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长春新碱对斑马鱼神经发育和行为的影响
目的 以斑马鱼胚胎/幼鱼为实验对象,探索长春新碱对斑马鱼神经发育毒性和行为的影响及其毒性的分子机制.方法 采用表型观察、触及逃避、幼鱼的自主运动、强光刺激惊恐反射能力等实验及RT-PCR,整体免疫荧光等手段.结果 (1)长春新碱具有斑马鱼胚胎神经和心脏发育毒性;(2)长春新碱具有幼体神经毒性,幼鱼呈浓度依赖性的侧卧体位;自主运动显示幼鱼呈长春新碱浓度依赖性的常规转弯能力下降,运动轨迹紊乱,平均运动速度降低,不活跃运动持续时间增加等神经抑制行为;(3)光刺激实验显示高剂量(30和40 μg/ml)长春新碱处理组幼鱼被刺激后应激反应能力变弱,学习记忆能力下降;(4)长春新碱导致多巴胺能神经元相关基因th、dat的转录水平下调,诱导幼鱼间脑及下丘脑多巴胺神经元细胞数量减少.结论 长春新碱具有多巴胺能神经元毒性,导致下丘脑多巴胺能神经元细胞丢失.
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大鼠生后锰接触对黑质多巴胺能神经元发育的毒性影响
目的 研究大鼠出生后锰接触对黑质多巴胺(DA)神经元发育的毒性影响.方法采用Morris 水迷宫试验检测仔鼠的肌力变化;荧光分光度计法检测仔鼠尾状核脑匀浆DA含量的变化;酪氨酸氢氧化酶(TH)免疫细胞化学(ABC法)与图象分析相结合法检测黑质DA神经元和尾状核DA纤维的免疫反应强度和平均相对密度.结果 (1)随着染锰浓度的增高,仔鼠的肌力呈现明显的衰退;(2)尾状核脑匀浆的DA含量,随染锰浓度的升高而降低;(3)黑质TH免疫反应阳性神经元和尾状核TH免疫反应阳性纤维的反应强度、以及相应的TH阳性产物的平均相对密度,均随着染锰浓度的升高而显著下降.结论大鼠生后锰接触,对黑质多巴胺神经元的发育有明显的毒性损害,其损害程度随染锰的剂量升高而增加.
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针刺治疗帕金森病的研究进展
帕金森病（Parkinson's disease，PD）是常见于中老年人的神经变推行性疾病，临床上以静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势步态障碍为主要特征。其主要病理改变是黑质纹状体多巴胺能神经元变性及黑质残存的神经细胞质内出现嗜酸性包涵体，即 Lewy小体。我国65岁人群的 PD患病率为1.67%，且发病率随年龄增加而升高，男性稍高于女性［1］。PD高发病率及高致残率严重影响患者生活质量，一些药物只能改善其症状，不能阻止病情的发展。本病属中医“颤证”范畴，为本虚标实之证，肝肾阴虚、气血不足为病之虚，风、火、痰为病之实。近年来，针刺治疗PD有一定的疗效，现将有关此方面的临床和实验研究文献综述如下。
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钩藤碱对DAT基因敲除ADHD模型小鼠多巴胺能神经元代谢的影响
目的 研究钩藤碱对多巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)基因敲除注意力缺陷多动障碍(attention-deficit hyperactivity disorder,ADHD)模型小鼠多巴胺能神经元及其代谢产物的影响.方法 体外ADHD模型小鼠及正常小鼠神经元细胞,分为4组:健康对照组、DAT模型组、DAT+钩藤碱组、DAT+宁动颗粒组,各组干预后0、1、3、6、12小时收集细胞及细胞培养液,并ELASA法检测细胞培养液中多巴胺(dopamin,DA)、多巴胺代谢产物高香草酸(homovanillic acid,HVA)、代谢酶单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)及神经营养因子(brain derived neutrophil factor,BDNF)含量.结果 DAT模型组中,在时间上3、6小时作用多巴胺的代谢达到高峰;DA浓度与DAT模型组及健康对照组比较,DAT+钩藤碱组与DAT+宁动颗粒组培养液中含量均明显降低(P<0.05),HVA浓度、MAO浓度、BDNF浓度均显著增高,且DAT+钩藤碱组与DAT+宁动颗粒组间无显著性差异.结论 钩藤碱可以通过调节MAO活性及BDNF活性促进多巴胺能神经元代谢.
