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人胚周皮的超微结构研究
用光镜和电镜技术对34例(6~20周)人胚手、足和背部周皮进行了观察.根据周皮发育的形态特点,归类为四期:(1)周皮泡前期;周皮表面平坦,细胞扁园,微绒毛稀少,为周皮形成期;(2)周皮泡期;此期周皮相继呈现单泡与复泡,部分区域泡上质膜凹陷呈花瓣状;(3)微绒毛期;周皮出现岛状分布的微绒毛区.细胞表面微绒毛密而长,胞质内散布大量的糖原颗粒.微绒毛区以外的周皮细胞体积增大,似气球状突起,以短蒂和不典型桥粒与中问层细胞相连;(4)周皮脱落退化期;周皮细胞变小细胞器减少,短蒂断裂,细胞脱落.文内还从形态学角度探讨了周皮存在的意义.
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人胚胎大脑标本石蜡制片及免疫组织化学方法
免疫组织化学是用标记的特异性抗体(或抗原)对组织内抗原(或抗体)的分布进行定位,在组织原位显示抗原(或抗体),抗原、抗体反应具有较高的特异性,但其结合是不可见的,必须借助可见的组织化学手段显示其反应部位,因此,免疫组织化学是目前病理学、组织学、胚胎学等多学科领域研究的重要方法.但免疫组织化学是否成功?其关键因素之一就是制作标本石蜡制片.经查阅文献,目前有关人胚胎肠[1]组织石蜡制片有少数报道,但对人胚胎大脑标本石蜡制片过程及免疫组织化学方法的操作,未见报道.现就人胚胎大脑4个月标本为例,根据本实验室工作经验,对其流程及方法进行探讨.
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胚胎小肠杯状细胞偶氮卡红染色
近几年的研究表明,杯状细胞的数量、分泌性质、形态和分布的改变与许多疾病的发生有关[1-3],越来越引起人们的关注.目前较多采用印迹细胞学方法研究杯状细胞的形态和数量变化[4],PAS加苏木精染色可显示杯状细胞所含的黏蛋白及所有细胞的细胞核.然而传统的H-E染色观察杯状细胞时主要是凭细胞形态似高脚杯来判断,而PAS反应加苏木精染色方法因细胞膜上广泛存在着糖蛋白和黏多糖使得在观察杯状细胞的数量及分布上有局限性.本实验采用偶氮卡红两色法染色观察人胚胎消化道组织杯状细胞的位置、分布及数量取得较好的效果,现报道如下.
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人胚胎肠标本石蜡制片方法的探讨
石蜡切片因操作简单,易保存等优点而成为现代组织学、胚胎学、病理学等医学科学研究领域常使用的一种方法.石蜡切片制作包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡等许多环节,每一环节都直接影响石蜡切片制作结果.目前动物标本[1]及成人组织[2]石蜡切片技术报道较多.
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小鼠发育中肾小体数目的变化规律
人胚胎时期肾小体发育就已经完毕[1],然而某些动物例如大鼠,生后仍有新的肾小体产生.目前国内外有关发育中肾小体数目的研究多见于人、猪和大鼠等[2~4],而关于发育中小鼠肾小体数目变化的定量学研究尚未见报道.本实验对胚龄10d到生后40d共12组的小鼠肾小体进行了观察和数目的测量,为研究小鼠肾小体发育提供形态定量学依据.
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人胚胎胰腺发育中微血管密度的变化
胚胎胰腺的发育经历了原始胰管的形成、胰岛原基的形成、胰腺外分泌部各级导管及腺泡的形成3个阶段,与血管的发育和分布密切相关.选用CD34标记血管内皮细胞,检测和量化组织中的微血管密度(Microvessel density, MVD),多用于推测实体肿瘤预后的指标.检测MVD来了解胚胎器官的发育很少见报道.本实验应用CD34抗体标记胚胎胰腺中的血管内皮细胞并计数,旨在探讨MVD与胚胎胰腺发育的关系.
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2001年治疗剂研究重要进展
诸如人胚胎首次克隆成功、干细胞医学方面的进步以及异种移植研究领域的进展,这些重大突破悄然间已成为2001年人们关注的中心.
