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抗免疫缺陷病毒药物研发进展
病毒具有自我复制合成的特性,是一类原始的在动物细胞内寄生的非细胞生物,自从1898年Beijerinck首次提出病毒概念后,病毒种类已由初的几十种发展到今天的数千种,给人类健康带来巨大的危害.免疫缺陷病毒的滋生,使艾滋病(AIDS)患者每年递增,在发展中国家和贫穷落后的地区,由于缺乏有效的督导与控制,导致了感染率直线上升.
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改良的彗星试验与标准方法的对比研究
彗星试验(Comet assay)又名单细胞凝胶电泳(SCGE)试验,是近年来发展起来的用于检测单个哺乳动物细胞DNA损伤的方法,具有灵敏、简便、快速等优点,应用十分广泛[1~3].目前该方法仍处于继续完善和发展阶段,有许多问题尚待研究[4].本文就化合物染毒细胞的方式进行了研究,比较了改良的浸泡染毒与传统染毒的结果,并对改良试验的某些条件进行了探讨.
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热暴露对K562细胞生存能力的影响
哺乳动物细胞正常生存温度是37℃,低温可以抑制细胞的代谢,有利于细胞的长期保存;而高温就有可能引起细胞的凋亡或死亡.肿瘤细胞是一种对环境温度比较敏感的一类细胞,在临床上人们利用肿瘤细胞的这个特点,在肿瘤治疗中用肿瘤局部加热的方法,以达到杀死肿瘤细胞的目的,称为肿瘤热疗.
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激活低氧诱导因子-1的转导通路
低氧诱导因子-1(HIF-1)与心血管缺血、肺高压和癌症等有密切关系,是在低氧的肝细胞癌细胞株hep3B细胞的核提取物中发现的,是一种结合于促红细胞生成素(EPO)基因增强子的寡核苷酸序列的特异蛋白.据报道,许多类型的细胞都可被低氧诱导而产生效应,其中HIF-1起主要作用,提示细胞中普遍存在一个低氧转导机制.一些转录因子,如活化蛋白-1(AP-1)、核因子-κB(NF-κB)、HIF-1[1]都与低氧应激反应有关.哺乳动物细胞对缺氧的适应性反应主要是表达HIF-1,这一过程与某些蛋白基因如醛缩酶A、烯醇化酶α、乳酸脱氢酶LDH、丙酮酸激酶和葡萄糖转移酶-1(GLUT-1)的表达有密切关系[2].
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乙型肝炎病毒基因重组疫苗应用于母婴传播的免疫效果
作者对我国研制的哺乳动物细胞中高效表达的基因工程疫苗(CHO疫苗)阻断母婴传播的初步结果报道如下.
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乙型肝炎病毒基因重组疫苗阻断母婴传播的进一步观察
"七五"和"八五"计划期间,我国对第一代乙型肝炎(乙肝)疫苗(血源疫苗)的新生儿免疫效果进行了近期和远期效果考核,均证明效果良好."九五"期间又对第二代乙肝疫苗(基因工程疫苗)效果进行考核,以后取代血源疫苗.本文报道对我国研制的在哺乳动物细胞中高效表达的基因工程疫苗(CHO疫苗)阻断母婴传播的初步结果.
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“活细胞”注射不能抗衰老
瑞士健康监管机构近日宣布,他们已经就诊所涉嫌给顾客注射有潜在危险的动物细胞作为抗衰老治疗的一部分展开了刑事调查.该调查主要针对非法提供在中国、中东和俄罗斯富人中特别受欢迎的活细胞注射的私人诊所和个人.
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Ad5F35重组腺病毒载体研究进展
在分子生物学领域,腺病毒载体是将外源基因导入动物细胞内经常使用的载体之一.由于其靶细胞种类多,转导效率高,对增殖期及静止期细胞均有很高的转导效率,不整合到宿主基因组中,不会引起插入突变,理化性质较稳定,易于分离纯化,可容纳较大的目的基因片段等优势,因而被广泛用于基因治疗、体外基因转染及基因疫苗制备等实验及临床研究中,其中Ad5F35型腺病毒载体为近年来研究热点之一,此文就其研究进展作一综述.
