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转基因动物育种研究的现状与趋势
20世纪80年代以来发展的转基因动物技术是指将已知的外源基因导入动物细胞并稳定整合到基因组中,使其得以表达的技术.转基因动物育种是指通过转基因的手段,从分子水平对动物进行改良,以期得到目标性状.1997年,克隆羊Dolly的诞生[1],开创了哺乳动物体细胞核移植技术的先河,随后,乳腺中表达人凝血因子IX的转基因克隆羊Polly培育成功[2].
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重组活性Ⅶ因子抢救严重产科出血三例临床报道
临床上经常出现危机生命的出血,如产科出血,外伤性出血、术中出血、DIC等,寻找一快速有效的止血方法,是挽救患者生命的关键所在.目前国际上推荐,上述诸多原因引起的出血,在传统治疗效果不好时,应用重组人凝血因子VIIa.其在短期内即可解决或改善出血的情况.重组活性Ⅶ因子(recombinant factor Ⅶa,rFⅦa),是一种维生素K依赖性糖蛋白,它由406个氨基酸残基组成,在结构上与人血浆纯化活化Ⅶ因子(pdFⅦa)相似.正常人血浆中FⅦ的浓度很低,仅为0.2～2.0mg/L,其血浆半衰期为6～8 h.rFⅦa是仓鼠肾(BHK)细胞在小牛血清中培养、纯化的一种基因工程产品,虽然它与pdFⅦa在结构上略有不同,但二者的生物学功能是完全一致的.在短期内可以起到止血的作用.
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重组腺相关病毒2型/人凝血因子IX的质量研究
目的研究并建立重组腺相关病毒2型/人凝血因子IX(recombinant adeno-associated virus type 2/human blood coagulation factor IX,rAAV-2/hFIX)的质量标准.方法采用PCR法确认病毒所携带的重组核酸结构和测定辅助病毒(helper virus)和野生型腺相关病毒(wtAAV)的残留片段.SDS-PAGE电泳测定病毒外壳蛋白分子量及纯度,TSK gel SP-NPR阳离子交换柱系统测定病毒颗粒纯度.以斑点杂交法测定病毒颗粒数.一期法于IX因子基因剔除小鼠体内测定rAAV-2/hFIX生物学活性,并通过ELISA法测定感染BHK-21细胞后hFIX的表达量.结果 PCR法确证病毒的重组核酸结构与构建预期相同;在1×107 VG的rAAV-2/hFIX颗粒中,残留辅助病毒的基因片段数少于1个拷贝;在1×108 VG的rAAV-2/hFIX颗粒中,野生型AAV-2基因片段数少于1个拷贝.病毒颗粒及外壳蛋白纯度均大于98%,病毒颗粒数大于1.0×1015 VG*L-1(virus genome*L-1).IX因子剔除小鼠肌肉注射病毒后21 d,小鼠血液中人凝血因子IX活性达到大于正常人因子IX活性的15%,IX因子的体外表达水平大于20.0 μg*L-1.其他各项检测指标均符合规定.结论建立了rAAV-2/hFIX的质量标准,用于控制产品质量.
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全自动血凝仪的确认与验证实验研究
目的:按照《药品生产质量管理规范》(GMP)及数据可靠性检查的要求,对质控实验室的全自动血凝仪进行确认与验证实验研究.方法:对全自动血凝仪按照GMP要求进行安装确认(IQ)、运行确认(OQ)和性能确认(PQ)实验.结果:IQ完成了设备信息核查并记录;OQ准确度确认、精密度确认、干扰实验测试确认均符合要求;PQ采用人凝血因子Ⅷ产品测定效价,测定值在规定的合格范围内,且cV值(2.05％)符合规定.结论:该STAGO全自动血凝仪成功实施了全面的检验仪器确认与验证,符合人凝血因子效价测定实验的要求.
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STAGO全自动血凝仪在人凝血因子活性测定上的应用
目的 探讨STAGO全自动血凝仪在人凝血因子活性测定上的应用.方法 对STAGO全自动血凝仪按照GMP要求进行安装确认(installation qualification,IQ):实施信息核查并记录;运行确认(operational qualification,OQ):准确度、精密度(批内精密度及批间精密度)、干扰试验及参考范围的验证确认;性能确认(performance qualification,PQ):按STAGO凝血分析仪相关SOP检测6份人凝血因子Ⅷ样品活性,并计算6份样品检测值间的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD).结果 已核实STAGO全自动血凝仪基本信息,安装环境及安装过程均符合要求,并已进行记录.厂家提供的正常及病理值质控血清测定3次的均值均在厂家提供的质控范围内;批内及批间精密性的变异系数(coefficient of variation,CV)均＜10％;随机组与对照组相比平均偏差＜10％;20份体检样本的均值、标准偏差(standard deviation,SD)及结果在正常参考范围的例数与总标本数的比例(R值)＞0.9.6份人凝血因子Ⅷ样品检测值的RSD值为1.95％.结论 经全面的设备确认,STAGO全自动血凝仪符合人凝血因子活性测定的要求.
关键词： Stago全自动血凝仪 人凝血因子 设备验证 -
急性重型肝炎出血倾向检测诊断
急性重型肝炎病人几乎都有严重的凝血机制障碍,病人表现为皮肤紫癜或淤斑、牙龈口腔粘膜自发性出血、鼻出血和注射部位渗血,少数病人可以上消化道出血为首发症状.若出现皮肤多处出血,可能会误诊为血液系统疾病[1].为了解急性重型肝炎病人凝血因子合成障碍情况,对我院2001-2004年收治的42例急性重型肝炎的凝血酶原时间PT、活化部分凝血活酶时间APTT进行检测,探讨其在重型肝炎诊断治疗中的临床意义.
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世界血液制品发展趋势
<中国生物制品规程>对血液制品的定义为:"由健康人的血浆或特异免疫人血浆分离,提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分或血细胞组分制品,如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子(天然或重组的)、红细胞浓缩物等,用于诊断、治疗或被动免疫预防."血液制品是在临床输血的基础上发展起来,它通过将血浆中的有效组分分离出来并用于治疗,较好地解决了全血不易运输和大量长期储存中的问题.自上世纪40年代中期Cohn等发明了用冷乙醇分离法从人血浆中提取白蛋白等主要血液制品至今,经过60多年的发展,血液制品的种类、质量、安全性及产量都有了大幅的提高,其提取工艺也呈现了手段的多样性.应该说,半个多世纪以来,血液制品的不断发展,为人类健康事业做出了无法估量的贡献.随着人们对一些通过血液传播疾病的认识不断深化,特别是近年来,对血液制品的安全性不断提出更高要求,以及一些新的制品特别是转基因制品和基因重组制品相继出现,也使传统制品面临技术和市场的严峻挑战.本文将对血液制品的品种和市场、工艺和安全性以及新产品的研发等信息和发展趋势做一简述.
