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脑血管畸形:发病之前有端倪
隐藏在脑中的“不定时炸弹”张志文教授介绍说,,脑血管畸形是人胚胎发育过程中脑血管发生变异而形成的一种先天性、非肿瘤性发育异常.多见于年轻人,确诊年龄一般是20～40岁.脑血管畸形分为脑动静脉畸形,海绵状血管瘤、静脉畸形和毛细帆管扩张症.其中,脑动静脉畸形是脑血管畸形中常见的一种,占90%以上.
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男性生殖相关基因功能研究策略
男性不育是较为常见的病症,约4%的男性受到不育的困扰.男性原发性不育与男性生殖相关基因的缺陷有密切关系.近年来,国内外发表了大量文献展示了新发现的与男性生殖相关的基因.刘美玲等[1]在采用抑制性消减杂交技术(SSH)筛选大鼠精原细胞与精母细胞差异表达基因过程中,发现了大鼠睾丸特异表达基因LM23基因.沙家豪所在的重点实验室运用人胚胎和成人睾丸cDNA探针与人睾丸dDNA微阵列杂交,通过差异杂交的克隆进行序列测定和分析,筛选
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人参总皂苷对人胚胎神经干细胞增殖及定向诱导为多巴胺能神经元的影响
目的:探讨人参总皂苷(TSPG)对人胚胎神经干细胞(NSC)增殖和分化为多巴胺(DA)能神经元的影响.方法:从7～12周人工流产胚胎脑组织中分离培养人胚胎NSC,免疫细胞化学鉴定NSC特异性nestin抗原表达,在NSC的培养体系中加入TSPG,采用流式细胞术和MTT法检测不同浓度TSPG以及TSPG与EGF,bFGF联合应用对人胚胎NSC增殖的影响;经免疫细胞化学检测培养细胞酪氨酸羟化酶(TH)表达,分析不同浓度TSPG以及TSPG与IL-1联合应用对NSC定向诱导为DA能神经元的影响.结果:TSPG对NSC的增殖有促进作用,TSPG与EGF、bFGF联合应用的促增殖作用是EGF和bFGF联合应用时的2倍;TSPG能促进神经干细胞定向分化为DA能神经元,TSPG与IL-1联合诱导的效果是单用IL-1的5倍.结论:TSPG能促进人胚胎NSC的增殖,并能诱导NSC向DA能神经元分化.
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中国早应用老母丸克隆成功人胚胎
根据300年前的手抄本"老母丸"和寡妇孕胎并参考有关现代克隆技术和部分国外信息2009年7-8月间,我在多年来看到的科技信息和有关克隆资料的回忆中,突然产生了"灵感",这不就是300多年前手抄本中哪个<老母丸>中所记述的年53岁陈寡妇因不相信<老母丸>神奇治疗的效果,戏服了该药,之后,"老色改变,容如少女,守寡有孕,后将胎墜落,心下疑之,从无配合,胎从何来?看其无骨,以有阴无阳之故耳."
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体外培养的人源神经干-祖细胞超微结构分析
目的 研究神经干细胞的超微结构.方法 利用无血清培养技术从人胚脑组织中分离培养神经干-祖细胞,扫描及透射电镜观察单个神经干-祖细胞及神经球的超微结构.结果 所得神经干-祖细胞体外培养呈典型的神经球样生长.神经球内部由细胞以及无定形结构的物质构成,根据电子密度的不同可分明细胞和暗细胞.相邻细胞间存在细胞连接,部分相邻细胞间以及连接处的胞膜内侧可见小囊泡样结构,部分相邻细胞间还可见胞膜融合.扫描电镜下可见单个神经干-祖细胞呈球形,表面不光滑.透射电镜下可见神经干-祖细胞胞核大,胞质少,核质比高,多种细胞器不发达,多数细胞中自噬小体多见.神经干-祖细胞间存在明显的异质性,包括高尔基复合体、核糖体、溶酶体、神经微幺幺及微管等在不同神经干-祖细胞中的含量和分布均不一致.单个细胞的细胞核多呈球形,也可见.肾形和分叶状,而神经球中细胞核欠规则.神经干-祖细胞常染色质多,异染色质少;单个核仁多见,两个或以上核仁罕见.结论 人胚胎来源的神经干-祖细胞及神经球超微结构中见到的自噬小体、相邻细胞间以及相邻处的胞膜内侧的小囊泡样结构、相邻细胞间的胞膜融合现象,可为研究腩肿瘤干细胞的超微结构奠定基础.
