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四份中国HCV阳性血清中包膜蛋白E1/E2准种基因的序列分析及新型插入突变的发现
为分析四份中国丙型肝炎病毒(HCV)阳性血清中包膜蛋白E1/E2基因的准种特征.本研究对从4份中国HCV阳性血清(1b亚型:274、366和383；2a亚型:283)中提取的HCV核酸,采用逆转录-聚合酶反应扩增编码全长E1/E2蛋白(191～764aa)的基因片段,随机挑取多个克隆测序.根据E1/E2基因核苷酸的序列与其他相关序列(来自于GenBank)构建亲缘性关系进化树,进行核苷酸与氨基酸同源性分析并对重要的基因位点进行分析.共获得阳性克隆序列43个(274株10个,283株12个,366株13个,383株8个),发现高变区HVR1、HVR2的基因异质性高,而其他抗体中和表位及跨膜区I、Ⅱ及N末端糖基化位点相对保守.并首次发现在HCV 2a亚型(283血清)中多个准种序列存在1 279nt(E1区,313aa)处单碱基插入优势基因突变,导致HCV包膜蛋白编码突变与中断(E2区,398aa).本研究对中国HCV代表株包膜蛋白E1/E2编码基因的准种多样性及一种新型插入突变进行了描述,可为进一步研究HCV免疫逃避与慢性化机制提供重要信息.
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Ad5F35重组腺病毒载体研究进展
在分子生物学领域,腺病毒载体是将外源基因导入动物细胞内经常使用的载体之一.由于其靶细胞种类多,转导效率高,对增殖期及静止期细胞均有很高的转导效率,不整合到宿主基因组中,不会引起插入突变,理化性质较稳定,易于分离纯化,可容纳较大的目的基因片段等优势,因而被广泛用于基因治疗、体外基因转染及基因疫苗制备等实验及临床研究中,其中Ad5F35型腺病毒载体为近年来研究热点之一,此文就其研究进展作一综述.
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急性非淋巴细胞白血病中转录因子GATA-2基因插入突变
采用RT-PCR,单链构象多态性(SSCP)和核苷序列分析检测85例急性非淋巴细胞白血病(ANLL)病人外周血单个核细胞中GATA-2基因的表达和突变情况.结果发现绝大多数ANLL都表达了GATA-2基因(89.4%),并发现1例M1病人的PCR产物较正常产物大,序列分析显示在GATA-2基因第二锌指区出现18个核苷酸的插入突变,使其GATA-2因子的第二锌指增加6个氨基酸,其中含有1个能与锌离子结合的半胱氨酸.该插入突变可能引起GATA-2的功能改变,该结果为首次发现ANLL中的GATA-2基因的插入突变.
关键词： 急性非淋巴细胞白血病 转录因子 GATA-2基因 插入突变 -
心脏肌球蛋白结合蛋白C基因18115 18116insGCAGG突变导致肥厚型心肌病特点分析
目的 观察肥厚型心肌病(HCM)患者中心脏肌球蛋白结合蛋白C基因(MYBPC3)插入突变的特点.方法 在100例HCM患者中对MYBPC3的所有外显子及其侧翼内含子序列进行基因扫描,聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,双脱氧末段终止法测序.对突变患者进行家系调查,分析其表型特点.结果 在一先证者及其一个家系成员中发现一个位于外显子29的五核苷酸插入突变(18115_18116insGCAGG),序列分析发现1032位缬氨酸后发生了移码突变(p.Va11032fs),造成先证者60岁发病,超声心动图上表现为室间隔重度不对称性心肌肥厚(35mmn),结论 插入突变是MYBPC3基因突变的特点,18115_18116insGCAGG导致的HCM表型发病晚,心肌肥厚程度重.
关键词： 肥厚型心肌病 心脏型肌球蛋白结合蛋白C 插入突变 表型 -
骨科基因治疗中腺病毒载体的应用进展
腺病毒载体(AdV)能利用病毒自身感染宿主细胞,简便有效地将目的基因导入细胞内,使其有效的表达.而且腺病毒为DNA病毒,极少发生插入突变,且载体操作方便、宿主广泛、容易繁殖、繁殖滴度高、装载容量大、表达时间多在几个月以内,所以,腺病毒正在成为骨科基因治疗中使用多的载体之一.
