疗效,但同时存在一些不良反应、并发症及禁忌证.因而,未来治疗勃起功能障碍的方法应该在具备良好疗效的同时,有更少的副反应和禁忌证.基因治疗的初步研究显示了美好的前景.一、基因治疗与基因治疗载体(一)基因治疗基因治疗的目标是将遗传物质导入靶细胞内,恢复细胞的正常功能,从而达到治疗疾病的目的[1].治疗过程涉及以下三个步骤:将目的基因导入体内;基因进入靶细胞及细胞核;目的基因表达.导入的目的基因可以是与缺陷基因相对应的有功能的同源基因或与缺陷基因无关但有治疗意义的基因.基因治疗的靶细胞分为体细胞和生殖细胞两类,但目前条件下还仅限于体细胞.基因型的改变只限于某一类体细胞,其影响只限于某个体的当代.
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腺相关病毒载体(AAV)在视网膜色素变性基因治疗中的应用
随着分子生物学的发展,应用基因转移技术治疗视网膜色素变性疾病成为可能。目前研究认为腺相关病毒载体(AAV)能使外源基因有效地导入感光细胞而且在细胞中稳定长期表达,而且对细胞无毒性,将有可能成为有效的基因转染工具。本文对AAV病毒的形态、生长和分子生物学特征、AAV介导的视网膜细胞基因转移、AAV病毒载体在视网膜色素变性基因治疗中的应用、以及作为基因治疗载体的优缺点进行了综述。
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口服基因治疗的创新:挑战与前景
以多肽、蛋白质、疫苗以及核苷酸为基础的生物技术药物经口服给药是当前药物递送产业中面临的大挑战.口服给药之所以极具发展前景基于以下原因:易于给药,提高病人的依从性,从而降低全程治疗费用.基因治疗的出现为治疗领域提供了一个巨大的机遇,从而激发了对于口服基因治疗研究的兴趣.在此,我们总结了当前应用的口服基因治疗载体,并重点介绍其潜在的应用领域以及在此项新技术进入临床之前需要克服的障碍.
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脑损伤时神经干细胞的修复与神经干细胞移杆的研究进展
随着近几年对神经干细胞研究的深入,已有明确证据表明神经干细胞能促进神经元的再生及脑组织的修复.而且通过神经干细胞移植治疗,基因治疗载体的研究对于一些迄今为止仍无有效治疗方法中的中枢神经疾病,有望开发一些新的有针对性的治疗方法.
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基因治疗中反转录病毒的细胞导向性基因转移
成功的基因治疗要求将治疗基因高效、细胞特异性地传递到靶组织并稳定表达.因此需要发展细胞导向性转移基因的基因治疗载体.反转录病毒(Retrovirus,RV)是目前常用、也是成功率高的基因治疗载体,但普遍缺乏细胞导向性.RV载体靶向转移基因可以通过两种水平来实现:1.基因传递水平,利用天然或修饰RV包膜糖蛋白与细胞特异性表面蛋白的相互作用使基因定向传递到靶组织;2.基因传递水平,利用组织特异性启动子控制基因在特定组织表达.本文主要讨论RV载体在基因传递水平靶向转移基因方面的研究进展.
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肝干细胞作为肝癌靶向基因治疗载体的体内实验研究
肝癌基因治疗作为现代分子药物治疗,为肝癌的治疗带来了新的前景,但目前肝癌基因治疗的研究结果尚不能令人满意,缺乏良好的基因转移载体是其重要原因[1],改进现有思路,提供一个靶向肝癌细胞的新的基因转移策略十分必要.
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心血管疾病基因治疗研究中基因转移载体的生物安全性探讨
多种心血管疾病包括缺血性心肌病、动脉粥样硬化、高血压、心力衰竭等,可以采用基因治疗获得较好疗效。然而,心血管病基因治疗与其他疾病的基因治疗一样,在世界范围内还处在试验阶段。对心血管疾病进行基因治疗,需高效的基因转移载体和转移体系将目的基因导入心血管,并安全可靠地表达。基因治疗载体的选择是决定基因治疗是否有效的重要因素之一。理想的基因转导载体应该无致病性、可以有效转导靶细胞,转基因可以整合到宿主基因组,长时间稳定表达并可调控,同时只有小程度的副作用[1]。在用基因治疗纠正疾病缺陷时,其安全性研究及评价也就成为人类迫切需要解决的问题,生物安全性一直以来都是人们在构建基因治疗载体时所关注的重要问题。目前,应用于基因治疗的载体主要可分为病毒载体和非病毒载体。
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高科技治疗技术:基因治疗载体的概念和种类介绍(1)
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超声微泡在治疗中的应用
近年来,有关超声造影剂靶向运载药物的研究日益增多.通过调整微泡本身的特性,可将药物或治疗性基因整合于微泡中,同时将高度特异的抗体或其他配体连接于微泡表面.经静脉注入携药的微泡后,用超声照射特定的部位,即可实现药物或治疗性基因的定向释放.本文着重介绍了超声微泡药物运载系统在基因治疗,溶栓治疗和抗肿瘤治疗方面的应用.
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外周血来源间充质干细胞研究进展
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)由于具有多向分化能力,在一定条件下可形成骨、软骨、肌肉、肌腱、神经、脂肪、支持造血的骨髓基质及肺、脾、胸腺等组织的基质等,而且MSCs是良好的基因治疗载体,因此备受关注.然而,外周血中的MSCs研究较少,远没有外周血中的造血干细胞和骨髓中的MSCs研究深入,故本文就外周血间充质干细胞的研究进展进行综述.
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杆状病毒介导的GFP基因转染兔髓核组织的离体研究
杆状病毒是一个极具应用前景的基因治疗载体[1-4].我们采用机械组织分离法进行髓核组织块的培养,以探讨Ac/CMV/GFP转染组织块中髓核细胞的效率及外源性基因的表达水平.
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超声造影剂在颅脑疾病中应用的现状与展望
近年来,有关超声造影剂的研究日益增多,而其在颅脑疾病方面应用相对较少.超声造影剂结合彩色多普勒技术有助于急性血栓和陈旧性血栓的鉴别,提高脑动静脉畸形的检出率;将溶栓药物整合于造影剂微泡中,同时将高度特异的抗体或配体连接于微泡表面注入体内,配合超声的局部照射可显著增强溶栓效果,并能减轻药物的不良反应.新的造影剂可同时用于诊断和治疗,即在血栓成像后进行溶栓治疗.
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膀胱癌基因治疗的研究现状
基因治疗的概念在20世纪70年代被提出,随着近年来细胞分子生物学技术的发展和人类基因组计划的完成.目前基因治疗的概念指:利用基因转移或基因调控的手段通过在特定靶细胞中表达该细胞本来不表达或低表达的基因,或采用特定方式关闭、抑制异常表达基因,达到治疗疾病目的的治疗方法[1-2].