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不同发育程度人甲状腺褪黑素受体表达量的变化
目的:观察不同胎龄人胚胎及成人甲状腺组织中褪黑素受体表达量的差异.方法:胚胎甲状腺取自部分母亲不宜继续妊娠的水囊引产胎儿,胎龄12~33周不等,共 12例,均经孕妇同意.成人甲状腺组织2例,取自手术切除的甲状腺囊肿旁的正常甲状腺组织,年龄分别为24、32岁.用荧光定量RT-PCR方法测定甲状腺组织中褪黑素受体亚型mt1、MT2的mRNA含量.结果:2例12周龄胚胎甲状腺组织中mRNA含量高,15、16周龄胚胎各1例甲状腺组织中mt1、MT2 mRNA含量次之.随胎龄增加,甲状腺组织mt1及MT2 mRNA含量逐渐降低,32、33周龄胚胎甲状腺组织各1例及2例成人甲状腺组织mt1、MT2 mRNA均呈阴性.统计学分析显示胚胎甲状腺组织中mt1、MT2mRNA表达量与胎龄呈指数负相关,相关系数分别为-0.96、-0.93.结论:褪黑素在胚胎早、中期可能通过褪黑素受体直接作用于甲状腺调节其功能,而在胚胎晚期以及成年人可能不通过其受体而直接作用于甲状腺.
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人胚脑皮层神经干细胞的分离培养及鉴定
目的从人胚脑皮层中分离培养并鉴定神经干细胞.方法利用无血清培养和单细胞克隆技术在人胚脑皮层中分离出具有单细胞克隆能力的细胞,并进行培养、传代、分化观察,采用间接免疫荧光检测克隆细胞的神经巢蛋白( Nestin) 抗原和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达.结果从胚龄 10周的新鲜人胚脑皮层中成功分离出神经干细胞,该细胞具有连续克隆能力,可传代培养,表达神经巢蛋白抗原.分化后的细胞表达神经元细胞、胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原.结论人胚脑皮层中存在具有自我更新能力和多分化潜能的神经干细胞.
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神经生长导向因子Slit mRNA在人胚胎脊髓的原位杂交定位
目的检测神经生长导向因子Slit mRNA在人胚胎脊髓中的定位表达.方法地高辛标记的cRNA探针原位杂交技术.结果 Slit mRNA在脊髓中央管、前角和后角处表达.结论神经生长导向因子Slit在人胚胎脊髓发育期轴突投射和神经通路形成中可能起重要作用.
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人胚中脑神经干细胞的体外分离培养及分化的研究
本文对人胚中脑神经干细胞体外分离培养及分化进行了初步研究,以期为神经干细胞临床应用提供实验依据.材料和方法一、原代中脑神经干细胞的分离培养:取胚龄10~13周水囊引产的新鲜人胚胎,在显微镜下无菌分离出胚胎中脑组织,剥除脑膜及表面血管,在PBS液中漂洗三次,用细吸管反复吹打组织碎块至完全散开,离心洗涤后吹打制成细胞悬液,经100目不锈钢滤网过滤,制成单细胞悬液,加入含B27(1∶50)(GibcoBRL)和EGF(Serotec.)20 ng/ml、bFGF(Chemicon)20 ng/ml的DMEM/F12(1∶1)(GibcoBRL)无血清培养基,台盼蓝染色计数活细胞,调整活细胞浓度为1×105/ml,将原代细胞种植于25平方厘米培养瓶(8 ml细胞悬液/瓶),37℃,5%CO2条件下静置培养.
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内皮祖细胞移植研究进展
内皮祖细胞(endothelial progenitor cell, EPC)是一类能增殖并分化为血管内皮细胞,但尚未表达成熟血管内皮细胞表型,也未形成血管的前体细胞.研究发现,EPC不仅参与人胚胎血管生成,同时也参与出生后血管新生和内皮损伤后的修复过程.因而,近年来一些国内外学者在探索通过EPC移植来促进血管新生和维持内皮功能完整,希望为一些临床疾病的治疗提供新的策略.作者就这方面的研究进展作一综述.
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人胎回肠树突状细胞的形态发生分析
目的:探索人胎回肠树突状细胞(dendritic cell, DC)的形态发生规律.方法:应用免疫组织化学术和体视学方法对人胎回肠DC的出现时间、形态参数进行分析.结果:第11w时人胎回肠固有层开始出现阳性DC,其数量随胎龄的增大而逐渐增多;回肠固有层及集合淋巴小结(Peyer's Patches,PP)阳性DC的数密度均随胎龄的增加而增大,而集合淋巴小结DC的数密度比同期固有层的要高(P<0.05);平均表面积随胎龄的增加呈现逐渐减小的趋势,而集合淋巴小结DC的平均表面积比固有层的要小(P<0.001);集合淋巴小结DC的表面积体积比比固有层的要小(P<0.05).结论:人胎回肠DC的数量随胎龄的增加而增多,固有层DC的形状、大小和数量均与集合淋巴小结DC有差异.