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成功实现干细胞靶向基因组编辑
据Genovese P 2014年6月12日[Nature，2014，510（7604）：235-240.]报道，意大利San Raffaele科学研究所的研究人员在人类造血干细胞（HSC）突破性地实现了靶向基因组编辑。
基因治疗为一些因基因缺陷引起的遗传性疾病提供了良好的治疗效果。然而传统的方法是采用一种遗传工程载体将突变基因的一个功能拷贝传送到病变细胞添加到基因组中。尽管更为先进的载体，例如慢病毒载体证实提高了安全性和疗效，利用半随机插入载体存在的插入突变及失控性转基因表达风险仍然令人们感到担忧。这些不良效应有可能会触发癌症形成、毒性作用或破坏基因修饰细胞。 -
NPPB基因在妊娠性高血压患者中的突变情况
目的:研究NPPB基因(natriuretie peptide prel211rsor B.NPPB)在妊娠性高血压患者中的突变情况.方法:选取3例妊娠性高血压、80例其他类型高血压患者和60例健康体检者的外周血DNA,应用PCR技术对其NPPB基因进行扩增,产物纯化后,直接测序并收集患者的一般临床资料进行分析.结果:在l例妊娠合并高血压的患者中发现NPPB基因5'侧翼区(insert-l 194 bp.一1 195 bp)插入CC,导致后续的序列出现移码突变.结论:NPPB基因插入突变可能是妊娠性高血压发病的原因.
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PRNP基因八肽重复突变研究进展
某些遗传性朊病毒病,例如,家族性Creutzfeldt-Jakob病(fCJD)、GSS综合征均与PRNP基因八肽重复区插入突变相关.关于插入突变Prp分子的研究对于揭示遗传性朊病毒病发病机制具有重要意义.
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腺病毒-BMP7载体的包装与纯化
腺病毒(Adeno)基因组为线状双链DNA,长度大约36 kb,适合于容纳较大片段外源基因.与逆转录病毒载体相比,腺病毒载体能有效地将外源基因转染到各种靶细胞中.其宿主范围广,感染性强,尤其能感染分化后的非分裂期细胞.在Adeno生活周期中,其基因不整合到宿主细胞DNA中,故无插入突变激活癌基因的危险,外源基因能游离地表达.商品化的腺病毒载体一般剔除了其基因组的E1区,经体外重组后,产生可复制缺陷型腺病毒.再经过293细胞的包装过程,得到具有感染能力的腺病毒用以转染靶细胞.2002年,我室构建了腺病毒-BMP7(简称AV-BMP7)表达载体,用于组织工程化骨的修复实验,取得实效.现将该病毒包装、纯化技术分述如下.
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多发性内分泌腺瘤综合征家系MEN1基因突变及功能分析
目的 对一例多发性内分泌腺瘤综合征(multiple endocrine neoplasia type 1,MEN1)家系进行基因突变检测及功能分析,以探讨MEN1发病的分子机制.方法 对家系两名确诊患者及其他6名成员进行相关生化检查,留取外周血液标本,提取基因组DNA,采用PCR方法扩增MEN1基因所有编码序列,包括9个外显子及外显子/内含子边界,并进行直接测序.免疫组织化学法对2名患者肿瘤组织menin蛋白进行检测.结果 2名患者MEN1基因第三外显子存在插入突变c.433 434ins CTTC,可导致开放阅读框移位并提前出现终止密码子.家系其他成员未发现MEN1基因突变.患者肿瘤组织中无menin蛋白表达.结论 一种新型的MEN1基因突变形式被定位,这将有利于MEN1疾病的早期分子诊断.
关键词： 多发性内分泌腺瘤综合征1型 MEN1基因 插入突变 -
基因敲除技术在肺炎克雷伯菌基因功能研究中的应用进展
基因敲除技术是研究基因功能的重要手段,通过构建基因缺失的突变体,检测突变体表型的变化,对于研究肺炎克雷伯菌的功能基因极为重要.目前用于肺炎克雷伯菌基因敲除的方法主要有随机插入突变和同源基因重组两种,本文就这两种方法在肺炎克雷伯菌基因功能研究中的应用进展作一综述.
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家族性Creutzfeldt-Jakob病
目的 确定家族性Creutzfeldt-Jakob病(CJD)的临床特点并探讨其可能的发病机制.方法 对一个CJD家系进行系谱调查,并采用蛋白捕获法进行脑脊液14-3-3蛋白定量;应用PCR方法,结合DNA测序技术,检测朊蛋白(PrP)基因类型.结果 (1)两代4例的发病年龄早于散发性CJD,而且有早发的趋势;(2)先证者脑脊液14-3-3蛋白为125 ng/ml,高出截点13.9倍;(3)先证者PRNP第788碱基和789碱基之间插入1个碱基A,致使PRNP第231位点发生插入突变;(4)患者弟弟及其女儿未发现有PrP基因突变.结论 先证者为PRNP第231位点插入突变致家族性CJD,其临床表型与散发性CJD无明显不同,但发病年龄早于散发性CJD,同一家系患者死于同一年龄段.
