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Ad5F35重组腺病毒载体研究进展
在分子生物学领域,腺病毒载体是将外源基因导入动物细胞内经常使用的载体之一.由于其靶细胞种类多,转导效率高,对增殖期及静止期细胞均有很高的转导效率,不整合到宿主基因组中,不会引起插入突变,理化性质较稳定,易于分离纯化,可容纳较大的目的基因片段等优势,因而被广泛用于基因治疗、体外基因转染及基因疫苗制备等实验及临床研究中,其中Ad5F35型腺病毒载体为近年来研究热点之一,此文就其研究进展作一综述.
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转基因动物育种研究的现状与趋势
20世纪80年代以来发展的转基因动物技术是指将已知的外源基因导入动物细胞并稳定整合到基因组中,使其得以表达的技术.转基因动物育种是指通过转基因的手段,从分子水平对动物进行改良,以期得到目标性状.1997年,克隆羊Dolly的诞生[1],开创了哺乳动物体细胞核移植技术的先河,随后,乳腺中表达人凝血因子IX的转基因克隆羊Polly培育成功[2].
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转基因小鼠研究进展
转基因动物是指用实验的方法将外源基因导入早期胚胎细胞,使之整合于细胞基因组中而建立的动物品系.早建立成功的转基因动物是转基因小鼠(transgenic mice).由于转基因小鼠的建立比其它大型转基因哺乳动物的建立要省时、省力,因此转基因小鼠作为生命科学研究的一个新体系已经得到越来越广泛的应用.
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电离辐射促脂质体介导的基因在胰腺癌细胞中转移和表达的实验性研究
我们采用联合辐射的方法,将脂质体介导的外源基因导入胰腺癌细胞,以观察外源基因在胰腺癌细胞中的转移和表达的情况.为胰腺癌的基因治疗提供新的思路和探索.
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头颈肿瘤基因治疗研究的进展
头颈肿瘤发病率较高,目前临床治疗仍以手术、放疗和化疗为主。这些治疗手段在晚期肿瘤的疗效及延长患者寿命方面有很大的局限性。近20年来,随着现代医学的发展,出现了肿瘤的生物疗法。尤其是近年来兴起的基因治疗为人类战胜肿瘤带来了新的希望。能否将外源基因导入靶细胞并表达,是基因治疗面临的首要问题。Clayman等[1]首先试验了正常及癌变口腔粘膜转染和表达外源基因的能力。发现局部应用腺病毒并不能将外源基因导入人或鼠的正常粘膜,而心内注射却能有效地将外源基因导入健康仓鼠的口腔粘膜。体外转导效率呈剂量依赖型。(2×108)pfu 2次注射可使100%癌细胞表达报告基因。向荷瘤裸鼠模型的肿瘤内注射腺病毒,可使包括远离注射部位的30%的癌细胞表达报告基因,从而为口腔癌的基因治疗奠定了基础。 一、基因替代疗法 现代肿瘤学证明,头颈肿瘤的发生、发展与多种癌基因激活及抑癌基因失活有关。利用基因工程手段向肿瘤内输入野生型抑癌基因已成为治疗口腔癌的一个方向。抑癌基因 p53的点突变是头颈鳞癌频率高的遗传改变,导致无活性的p53蛋白过度表达。许多学者尝试了用野生型p53基因转染治疗头颈肿瘤,体外与体内试验及临床应用均有一定的疗效。肿瘤细胞p53的表达比对照组高出10倍[2],体外肿瘤细胞生长受到抑制。在裸鼠体内实验中向瘤周注射p53基因,肿瘤体积也明显减小,该效应依赖于载体剂量而与内源性p53状态无关。在裸鼠体内皮下接种肿瘤细胞,模仿头颈肿瘤患者术后残瘤环境,野生型p53转染也可抑制其残存瘤细胞形成肿瘤[3]。
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神经系统疾病基因治疗研究现状
基因治疗是将外源基因导入人体细胞,使其在体内表达,产生有治疗意义的生物蛋白或关闭、抑制异常表达的基因,从而达到治疗某种疾病的目的.按技术在遗传信息的中心法则的靶向环节来分类,基因治疗可通过以下几方面技术来实现:①基因转移技术: 用人工合成基因和基因转移等技术,将一种生物的基因片段转移到另一种生物的活细胞中,插入或整合在其DNA中,从而改变其遗传结构和某些特性.
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转基因动物在医学及生物制药方面的应用
转基因动物(transgene animal)是指用实验的方法将外源基因导入某种动物的染色体基因组内进行稳定整合,其外源基因所决定的性状能够遗传给下一代的动物. 1974年, Jaenisch等将猿猴空泡病毒(Simian vacnolating virus 40, SV40)的 DNA注入小鼠的胚泡,发现 40%子代鼠的器官中整合有外源基因,从而首次成功地培育了转基因动物. 2000年 10月 2日,首只转基因猴"安迪"在美国诞生,这是世界上首次培育成功的转基因灵长类动物.近年来,随着分子遗传学和转基因技术的不断发展和完善,转基因动物与医学及生物制药研究的关系越来越密切,各种人类疾病转基因动物模型的不断建立,已经为许多疑难性疾病的发病机制研究提供了十分有用的材料.