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nNOS、Pax3和Cx43蛋白在人胚胎早期脊髓中的表达及意义
目的 探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、转录调控因子成对盒3(Pax3)和连接蛋白43(Cx43)在人胚胎发育早期脊髓中的分布规律及其表达意义.方法 应用免疫组织化学SABC法.检测第5～16周人胚胎脊髓前角中nNOS、Pax3和Cx43蛋白的表达情况.结果 在第5～16周,nNOS和Pax3蛋白在人胚胎脊髓前角细胞中由弱阳性逐渐变为阳性表达;在第5～12周.Cx43蛋白在人胚胎脊髓前角细胞中均呈阴性表达;第13～16周,Cx43蛋白在人胚胎脊髓前角细胞中呈阳性表达.结论 nNOS、Pax3和Cx43蛋白与人胚胎脊髓的生长发育关系密切.
关键词： 脊髓 神经元型一氧化氮合酶 连接蛋白43 转录调控因子成对盒3蛋白 免疫组织化学 人胚胎 -
叉头框C2在人胚淋巴管发生过程中的表达
目的 探讨人淋巴管胚胎期的发生和发育及叉头框c2(FOXC2)的表达. 方法 用淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)作为淋巴管的标记物,应用免疫组织化学SP染色及免疫荧光双标染色的方法 ,检测FOXC2和LYVE-1在妊娠5～11周的85例人胚胎标本淋巴管的表达及淋巴管的发生发育情况. 结果 妊娠7周后的胎儿颈部及胸部的淋巴管出现LYVE.1表达.在妊娠大约10周时,胎儿肠系膜间淋巴管内皮细胞开始出现LYVE-1表达.FOXC2的表达早于LYVE-1,于妊娠第6周开始在中胚层间充质明显表达.FOXC2不仅表达于淋巴管,并广泛分布于椎体、心血管等部位.妊娠11周后的胎儿淋巴管内皮细胞中仍能见到FOXC2和LYVE-1的表达. 结论 在妊娠7～8周间(人胚胎发育35～42d),淋巴管开始形成,FOXC2和LYVE-1与淋巴管的发生和发育相关.
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不同时间点人胚胎脑神经干细胞分化为神经元和胶质细胞比率的研究
目的 比较不同时间点人胚胎脑神经干细胞分化为神经元和胶质细胞的比例.方法 取胎龄8～12 周的人胚胎脑海马,机械分离成单细胞悬液,以2×106 个细胞/ml接种到含h-EGF、h-bFGF和h-LIF的DMEM/F12培养液中.用1%FBS诱导神经干细胞球分化,12 h后行RNA-结合蛋白(musashil)免疫细胞化学鉴定,分别在2、5、7、14和23 d时行β-Ⅲ微管蛋白(β-Ⅲ Tubulin/Tuj1)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(galc)免疫细胞化学鉴定.结果 诱导分化12 h时细胞球中绝大部分细胞为Musashil阳性细胞,第2 d时有少量的β-ⅢTubulin和GFAP阳性细胞,未见galc阳性细胞;第7 d时β-Ⅲ Tubulin阳性细胞数目多,约为细胞总数的48.2%,以后逐渐下降,而GFAP阳性细胞数目在第2～23 d内呈逐渐增加趋势,到第23 d时达细胞总数的65.3%;随分化时间延长,只能检测到极少量的galc阳性细胞.结论 1%FBS可促使人神经干细胞分化为中枢神经系统的3种主要细胞类型,且其分化为神经元和胶质细胞的比例在不同时间点上有显著差异.