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电针对帕金森病大鼠中脑黑质多巴胺能神经元氧化应激损伤的影响
目的:观察电针对帕金森病(PD)大鼠的中脑黑质超氧化物歧化酶(SOD)活力和谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)含量及对中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)表达及多巴胺(DA)能神经细胞凋亡的影响,探讨电针治疗PD的可能机制.方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常组(n=10)、模型组(n=11)、电针组(n=11)和西药组(n=11).皮下注射鱼藤酮溶液制备PD大鼠模型.电针组选“百会”“三阴交”“太冲”穴电针10 min,每天1次,7d为1个疗程,治疗2个疗程;西药组给予美多巴混悬液灌胃(1.67 mg/kg).治疗后行酶法测定右脑中脑黑质SOD、GSH-Px活力,比色定量分析法测定GSH、MDA含量;免疫组化(SP法)染色检测左脑中脑黑质TH,TUNEL法检测DA能神经细胞凋亡.结果:模型组SOD、GSH、GSH-Px均低于正常组(P＜0.05),模型组MDA高于正常组(P＜0.05);电针组SOD、GSH、GSH-Px均高于模型组(P＜0.05),电针组、西药组MDA均低于模型组(P＜0.05);电针组SOD、GSH Px均高于西药组(P＜0.05).电针组、西药组与模型组相比中脑黑质DA能神经元细胞形态较规则,体积较正常,核仁较明显,神经纤维排列较整齐,结构较密集;西药组改善差于电针组,优于模型组.电针组、西药组与模型组相比TH改善明显,阳性神经元数目增多(P＜0.05),神经元胞体轮廓及突起清晰;西药组改善差于电针组(P＜0.05).电针组、西药组与模型组相比,DA能神经细胞凋亡减少(P＜0.05).结论:电针可通过提高PD大鼠中脑黑质SOD、GSH-Px活力和GSH含量,降低MDA含量,增加TH免疫反应阳性神经元数目,抑制DA能神经细胞凋亡来治疗PD.
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藏药七十味珍珠丸对帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用
目的:探讨藏药七十味珍珠丸(RNSP)对帕金森病(PD)模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用.方法:采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)右侧纹状体单点注射法制作PD模型大鼠.将48只雄性成年SD大鼠随机分为6组:PD模型组,美多芭组(50mg/kg),RNSP低、中、高剂量组(90、180、360mg/kg),每组8只,另设正常对照组8只.各实验组灌胃给药,每天1次,连续给药4周,PD模型组及正常对照组大鼠分别给予等量0.9％氯化钠溶液.4周后进行旋转实验,免疫组化法观察大鼠黑质致密部络氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的表达,高效液相色谱-电化学检测法检测大鼠纹状体内多巴胺(DA)及高香草酸(HVA)含量的变化.结果:与PD模型组比较,美多芭组及RNSP低、高剂量组大鼠旋转频率显著降低(P<0.05).与正常对照组比较,PD模型组大鼠损毁侧/损毁对侧TH阳性神经元数目比及纹状体内DA含量显著减少(P<0.01,P<0.05);与PD模型组比较,RNSP高剂量组大鼠损毁侧/损毁对侧TH阳性神经元数目比及DA含量显著增加(P<0.05).结论:RNSP可改善PD大鼠运动功能,增加黑质TH阳性神经元数目及纹状体内DA的含量,对PD模型大鼠多巴胺能神经元具有保护作用.
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头部电针透穴疗法对帕金森病模型大鼠黑质TH及DAT基因表达的影响
目的:探讨头部电针透穴疗法治疗帕金森病的作用机制.方法:将36只Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、透针组,以6-羟基多巴胺(6-OHDA)左侧纹状体注射法制备偏侧帕金森病大鼠旋转模型,透针组穴取"百会"透"太阳",每日1次,6日为一疗程.其他3组不予治疗,观察2个疗程.采用以HE染色观察大鼠黑质神经细胞组织形态变化,以RT-PCR技术检测酪氨酸羟化酶(TH)及多巴胺转运体(DAT)mRNA的表达.结果:透针组TH mRNA(1.22±0.19)及DAT mRNA(0.62±0.11)均较模型组TH mRNA(0.65±0.17)及DAT mRNA(0.41±0.08)表达明显增加(均P＜0.05).大鼠黑质神经细胞透针组较模型组数量增多,细胞变性减轻.结论:头部电针透穴疗法能使帕金森病模型大鼠黑质TH及DAT mRNA表达增高,进而可以促进多巴胺的合成与重摄取,以达到治疗帕金森病的目的.