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重组腺病毒感染血管组织的条件优化与表达效率
目的 探讨重组腺病毒在体高效感染血管组织的优化条件.方法 将制备的KLF4腺病毒悬液,以不同剂量(10、20、40 μl)导入大鼠颈总动脉腔内,停留不同时间(10、20、30 min).感染后48 h用免疫组化染色评价感染效率.结果 采用20 μl-20 min的感染条件,既可实现较理想的感染效率,又不破坏血管组织的完整性.结论 一定条件下腺病毒的剂量和感染时间与感染效率呈正相关关系.
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转基因动物在药理学研究中的应用
转基因动物(transgene animal)或称遗传修饰生物(genetic modified organism,GMO)是指用实验方法将外源基因导入染色体基因组内进行稳定整合,并能遗传给后代的一类动物.具体地说,转基因动物技术的实质是通过遗传工程的手段对动物的基因组的结构或组成进行人为的修饰或改造,并通过相应的动物育种技术使得这些经修饰改造后的基因组在整体动物发育各阶段以及世代间得以表现、传递.1974年Jaenisch等[1]将猿猴空泡病毒(Simian vacnolating virus 40,SV40)的DNA注入小鼠的胚泡,发现40%子代鼠的器官中整合有外源基因,从而首次成功地培育了转基因动物.
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冠状动脉再狭窄基因治疗中靶基因的选择
二十余年来,冠心病介入治疗取得了巨大进展.但是冠状动脉成形术(PTCA)后有约30~50%的病人可发生再狭窄,其机理涉及血管回缩、血栓形成、血管收缩性重构和内膜增生[1].将外源基因导入病变血管,从不同环节抑制平滑肌细胞的迁移、增殖及其他病理生理过程为再狭窄的治疗提供了新的选择.目前在基因治疗冠状动脉再狭窄的研究中,靶基因的选择有以下几个方面.
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体细胞核移植技术进展
转基因动物的研究和生产是动物胚胎工程中诱人和有发展前景的课题之一.早期用受精卵原核内注射外源基因和利用精子作为载体将外源基因导入受精卵的方法,其缺点是整合效率低,而且很难实现定点整合,出生的转基因动物外源性基因的表达也不稳定[1].著名的多丽羊的诞生使体细胞核移植技术成为一种新的生产转基因动物的方法.
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PTCA后再狭窄的基因治疗
20多年前经皮血管内冠状动脉成形术(PTCA),作为一种治疗阻塞性冠状动脉病的非手术导管疗法,已用于临床.20年来由于PTCA器械和技术的迅猛发展,应用PTCA治疗冠心病有了巨大的进步.但PTCA后30%~50%的患者发生再狭窄,再狭窄所致的持续血管开放受阻,心绞痛、心肌梗塞、再次血管成形术、冠脉搭桥术的高发生率及医疗消费,成为PTCA应用的难题[1].PTCA后再狭窄的原因尚不完全清楚,目前认为PTCA后再狭窄主要与血小板聚集、血管弹性回缩、血栓形成、新生内膜增生、血管壁平滑肌细胞增生、血管壁的重建有关.但临床研究显示,抗血小板、抗血栓、抗炎药物的应用,不能降低再狭窄发生率.一些疗法,如病变部位血管内放射,抗氧化剂、血小板衍生生长因子拮抗剂等药物局部送达,在小样本的研究中显示可降低再狭窄的发生[2].近年PTCA后再狭窄的基因治疗,有了长足进展,为再狭窄的治疗开创了一个新方法.本文仅对PTCA后再狭窄基因治疗的外源基因,外源基因导入,基因治疗的有效性、安全性检测综述如下.
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疼痛的转基因研究
分子生物学的发展使生命科学许多领域的研究都发生了质的飞跃.基因克隆、测序、基因表达及改变基因表达等分子生物学研究方法的日臻成熟,为转基因技术的产生奠定了基础.1980年Capecchi[1]首次将外源基因导入培养的单个胚胎细胞,发现有20%的导入基因整合到宿主细胞基因组中.转基因技术一出现便显示出了强大的生命力,已在许多领域得到了广泛的应用,开启了转基因技术的新时代.本文仅对转基因技术在疼痛研究中的应用予以综述.
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造血干祖细胞体外扩增与其再植入能力的研究进展
造血干祖细胞移植(hematopoietic stem/progenitor cells transplantation)用于治疗恶性血液病、某些遗传性疾病、先天性免疫缺陷和各类自身免疫病等,也用于实体瘤的治疗.而造血干祖细胞体外扩增是提高移植成功率和拓展造血干祖细胞移植应用领域的有效途径,有助于解决移植时所面临的细胞数量不足、移植后造血恢复等问题,也是移植物净化,提高外源基因导入造血干祖细胞进行基因治疗的有效方法.而在造血干祖细胞体外扩增过程中扩增早期和早期祖细胞以及保留干细胞长期重建造血的能力是造血干祖细胞体外圹增的关键,是目前的研究热点,本文就有关这方面的一些研究作一综述.