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人胚胎纹状体组织提取液对人胚胎神经干细胞分化方向的影响
目的 对人胚胎神经干细胞(NSCs)进行分离、培养,研究纹状体组织提取液对神经干细胞分化方向的影响.方法 从临床因故引产的人胚胎(胎龄8～16周)海马组织中分离、培养人胚胎神经干细胞,将其分离纯化并进行抗Nestin染色鉴定后分为两组进行诱导分化实验.A组:以基础培养基作为对照组;B组:基础培养基+人胚胎纹状体组织提取液(50ml/L).分化的第7d取出细胞爬片,分别进行抗神经特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色,抗5-羟色氨(TH)免疫荧光化学染色和RT-PCR方法检测TH-mRNA的表达. 结果培养的海马细胞经抗Nestin染色后呈Nestin阳性,证明为神经干细胞.诱导分化后对照组与实验组的NSE阳性细胞率分别为(21.89±2.17)%和(23.50±1.60)%,两组比较结果无统计学差异(P>0.05).TH阳性细胞率分别为(0.53±0.17)%和(7.38±0.84)%,两组比较有统计学差异(P<0.05).RT-PCR检测结果表明,TH-mRNA在对照组中无明显表达,纹状体组织提取液组神经干细胞分化后,TH-mRNA表达明显,两组比较有统计学差异(P<0.05). 结论在体外培养中,人胚胎纹状体组织提取液对神经干细胞向神经元分化无明显促进作用,但能促进人胚胎神经干细胞向多巴胺能神经元分化.
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人胚胎结肠肠神经系统发育的观察
目的研究人胚胎结肠肠神经系统的发育过程,为进一步研究先天性巨结肠的发病机制提供参考. 方法采用一抗为蛋白基因产物(protein gene product 9.5,PGP 9.5)和S-100蛋白抗体的免疫组织化学PAP法,显示结肠肠神经系统中的神经元和神经胶质. 结果人胚胎结肠肠神经系统发育有明显的阶段性.在胚胎发育早期(胎龄2～3月),肠管壁发育差,以后出现菲薄的平滑肌层和低平的肠粘膜,此期偶在原始肌间神经丛位置见S-100蛋白免疫反应性神经;至发育中期(胎龄4～5月),肠壁分化出4层结构,出现相当发达的绒毛,肌间神经丛中细胞明显增多,呈弥散分布于整个肌层间并逐渐迁移到粘膜下层和粘膜层,由初级和次级突起构成复杂的神经网络;至晚期(6～9月),肠壁各层均增厚,肌间神经丛成簇分布,神经纤维构成的网络出现更为细小的3级突起,粘膜下神经丛分化形成浅丛和深丛. 结论结肠神经系的发育具有明显的阶段性.发育早期神经开始在肠壁肌间丛位置出现,发育中期神经成分在肠壁各层中出现并发育增生,晚期肠壁各层神经已分化和成熟,而在不同的发育阶段,原始病因可导致临床表现不一的先天性巨结肠症.
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子宫内膜基质细胞作为饲养层培养人胚原始生殖细胞
目的探讨子宫内膜基质细胞作为饲养细胞培养人胚原始生殖细胞的可能.方法从5～9周人胚胎生殖嵴、中肾嵴、肠系膜中消化分离原始生殖细胞(PGCs),种植于经丝裂霉素C处理的人子宫内膜基质细胞饲养层上培养.结果PGCs可以在体外培养3个多月,传14代.这样培养的PGCs表达胚胎干细胞的多种标志,如碱性磷酸酶染色、SSEA和TRA抗原等.另外细胞保持正常的染色体核型.结论人子宫内膜基质细胞可以作为饲养细胞在体外培养人胚原始生殖细胞,保持未分化状态.
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nNOS、VEGF和Bcl-2蛋白在人胚胎发育中脊髓前角的表达及意义
目的 探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白在人胚胎发育早期脊髓前角中的分布规律及其表达意义. 方法 应用免疫组织化学法检测第2、3、4月龄段,人胚胎脊髓前角中nNOS、VEGF和Bcl-2蛋白的表达. 结果 在第2～4个月龄段,nNOS和Bcl-2蛋白在人胚胎脊髓前角组织细胞中由弱阳性表达逐渐变为阳性表达.在第2个月龄段,VEGF蛋白在人胚胎脊髓前角组织中均呈阴性表达;第3～4个月龄段,VEGF蛋白在人胚胎脊髓前角组织细胞中由弱阳性表达逐渐变为阳性表达. 结论 nNOS、Bcl-2和VEGF蛋白与人胚胎脊髓前角神经元的生长发育关系密切.
