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胚泡表面LeY寡糖对小鼠胚泡纤维粘连蛋白、层粘连蛋白表达及分泌的影响
目的体外观察LeY寡糖对着床前小鼠胚泡细胞外基质(ECM)主要成分纤维粘连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)的表达和分泌的影响. 方法采用特异性单克隆抗体AH6阻断胚泡表面LeY寡糖,运用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法检测LeY寡糖对着床前小鼠胚泡FN及LN的表达和分泌的影响. 结果在体外培养中,经AH6封闭胚泡表面LeY寡糖抗原后仅1.5 h,胚泡FN及LN的分泌有明显升高(P<0.01),并且持续6 h以上,而胚泡FN及LN的基因转录表达变化不明显(P>0.05). 结论胚泡表面的LeY寡糖抗原对着床前胚泡的FN及LN的分泌具有促进作用.
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纤维粘连蛋白在胚胎着床中的作用
近年来,由于发现细胞外基质(ECM)成分与细胞的生长和分化等生命活动密切相关,使ECM成为细胞生物学和发育生物学研究的热点.纤维粘连蛋白(FN)作为ECM的重要组成成分,也受到发育生物学界的重视.本文主要从FN的分子结构、受体以及与生殖相关的生物学功能作一综述,着重论述FN及其它ECM成分与着床相关因子之间的影响.
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植入前小鼠胚胎活检的实验研究
目的以小鼠胚胎进行植入前胚胎活检的研究.方法通过输卵管冲洗,获得4～8细胞期胚胎,用"一"字机械法和化学法分别对4、8细胞的胚胎进行活检后继续培养,比较其囊胚形成及孵出情况.结果"一"字机械法胚胎活检后胚胎的囊胚形成率(4细胞期78.8%,n=66;8细胞99.0%,n=100)、囊胚孵出率(4细胞期84.6%,n=52;8细胞期94.9%,n=99);化学法胚胎活检后胚胎的囊胚形成率(4细胞期74.1%,n=58;8细胞期92.9%,n=127)、囊胚孵出率(4细胞期88.4%,n=43;8细胞期95.8%,n=118).两法均与未活检对照组比较无显著性差异(P＞0.05),且两者的囊胚形成率、囊胚孵出率均无显著性差异(P＞0.05).Logistic回归分析表明,细胞数越多越有利于胚胎进一步发育;而是否活检与活检方法对胚胎发育潜能无显著影响.结论用"一"字机械法在小鼠胚胎4或8细胞期进行单个卵裂球活检,不影响胚胎的发育,是一种较好的胚胎活检方法.
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丹莪妇康煎膏对子宫内膜容受性的影响
胚胎着床是复杂的程序化的生理过程.子宫内膜仅在极短时间内允许胚胎植入,此时子宫内膜达到大胚泡种植容受性.子宫内膜容受性是指子宫内膜对胚胎接受能力[1].胚胎植入成功在于有良好的胚胎和容受性的子宫内膜,而子宫内膜容受性形成过程中受多种细胞因子、蛋白分子调控[2].
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补肾安胎方调节胚泡着床障碍小鼠雌、孕激素的实验研究
目的观察补肾安胎方对着床障碍小鼠妊娠率和着床点数的影响.方法将妊娠小鼠随机分为3组,于妊娠第1天正常组和模型组灌胃自来水,中药组灌胃补肾安胎方;于妊娠第3、4天每天2次正常组皮下注射溶剂,模型组和中药组分别注射吲哚美辛(4.33 mg/kg)造成小鼠胚泡着床障碍的动物模型,妊娠第5、8天留取血清;采用放免法检测3组小鼠雌、孕激素含量;妊娠第8天观察比较3组小鼠妊娠率、妊娠小鼠着床点数;采用免疫组化技术检测子宫雌、孕激素受体表达水平.结果(1)小鼠妊娠率和胚泡着床点数:模型组(27.3%、5.3±0.7)显著低于正常组(90.9%、13.3±2.8,P＜0.01),中药组(72.7%、10.7±2.2)较模型组显著增高(P＜0.05).(2)血清雌激素水平:妊娠第5、8天时中药组均高于模型组(P＜0.05或P＜0.01),第8天时高于正常组(P＜0.01).(3)血清孕激素水平:妊娠第5、8天时模型组、中药组均低于正常组(P＜0.05或P＜0.01),但第8天中药组显著高于模型组(P＜0.01).(4)免疫组织化学结果:中药组雌、孕激素受体表达显著高于模型组.结论补肾安胎方能提高吲哚美辛诱导着床障碍小鼠妊娠率和着床点数,其机制可能与该方能改善甾体激素水平,促进子宫内膜雌、孕激素受体的表达有关.