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线粒体能量缺失与神经变性病
有关神经系统变性病与线粒体能量代谢缺失的关系,近年来已积累了更多的证据.阐明在神经变性时神经元发生的坏死或凋亡和线粒体内能量保存的多少有直接的关联[1].神经元的凋亡起因于神经元的轻度的程序性损伤,线粒体内仍保留一定量的ATP,而坏死则起因于神经元受严重损害,如兴奋性氨基酸类等消耗了大量的ATP,以致谷氨酸盐、NMDA等在线粒体膜上保持显著而持续的去极化状态,并逐渐导致ATP耗竭.在动物细胞中,线粒体是主要的O2- 来源,估计每分钟可生成O2- 2~3 nmol/mg 蛋白.在各种神经变性病中线粒体的能量缺失,可能是核 DNA 损害、也可能是线粒体 DNA 损害的后果[3,15,24].
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用于抗体药物生产的动物细胞培养基研究进展
近年来,具有靶向明确,副作用小等优势的抗体药物受到国内外药企的广泛关注。2012年,抗体药物全球销售额已达650亿美元左右,并占据全球十大畅销药物的半壁江山[1]。
动物细胞大规模培养和抗体质量分析已然成为我国抗体药物产业化的主要限制因素[2]。培养基优化作为动物细胞大规模培养的关键环节,长期被国外生物技术公司(如Thermo Fisher 公司、Sigma 公司等)、医药巨头所垄断。尽管目前国内抗体药物的表达水平有显著提高(1~2 g/L),但仍以使用商业培养基为主,缺乏自主知识产权的产品。由于对所使用的培养基成分未知,一旦出现抗体质量问题便无从优化,特别对于生物仿制药开发而言,抗体质量的一致性显得尤为重要。与此同时,使用商业化培养基还需承担较高的开发成本,往往是自主开发培养基成本的5~10倍。 -
Tet基因表达调控系统及其应用
基因治疗中导入基因表达时间和水平的调控极其重要.哺乳动物细胞中用到的诱导型载体主要与启动子有关,如热休克蛋白(Hsp)启动子可在高温下被诱导,还有重金属、糖皮质激素诱导的启动子等,但这些系统均存在着诱导表达不具备特异性、系统处于关闭状态时表达有遗漏以及诱导剂本身具有毒性会对细胞造成损伤等缺陷.如果设置一种导入基因的"开关",能调控基因的表达,则有望大幅度提高基因治疗在临床应用的安全性.1992年,Gossen和Bujard[1]首次成功地利用原核基因调控元件构建了真核细胞基因表达调控系统--四环素基因表达调控系统(Tet系统),该系统能通过在培养基中加入或者去除四环素或其衍生物(如强力霉素)诱导或抑制所感兴趣基因的表达,故被广泛应用于基因表达调控、蛋白质功能和基因功能研究以及基因治疗研究中.本文就近年来Tet系统的研究进展等做一综述.
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Vero细胞微载体放大培养技术研究
目前,国内大部分疫苗企业仍采用传统的转瓶细胞培养工艺来生产病毒性疫苗,该方法存在细胞密度低、病毒滴度低、劳动强度大等缺点。20世纪70年代,建立了微载体/生物反应器培养动物细胞的工艺[1],把悬浮培养和贴壁培养两种培养工艺融合在一起,兼有两者的优点,使得动物细胞工业化的大规模、高密度培养,以满足生物技术发展的需要,而细胞微载体放大培养就是其中的关键技术之一[2]。
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转基因动物育种研究的现状与趋势
20世纪80年代以来发展的转基因动物技术是指将已知的外源基因导入动物细胞并稳定整合到基因组中,使其得以表达的技术.转基因动物育种是指通过转基因的手段,从分子水平对动物进行改良,以期得到目标性状.1997年,克隆羊Dolly的诞生[1],开创了哺乳动物体细胞核移植技术的先河,随后,乳腺中表达人凝血因子IX的转基因克隆羊Polly培育成功[2].
