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两种启动子调控下PNP基因载体的构建和差异性表达
目的:分别构建巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)通用启动子和甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)杂合启动子[HRE]AF调控的PNP基因表达载体并检测、分析二者的差异表达.方法:将[HRE]AF启动子插入载体pcDNA3.0,构建肝癌细胞特异表达载体p[HRE]AF;将PNP基因分别插入pcDNA3.0和p[HRE]AF,构建两种启动子调控的PNP基因表达载体pcDNA3.0/PNP和p[HRE]AF/PNP;经酶切、PCR及测序鉴定各重组体.用脂质体介导法将两PNP基因载体转染不同细胞株,RT-PCR检测PNP基因在各细胞株中表达,分析二者表达的特点.结果:各目的片段均成功插入相应载体中,CMV启动子调控的PNP基因在各株细胞中均实现了表达,而[HRE]AF启动子调控的PNP基因则在AFP阳性和阴性肝癌细胞中实现了组织特异性表达.结论:两PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效的治疗载体,p[HRE]AF/PNP还实现了在AFP阳性,尤其是AFP阴性肝癌细胞中的靶向性表达.
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成功实现干细胞靶向基因组编辑
据Genovese P 2014年6月12日[Nature,2014,510(7604):235-240.]报道,意大利San Raffaele科学研究所的研究人员在人类造血干细胞(HSC)突破性地实现了靶向基因组编辑。
基因治疗为一些因基因缺陷引起的遗传性疾病提供了良好的治疗效果。然而传统的方法是采用一种遗传工程载体将突变基因的一个功能拷贝传送到病变细胞添加到基因组中。尽管更为先进的载体,例如慢病毒载体证实提高了安全性和疗效,利用半随机插入载体存在的插入突变及失控性转基因表达风险仍然令人们感到担忧。这些不良效应有可能会触发癌症形成、毒性作用或破坏基因修饰细胞。