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白细胞介素-18在大鼠胚泡植入前后子宫的分布及表达
目的 系统研究了白细胞介素-18(IL-18)在大鼠胚泡植入前后子宫中的分布与表达,以探讨IL-18在胚泡植入过程中可能的生理作用.方法 免疫组织化学SP法,图像分析法.结果 IL-18在胚泡植入前后子宫均有表达,其主要分布于子宫内膜或蜕膜的腔上皮细胞、腺上皮细胞及子宫基质细胞或蜕膜细胞,子宫肌层及部分血管内皮细胞也有微弱表达.与非妊娠大鼠相比,妊娠大鼠子宫IL-18的表达明显增加(P<0.05).随着妊娠的进行,子宫IL-18的表达逐渐递增,并且IL-18在胚泡植人后期的表达显著高于植入前期(P<0.05).结论 IL-18可能参与胚泡植入,与妊娠的建立和维持有关,在妊娠中起重要作用.
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妊娠早期小鼠子宫内膜层粘连蛋白定位、定量及对胚泡植入的作用
目的研究妊娠早期小鼠子宫内膜层粘连蛋白(laminin,LN)定位和定量变化及其对胚泡着床的作用.方法应用间接免疫荧光法、免疫组织化学ABC技术及图像分析法进行LN定位和定量测定;利用子宫内注射LN抗体的方法探讨LN对小鼠胚泡植入的作用. 结果动情期及妊娠早期小鼠子宫内膜内源性LN在上皮和腺基膜及血管内皮基膜均有表达,并随着植入的发生基膜的LN表达减弱,而内膜上皮中LN免疫染色逐渐增强;外源性LN对小鼠胚泡粘附与植入子宫内膜不产生明显影响,层粘连蛋白抗体明显抑制小鼠胚泡着床. 结论动情期及妊娠早期小鼠子宫内膜的层粘连蛋白主要存在于基膜,胚泡植入期间内膜上皮细胞内LN的含量增加;LN在促进小鼠胚泡粘附与植入子宫内膜过程中起重要作用.
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HOXa-10基因在小鼠胚胎着床过程中的作用
目的 讨HOXa-10基因在小鼠胚胎着床过程中的作用.方法 应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)分别检测未孕及早孕小鼠第1、2、3、4、5、7d HOXa-10基因表达量的变化规律;同时用可以持续表达HOXa-10的DNA/脂质体复合物质粒和HOXa-10反义寡脱氧核糖核酸分别转染到受孕2d小鼠子宫角内,观察胚泡着床数.结果 FQ-PCR结果显示,随着小鼠妊娠天数的增加,HOXa-10基因表达量也逐渐增高,在孕4d达到峰值,孕5d开始下降,孕7d时表达量已接近未孕状态;在用HOXa-10 DNA质粒/脂质体转染孕2d小鼠子宫角后,小鼠的胚泡着床数明显增加;用HOXa-10反义寡脱氧核糖核酸,脂质体转染孕2d小鼠子宫角后,小鼠的胚泡着床数明显减少(P<0.05). 结论在胚泡植入窗口期,子宫内膜HOXa-10基因表达上调,其可能参与了胚泡着床过程.
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围着床期小鼠胚卵L-选择素的表达变化及作用
目的 探讨围着床期小鼠胚卵L-选择素的表达规律及其对胚胎着床的影响.方法 1.分别采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)和免疫荧光组织化学方法检测围着床期小鼠胚卵L-选择素mRNA和蛋白的表达,并用免疫荧光组织化学方法检测L-选择素在细胞的定位;2.用子宫角内抗体干预的方法观察并统计小鼠着床胚胎数.结果 1.随着胚卵分化成熟,L-选择素mRNA和蛋白表达均呈逐渐增加趋势,胚泡期表达强(P<0.05).L-选择素在单细胞期和4细胞期有少量表达,桑椹胚周边区L-选择素表达显著增强,胚泡滋养层L-选择素表达强.2.小鼠子宫角实验侧(经抗L-选择素单克隆抗体干预)胚胎着床数较对照侧(经等体积生理盐水干预)明显减少(P<0.05).结论 胚卵可能通过L-选择素信号转导途径及其与子宫内膜的糖蛋白受体结合参与胚胎着床.