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现代动物细胞培养反应器概述
动物细胞在很多方面是不同于原核细胞和真菌的,例如较低的生长率、较高的剪切敏感性以及较低的气泡耐受性,这些特性会对动物细胞生物反应器的设计产生一定的影响.特别是搅拌与通气系统的构造需要满足细胞生长于尽可能优化的罐内环境中.
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钙蛋白酶小亚基1在细胞凋亡、细胞周期及肿瘤中作用机制的研究进展
钙蛋白酶(calpain)是一种存在于动物细胞中的钙离子依赖性的中性半胱氨酸蛋白酶.钙蛋白酶小亚基1(calpain-s1,capn4)作为 calpain的调节小亚基,对细胞周期、细胞凋亡及肿瘤的发生、发展等具有一定的影响.本文就近年来有关capn4在细胞周期、细胞凋亡及肿瘤中的作用机制作一综述.
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动物细胞同工酶检测方法的改良及其应用
同工酶是一类催化功能相同但化学组成和结构不同的酶,广泛地存在于高等生物细胞内.不同种属来源的细胞具有不同的同工酶分布,通过电泳分离可得到它们特异性的同工酶图谱,因此同工酶检测可作为种属鉴别的依据.
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RNA干扰在抗HBV感染中作用的研究进展
乙型肝炎病毒(HBV)可引起慢性肝炎,慢性乙型肝炎(慢性乙肝)终可能发展为肝硬化、肝癌[1,2],所以慢性肝炎是严重危害人类健康的一种疾病.目前用干扰素或核苷类似物如拉米夫定、阿德福韦等治疗慢性乙肝,但疗效不理想,特异性差,易出现耐药性[3,4].RNA干扰(RNAi)是一种普遍存在的自然过程,双链RNA直接作用于同源基因特别序列使其沉默.这一过程非常保守,在真核生物中广泛存在[5,6].哺乳动物细胞mRNA可被RNAi特异地降解,如23、21个核苷酸的双链RNA [7,8],从而特异地阻断相应基因的表达[9].近几年来RNAi的研究取得了重大进展,因此被
评为2001年十大科学成就之一. -
膜蛋白Fas及其配体FasL系统与病毒感染
近年来的研究发现Fas/FasL(CD95/CD95L)的相互作用是启动哺乳动物细胞进入编程死亡(ProgrammedCell Death,PCD)的一个重要的主导途径。因其不仅参与体内的免疫优先(im-mune privilege)、克隆选择、上、下调免疫反应等许多重要的生理过程,而且还与很多病理反应密切相关,因而倍受关注[1-3]。本文综述Fas/FasL系统的结构功能及在病毒感染中的作用。
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Jagged1在树突状细胞介导淋巴细胞诱导免疫耐受中的作用
Jagged1是哺乳动物细胞膜上Notch受体的主要配体之一,在抗原提呈细胞(APC)表面表达丰富,介导树突状细胞(DC)成熟和分化.Jagged1与其受体结合后,激活Notch信号通路,能够诱导外周成熟T淋巴细胞分化成为产生高水平IL-10的1型调节性T细胞(regulatory T cell 1,Treg 1)或产生高水平TGF-β的TH3细胞,在诱导免疫耐受中发挥着重要作用.
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中性红摄入法检测幽门螺杆菌空泡毒素活性
空泡变性细胞毒素(VacA)是幽门螺杆菌(H. pylori)分泌的一种重要毒素,其相对分子质量(Mr)约为(87~95)×103,初发现该毒素与哺乳动物细胞共同孵育后可导致细胞内产生大量的空泡.既往多采用光学显微镜下直接计数空泡形成细胞的比例来评价VacA活性,我们采用中性红摄入法(Neutral red uptake assay, NRU)对Hp菌株VacA进行定量检测,评价该方法检测VacA活性的应用价值.