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人胚胎表皮角蛋白细胞分化中PAI-2表达的研究
目的通过研究人胚胎期表皮分化中PAI-2的表达及变化规律,探讨PAI-2与人表皮角蛋白细胞的关系. 方法用免疫细胞化学及原位杂交技术对早、中、晚期人胚胎表皮角蛋白细胞染色,观察PAI-2蛋白及其mRNA原位分布、合成情况;用免疫细胞化学及核酸斑点杂交实验检测离体培养的人胚胎表皮角蛋白细胞中PAI-2的表达情况. 结果 PAI-2在人胚胎期主要存在于分化程度高的表皮浅层角蛋白细胞内.胚胎期的表达高峰在胚胎中期,胚胎晚期其蛋白水平开始降低,而mRNA则维持在相对高位.PAI-2聚集于原位及离体培养的角质蛋白细胞胞浆近胞膜处. 结论 PAI-2可能参与了表皮角蛋白细胞分化的调控.
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人胚胎中枢神经系统NOVmRNA神经元的发育--原位杂交研究
目的研究人胚胎中枢神经系统NOV mRNA神经元的发育. 方法地高辛标记的cRNA探针原位杂交技术. 结果 (1)脊髓:第16周人胚胎脊髓腹侧出现NOV mRNA神经元,为大型神经元,至第28周扩展到后角中间神经元,第38周中央灰质中阳性神经元明显.(2)延髓:第16周延髓观察到下橄榄核、舌下神经核、迷走神经背核均有阳性神经元分布,至第28周,三叉神经脊束核和楔束副核检测到阳性神经元;(3)脑桥、中脑和间脑:第32周脑桥展神经核、中脑红核和黑质、丘脑腹外侧核和背内侧核均有阳性神经元分布.(4)大脑:第32周纹状体有较多标记神经元,第38周大脑皮质顶叶阳性神经元明显.以上结果表明NOV mRNA神经元在人胚胎中枢神经系统中,首先在低级中枢出现,在高级中枢中逐渐发育;各胎龄标本中所观察到的阳性神经元多位于支配躯体运动的神经核团;随着胚胎中枢神经系统的发育,NOV mRNA神经元逐渐增多,这与其他原癌基因在胚胎发育的早期表达高,而后降低不同. 结论在人胚胎发育过程中NOV基因对神经系统的分化和进一步的功能活动可能起重要调节作用,且这种作用逐渐增强.
关键词： 肾母细胞瘤过度表达基因-mRNA 中枢神经系统 发育 原位杂交 人胚胎 -
人胚胎食管上皮的扫描电镜观察
目的了解人胚胎食管上皮的组织发生. 方法电镜和光镜观察. 结果 7周(55d)的食管上皮为复层柱状,有2～3层细胞.表层柱状细胞有稀疏的微绒毛,少数具有纤毛.12～17周时由3～6层细胞组成,表面多为柱状纤毛细胞,柱状的无纤毛细胞开始变矮.21～29周时上皮增至4～10层,表面的纤毛柱状细胞与立方细胞或梭形的无纤毛细胞在形态上的区别更为明显,它们皆分片分布.26周以后纤毛细胞逐渐减少.新生儿时上皮大多数为典型的复层鳞状,厚处达15层细胞,少量柱状纤毛细胞"岛"分散于无纤毛细胞之间. 结论 3～6月胎儿食管上皮中,复层纤毛柱状上皮占大多数.在食管肌层发育完善以前,纤毛可能有助于胎儿吞咽羊水.