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拓扑酶抑制剂ISO-1对小鼠胚泡植入的影响
目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)拓扑酶抑制剂ISO-1对小鼠胚泡植入的影响及其作用机制.方法 将150只妊娠3d小鼠随机分为5组,即低、中、高剂量组及1%二甲基亚砜(DMSO)和生理盐水(NS)两个对照组.低、中、高剂量组分别按2、6、18 mg/kg一次性腹腔注射ISO-1,对照组注射等量1%DMSO或NS;妊娠4d各组小鼠处死一半,取出子宫进行HE染色,免疫组织化学SP法检测MIF蛋白的表达,原位杂交检测MIF mRNA的表达;妊娠8d处死另半数妊娠小鼠,观察胚胎数,测量子宫脏器系数.结果 与对照组比较,低、中剂量组小鼠胚胎数和子宫脏器系数差异不显著(P>0.05);高剂量组胚胎数显著提高(P<0.05),而子宫脏器系数差异不显著(P>0.05);光镜观察未发现各组妊娠小鼠子宫内膜结构的明显差异;MIF蛋白和mRNA主要表达于小鼠子宫内膜的基质细胞团,但实验组阳性细胞的吸光度值与对照组相比差异不显著(P>0.05).结论 ISO-1可能具有促进小鼠胚泡植入的作用,且此作用具有一定的剂量依赖性;ISO-1可能通过拮抗MIF的生物学作用促进小鼠胚泡的植入.
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人体外受精低质量胚胎单卵裂球发育潜能研究
目的 探讨人低质量胚胎来源的单个卵裂球继续发育能力,并尝试建立人胚胎干细胞系.方法 采用透明带溶解法将人低质量胚胎分离成单个卵裂球,再行体外培养,观察卵裂球的生长发育情况.结果 62 个正常受精的人低质量胚胎经分离后共获取252 个单卵裂球.卵裂球经体外培养继续卵裂率为47.6%,致密化率为28.6%,早期囊胚形成率为20.2%,晚期囊胚形成率为13.1%,滋养层细胞样生长物形成率为9.1%,无人胚胎干细胞系建立.结论 人低质量胚胎的单个卵裂球通过体外培养可发育到囊胚阶段,而建立人胚胎干细胞系的方法 需进一步改进.该研究提示需根据不同的培养条件来审视卵裂球全能性,为建立低质量胚胎单个卵裂球来源的人胚胎干细胞系提供了新的思路.
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microRNAs对调控胚胎干细胞自我更新与分化的影响
胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESCs)是指存在于胚泡内细胞群中、具有高度自我更新和多向分化潜能的细胞。ESCs可以在体外无限扩增并保持未分化状态,具有分化为胚胎或成体的各种细胞类型的潜能。因此,研究 ESCs 增殖与分化机制,可以更好地了解其生物学特性,对实现ESCs的定向分化和组织工程产品的研制具有推动作用。尽管目前ESCs自我更新与分化过程中的分子机制是研究热点,但距离全面厘清此问题仍相去甚远。
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玻璃化法冻融小鼠桑葚胚期和囊胚期胚胎的效果观察
目的比较玻璃化法冻融小鼠桑葚胚期、囊胚早期和囊胚期胚胎后,胚胎存活及继续发育的能力.方法应用6 mol/L乙二醇和1 mol/L蔗糖的玻璃化冷冻液,冻融小鼠142个桑葚胚期、135个囊胚早期和148个囊胚期胚胎,观察冻融后胚胎存活及继续发育的情况.结果小鼠桑葚胚期、囊胚早期和囊胚期胚胎的存活率分别为88.0%、73.3%和60.1%,囊胚孵出率分别为73.9%、61.5%和49.3%.桑葚胚期的胚胎存活率及囊胚孵出率均高于囊胚早期,囊胚早期高于囊胚期,各期胚胎存活率、囊胚孵出率比较,差异均有显著性(P＜0.05).结论玻璃化法冻融桑葚胚期的效果好于囊胚早期及囊胚期,桑葚胚期是卵裂期后胚胎玻璃化冻融的佳阶段.
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降钙素对人类胚胎着床的影响
目的探讨降钙素(calcitonin,CT)对人类胚胎着床调节的影响.方法用不同浓度(2、5、10 nmol/L)的CT,刺激体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞,应用粘附细胞仪观察细胞内钙离子(Ca2+)浓度变化;再用不同浓度(2、5、10 nmol/L)的CT分别作用于人种植前2细胞期、4细胞期、8细胞期胚胎,通过粘附细胞仪检测种植前胚胎荧光相对强度,观察细胞内Ca2+浓度的动态变化.结果各种浓度CT对子宫内膜腺上皮细胞内Ca2+浓度均无影响,而CT可以快速增加间质细胞和种植前胚胎细胞内Ca2+浓度,并且呈剂量依赖性,CT浓度为10 nmol/L时,作用3 min,细胞内Ca2+浓度开始增加,6 min达到高峰, 4细胞期胚胎开始出现对CT刺激的反应,8细胞期胚胎效应强,CT对细胞内Ca2+浓度的影响可以持续2 h.结论种植前胚胎表面和子宫内膜间质细胞上,可能存在CT功能性受体,CT可能通过加速子宫内膜蜕膜化、促进胚胎生长、分化,而促进胚胎着床.