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先天性心脏病介入治疗和护理
在人胚胎发育时期(怀孕初期2~3个月内),由于心脏及大血管的形成障碍引起局部解剖结构异常,或出生后应自动关闭的通道未能闭合(在胎儿属正常)的心脏,称为先天性心脏病.美国报告先天性心血管病的发病率为8.l‰,我国为2~5‰,即每出生1000个婴儿,就有2个以上患有不同类型的先天性心血管病.
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胎儿主动脉纤维斑块1例报告
作者在研究人胚胎器官组织发生的过程中,发现1例胎儿的主动脉有纤维斑块,现报告如下。 材料:人工流产的女胎,胎龄约为33周,顶臀长310mm。取其升主动脉,固定于10%的甲醛、石蜡包埋,横切片厚7μm,间隔裱片,用HE法、Weigert和Van-Gieson氏法和……
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纹状体组织提取液诱导人胚胎神经干细胞向多巴胺能神经元分化的实验研究
目的 体外培养人胚胎神经干细胞并诱导其向多巴胺能神经元分化.方法 从临床引产的人胚胎(胎龄8~16周)海马组织中分离、培养人胚胎神经干细胞, 对其进行诱导分化.诱导剂采用来源于20周胎龄胚胎的纹状体的组织提取液.实验分为2组:对照组无诱导剂,培养基为撤除生长因子的基础培养基;实验组培养基中加入纹状体组织提取液50 μL/mL;于诱导分化的第7天终止诱导分化,采用标记TH的免疫荧光染色方法检测TH阳性细胞量,用RT-PCR方法检测TH-mRNA的表达情况.结果 抗TH的免疫荧光染色结果为:对照组与实验组的TH阳性细胞率分别为(0.53±0.17)%和(7.38±0.84)%,两组相比差异有统计学意义(P<0.05).RT-PCR结果显示:对照组TH-mRNA表达不明显,实验组明显表达TH-mRNA,实验组与对照组的TH-mRNA表达差异亦有统计学意义(P<0.05).结论 纹状体组织提取液具有促进人胚胎神经干细胞向多巴胺能神经元分化的作用.
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人胚胎表皮生长因子复合剂治疗糖尿病创伤疗效观察
据报道,我国糖尿病患者已逾二千万,且发病率逐年递增.该病已成为仅次于心血管病、肿瘤而被世界卫生组织(WHO)及国际糖尿病联盟(IDF)列为危害人类健康的第三大杀手,其中糖尿病患者的创伤治愈和恢复更是多年来医界棘手难题.为此我们采用了人胚胎表皮生长因子(HEGF)生物复合剂进行皮肤体外培养基础上试治4例糖尿病合并创伤患者,取得了显著的疗效.现将结果报道如下:
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人胚胎骨髓间充质干细胞大鼠脾脏移植后向肝脏的迁移与分化的研究
骨髓让间充质干细胞(MSC)具有多向分化能力,可直接来源于成人的骨髓或外周血,采集方便且不存在伦理学上的争议,具有干细胞的生物学特性及优势[1].通过MSC体外诱导分化获得肝细胞已经通过实验证实[2].我们在肝损伤大鼠脾脏内移植人胚胎MSC,移植后分时段取大鼠肝脏,观察移植细胞是否能够迁移到肝脏,并且分化为肝细胞.
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涎腺肿瘤组织芯片的制备
涎腺肿瘤发病率较低,病理资源难得,组织芯片的成功运用对于涎腺肿瘤的研究是一有力工具.1 材料与方法1.1 材料收集115例涎腺肿瘤样本蜡块、人胚胎软骨组织及正常涎腺组织样本蜡块备用.
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人胚成釉细胞体外培养的实验研究
目的:探索成釉细胞离体培养方法, 建立成釉细胞体外模型.方法:运用组织细胞培养技术分离人胚成釉细胞进行原代培养,倒置显微镜下观察培养细胞生长特点,免疫组织化学染色检测培养细胞釉原蛋白.结果:培养细胞成片生长,细胞形态结构清楚.免疫组化染色,多数细胞抗釉原蛋白抗体染色阳性.结论:用消化培养法,胶原做基质饲养层,含5%小牛血清的HAMF-12作培养基并加入EGF、INS、HC,可用于人成釉细胞的体外培养.