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微管相关蛋白2和巢蛋白在人胚胎脊髓的表达
目的 探讨微管相关蛋白2(MAP-2)和巢蛋白在人胚胎脊髓发育阶段的分布规律及其表达意义.方法 应用免疫组织化学法,检测第2、3、4月龄段共16例人胚胎脊髓前角、中央管及后角中MAP-2和巢蛋白的表达、分布状况.结果 第2～4个月龄段,人胚胎脊髓内均可见巢蛋白表达阳性的神经纤维分布,随着胎龄的增大,脊髓前角处巢蛋白阳性表达的神经前体细胞和神经胶质细胞呈先增多再降低的趋势,在后角呈逐渐增高趋势.MAP-2在脊髓前后角神经细胞胞质中呈阳性表达,随胎龄增大而增强.结论 MAP-2和巢蛋白参与调控人胚胎脊髓神经细胞和神经胶质细胞的生长发育.
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增殖性细胞核抗原和c-Fos蛋白参与调控人胚胎脊髓的发育
目的 探讨人胚胎发育早、中期脊髓内神经细胞增殖与凋亡的变化规律及其相关蛋白增殖性细胞核抗原(PCNA)和c-Fos在脊髓中的分布规律及其表达意义.方法 应用免疫组织化学法检测第2～4月龄段人胚胎(共16例)脊髓组织中央管、前角和后角处PCNA和c-Fos蛋白的表达情况.结果 第2个月龄段,人胚脊髓基板处无PCNA蛋白阳性表达,中央管神经上皮细胞和翼板均有PCNA蛋白阳性表达;而c-Fos蛋白在脊髓基板、翼板和中央管神经上皮细胞处均呈阳性表达.随着胎龄的增大,PCNA蛋白在脊髓前角、中央管和后角均有阳性表达;c-Fos蛋白在脊髓前角神经细胞的阳性表达数量和染色强度均值均呈先降低再升高的趋势(P＜0.01),而在脊髓后角的阳性表达无明显变化.结论 PCNA和c-Fos蛋白参与调控人胚胎神经管神经上皮细胞的生长发育.
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层粘连蛋白受体在滋养层细胞肿瘤和正常绒毛血管内皮的定位意义
在滋养层细胞转化为滋养层肿瘤和良性肿瘤转化为恶性肿瘤的过程中,新生血管内皮细胞的变化是研究肿瘤发生的重要方面.出于这些考虑,我们对正常人胚胎不同发育时期、不明原因流产、增殖型和侵蚀型葡萄胎内皮细胞,用免疫组织化学方法观察层粘连蛋白受体(LNR)在血管内皮细胞的定位,比较不同定位与滋养上皮增殖、生长、分化、凋亡、迁移和浸润的关系.
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神经元核心抗原和神经元特异性烯醇化酶在人胚胎脊髓发育阶段的表达
目的 探讨神经元核心抗原(NeuN)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)在人胚胎脊髓发育阶段的分布规律及其表达意义.方法 应用免疫组织化学法检测第2、3、4个月龄段,共16例人胚胎,脊髓前角、后角中NeuN和NSE的表达、分布状况.结果 在脊髓后角处:第2个月胚龄段,NeuN呈阴性表达,部分细胞呈NSE阳性表达;第3个月胎龄段,部分细胞开始呈NeuN阳性表达,NSE则呈广泛阳性表达;第4个月胎龄段,NeuN阳性细胞表达数量和强度均较前增高,NSE阳性表达与第3个月龄相似.在人胚胎脊髓前角处:第2～4个月龄段,NeuN和NSE呈广泛阳性表达.结论 人胚胎脊髓发育第2～4个月龄段,NeuN和NSE阳性表达在脊髓的前角处早于后角,NeuN和NSE参与脊髓神经元的发育成熟过程.
关键词： 脊髓 神经元核心抗原 神经元特异性烯醇化酶 免疫组织化学 人胚胎 -
2001年"973规划"项目
有关人口与健康领域的5项新项目是:--干细胞的基础研究与临床应用;--抗原特异性免疫应答与免疫耐受的分子机制及其应用基础研究;--人胚胎生殖嵴干细胞的分化与组织干细胞的可塑性研究;--人类重大疾病的蛋白质组学研究;--中国人口出生缺陷的遗传与环境可控性研究.这些项目已经取得了阶段性突破和可喜成果.