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低回收卵患者囊胚培养和移植结局的初步探讨
目的探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中,在低回收卵数患者中进行囊胚培养和移植是否能改善IVF结局.方法回顾分析2000年1月至2月在我室行IVF治疗的59例患者的临床资料.其中21例行囊胚培养(囊胚组),在受精后第5天移植;另38例行常规的第2天胚胎移植(对照组).比较分析两组患者的临床结局.结果囊胚组平均取卵数(6.6±2.8)个,临床妊娠率为43%,分娩率38%;对照组平均取卵数(6.9±3.7)个,临床妊娠率为37%,分娩率29%,两组比较,差异无显著性(P＞0.05).囊胚组无一例出现高序多胎,对照组出现1例3胎,1例5胎.结论在IVF-ET中,对低回收卵数患者进行囊胚培养和移植与常规第2天移植相比,并不会显著提高妊娠率,但却可以在不降低妊娠率的情况下,减少多胎的出现.
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序贯培养在体外受精-胚胎移植技术中的应用
目的试用序贯培养方法延长胚胎体外培养时间，以获得8细胞胚及囊胚进行移植，提高体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的成功率。方法将行IVF-ET的161例患者共1 823个卵子分为序贯培养（使用P1液、B液系列培养液,47例、47个周期）与传统培养(114例、114个周期)两组进行培养，分析受精率、卵裂率、卵裂速度、优质胚胎比率及临床妊娠率，采用χ2检验进行统计学分析。结果序贯培养组卵裂率、优质胚胎比率、胚胎着床率及妊娠率分别为97.9%、64.4%、19.1%和46.7%，传统培养组分别为89.7%、40.2%、11.0%和28.2%，两组比较，差异有显著性（P<0.05）。结论采用适合的培养液进行序贯培养，更适合于卵子及胚胎的体外发育，方法安全可行。
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胚胎干细胞的生物学特性及其应用
1981年Evans和Kaufman首次建立了小鼠胚胎干细胞系[1].关于人的胚胎干细胞早文献记载是在1994年,ES细胞是从人胚泡的ICM中分化而成的,但只传了二代未能建系成功[2].1998年JamesThomson等[3]从人胚泡的ICM分离出ES细胞并建系成功;同年JohnGearhart等[4]从5～9W流产的胎儿生殖嵴中分离出人胚胎生殖细胞(embryonic germcell,EGC),这些都为ES细胞的研究奠定了基础.由于ES细胞具有全能分化潜能和无限扩增能力,在体外可分化成各种细胞和组织用于进行替代治疗,因此ES细胞成为21世纪生命科学研究领域的热点之一.现将胚胎干细胞的生物学特性以及应用进展进行综述.
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Lewis Y寡糖在小鼠胚泡表面的表达受α1,2-岩藻糖基转移酶基因的反馈调控
目的探讨胚泡的Lewis Y寡糖合成关键酶α1,2-岩藻糖基转移酶基因FUT1及α1,3-岩藻糖基转移酶基因FUT4的表达和其表面Lewis Y寡糖抗原表达间的关系.方法以寡糖特异性单克隆抗体封闭体外培养的胚泡表面Lewis Y抗原,应用RT-PCR和间接免疫荧光方法检测胚泡的Lewis Y寡糖合成关键酶α1,2-岩藻糖基转移酶基因FUT1和α1,3-岩藻糖基转移酶基因FUT4及其表面Lewis Y抗原的表达.结果在胚泡表面Lewis Y寡糖被抗体封闭后,其FUT1的表达迅速升高,FUT4的表达则未见明显变化,而胚泡表面的Lewis Y寡糖在除去抗体后一直到再培养约21 h后才重新出现,在约30 h几乎全部复现.结论着床前胚泡表面的Lewis Y寡糖的表达主要受胚泡α1,2-岩藻糖基转移酶FUT1的反馈调节.
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台盼兰染色小鼠胚泡着床点的观察研究
本实验探讨用硫堇和台盼兰染料对妊娠4～5d小鼠进行活体染色以显示胚泡着床位点的可能性.研究结果:1.台盼兰可用作胚泡着床点的染色反应,具体方法是:尾静脉注射0.5%台盼兰0.3ml,10min后观察,而硫堇则无效;2.着床点数目在两侧子宫角内的分布有显著差别,左右子宫角内分别为6.40±1.64和4.80±2.40个;3.着床点的间距为2.25±0.87mm.
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细胞生物学
自1998年Thomson等[1]成功地从人胚泡培养成功胚胎干细胞(embryonic stem cell)以及Gearhart[2]从人胚胎生殖嵴的原始生殖细胞中分离和培养多能性(pluripotency)干细胞之后,人们立即认识到干细胞生物技术具有的特殊科学意义和临床应用前景,并且很快成为生命科学研究的热点以及细胞生物学主要的课题.