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迟发性脊柱骨骺发育不良家系SEDL基因突变研究
目的 迟发性脊柱骨骺发育不良(spondyloepiphyseal dysplasia tarda,SEDT)是一种X线表现明显的X连锁骨发育不良疾病,主要特征包括不成比例的短躯干型矮身材、大关节发育不良以及胸腰椎椎体扁平.文中鉴定SEDT家系SEDL基因的突变位点,探讨SEDT发病的分子遗传学机制. 方法 报告1个4代68人累及8例患者的SEDT大家系,患者均为非匀称性矮身材(短躯干),临床诊断为X连锁SEDT.提取家系所有成员及50例正常对照者血样中白细胞基因组DNA,应用PCR和DNA测序进行SEDL基因突变分析. 结果 DNA序列分析表明,家系8例患者均为SEDL基因外显子6发生插入突变(c.370-371 ins A,突变数据库检索未见报告,为一全新突变方式),并发现1例无症状患儿携带相同方式突变(症状发生前),6例女性携带者为杂合突变,家系其他成员和正常对照者中均未见该插入突变. 结论 SEDL基因c.370-371 ins A是一新突变方式,详细的临床与分子遗传学研究丰富了SEDT的基因型-表型谱.SEDL基因突变分析对携带者检测、症状前诊断以及患者和携带者的产前基因诊断具有重要意义.
关键词： 迟发性脊柱骨骺发育不良 SEDL基因 插入突变 -
1例湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征的基因突变分析
湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征(Wiskott-Aldrich syndrome,WAS)是一种少见且严重的X-连锁隐性遗传病,以血小板减少、湿疹、免疫缺陷为特征,易合并自身免疫性疾病及恶性肿瘤.该病的致病基因WAS位于X染色体短臂Xp11.22-11.23,包含12个外显子,编码含502个氨基酸的湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征蛋白(WASP)[1].WASP功能复杂,故WAS基因突变所致的临床表型多样,包括典型WAS、X-连锁血小板减少症(XLT)、间歇性X-连锁血小板减少症(IXLT)和X-连锁粒细胞减少症(XLN)[2].典型WAS表现为血小板减少、湿疹、反复感染三联征,现对我院1例临床表现为典型WAS患儿的临床资料及新发现的基因突变位点进行报告如下.
关键词： 湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征 WAS基因 插入突变 -
在肿瘤干细胞中的研究进展
Bmi1是荷兰癌症中心于1991年在转基因鼠感染Moloney鼠白血病病毒过程中通过逆转录病毒插入突变发现的[1],1993年,ALKEMA等[2]首次将其从人白血病细胞中分离出来.作为多梳基因家族成员之一,Bmi1在细胞的增殖和干细胞自我更新、分化调节中发挥重要作用[3-4].目前,已有多项研究报道Bmi1在多种肿瘤如白血病、乳腺癌、肺癌、胃癌等中高表达[5-7],并且与肿瘤的转移和扩散相关.传统的肿瘤治疗方法是利用手术、放化疗等方法尽量清除已存在的肿瘤细胞,但术后仍有复发和转移,近年来肿瘤干细胞理论的提出,为恶性肿瘤的根治提供了新的思路[8].
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两个3型遗传性血管性血友病家系表型和基因型分析
目的 对2例遗传性血管性血友病家系进行临床表型诊断和基因型分析,探讨其分子发病机制.方法 分别采用出血时间、活化部分凝血活酶时间、瑞斯托霉素诱导的血小板聚集试验、血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)瑞斯托霉素辅因子试验、vWF抗原、vWF活性、vWF胶原结合实验和多聚体分析对2例遗传性血管性血友病先证者和家系成员进行表型诊断.抽提先证者外周血基因组DNA,PCR法扩增VWF基因的52个外显子及侧翼序列,通过直接测序分析VWF基因突变.结果 2例先证者出血时间和活化部分凝血活酶时间均延长,血浆瑞斯托霉素诱导的血小板聚集、vWF瑞斯托霉素辅因子活性、vWF抗原、vWF活性、vWF胶原结合功能均显著降低,多聚体分析显示2例先证者多聚体均缺无,先证者A基因分析发现第17外显子的纯合插入突变g.82888_82889insCATG,导致740位蛋氨酸往后编码10个异常氨基酸后终止.先证者B基因分析发现第20外显子g.94865G＞A(Trp856X)和第28外显子g.110698_110699delinsG导致1481位甘氨酸往后编码42个异常氨基酸后终止的复合杂合突变.结论 g.82888_82889insCATG纯合插入突变和g.94865G＞ A(Trp856stop)与g.110698_110699delinsG的复合杂合突变分别导致了2例先证者的3型遗传性血管性血友病.