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头部电针透穴对帕金森病模型大鼠黑质神经生长因子表达的影响
目的:探讨头部电针透穴疗法对帕金森病模型大鼠的保护作用机制.方法:健康Wistar大鼠36只随机分为正常组、假手术组、模型组和透针组,每组9只.其中假手术组于左侧纹状体微量注射生理盐水;模型组和透针组以6-羟基多巴胺左侧纹状体微量注射法制备偏侧帕金森病大鼠旋转模型;透针组在模型制备成功后采用头部电针透穴疗法进行治疗,穴取"百会""太阳",由"百会"沿皮向"太阳"透刺,接电针仪,每日治疗1次,6日为一疗程,共治疗2个疗程;其他组不予治疗干预.疗程结束后各组大鼠:(1)以免疫组织化学方法检测酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的形态、数量;(2)以原位杂交技术检测脑源性神经生长因子(BDNF)mRNA的表达.结果:(1)透针组大鼠黑质多巴胺能神经元TH阳性表达面密度、数密度及积分光密度分别为0.065±0.011、0.014±0.003、0.470±0.099,模型组分别为0.039±0.008、0.008±0.002、0.266±0.065,透针组与模型组比较大鼠黑质多巴胺能神经元TH阳性表达面密度、数密度及积分光密度均增高(均P＜0.05);(2)透针组大鼠黑质BDNF mRNA表达的面密度、数密度及积分光密度分别为0.100±0.012、0.014±0.003、1.158±0.130,模型组分别为0.047±0.012、0.007±0.001、0.602±0.108,透针组与模型组比较BDNF mRNA表达在面密度、数密度及积分光密度方面均增加(均P＜0.05).结论:头部电针透穴疗法对帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元有较好的保护作用,其机制可能与激发BDNF的神经营养作用,进而改善多巴胺能神经元形态、增加多巴胺能神经元数量有关.
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肉苁蓉对1-甲基-4-苯基吡啶离子致多巴胺能神经元凋亡的影响
目的:建立1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methy14-phenylpyridinium,MPP+)诱导的原代培养新生鼠中脑多巴胺能神经细胞凋亡模型,并探讨肉苁蓉对中脑多巴胺能神经细胞的保护作用和机制.方法:采用血清药理学的方法,肉苁蓉含药血清孵育多巴胺能神经细胞,经MPP+处理后,用TUNEL染色、流式细胞仪检测.结果:浓度为200μmo1/L的MPP+使多巴胺能神经细胞发生典型的凋亡,流式细胞仪结果显示等效剂量肉苁蓉含药血清(动物灌胃浓度1.6g原药材/kg)培养液组多巴胺神经细胞凋亡率为6.3%,空白模型组的凋亡率为30.2%,光镜下计数每视野凋亡阳性细胞数显示:含等效剂量肉苁蓉含药血清及2倍等效剂量肉苁蓉含药血清培养液组明显低于模型组(P＜0.05).结论:肉苁蓉含药血清对神经毒素MPP+诱发的多巴胺能神经细胞凋亡具有一定的保护作用.
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人参总皂苷对人胚胎神经干细胞增殖及定向诱导为多巴胺能神经元的影响
目的:探讨人参总皂苷(TSPG)对人胚胎神经干细胞(NSC)增殖和分化为多巴胺(DA)能神经元的影响.方法:从7～12周人工流产胚胎脑组织中分离培养人胚胎NSC,免疫细胞化学鉴定NSC特异性nestin抗原表达,在NSC的培养体系中加入TSPG,采用流式细胞术和MTT法检测不同浓度TSPG以及TSPG与EGF,bFGF联合应用对人胚胎NSC增殖的影响;经免疫细胞化学检测培养细胞酪氨酸羟化酶(TH)表达,分析不同浓度TSPG以及TSPG与IL-1联合应用对NSC定向诱导为DA能神经元的影响.结果:TSPG对NSC的增殖有促进作用,TSPG与EGF、bFGF联合应用的促增殖作用是EGF和bFGF联合应用时的2倍;TSPG能促进神经干细胞定向分化为DA能神经元,TSPG与IL-1联合诱导的效果是单用IL-1的5倍.结论:TSPG能促进人胚胎NSC的增殖,并能诱导NSC向DA能神经元分化.
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苁蓉总苷对MPTP帕金森病模型小鼠脑黑质多巴胺能神经元保护作用的研究
目的 探讨苁蓉总苷对MPTP帕金森病(PD)模型小鼠脑黑质多巴胺能(DA)神经元的保护作用.方法 将小鼠随机分为正常组、模型组、苁蓉总苷高(400 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量组,各组在造模前3天灌服相应药物;采用MPTP(30 mg/kg)连续5天腹腔注射制作小鼠慢性PD模型,运用爬竿试验定量组织化学检测小鼠的神经行为,免疫组化法测定小鼠脑纹状体酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性纤维表达以及黑质TH神经元数量的变化.结果 在造模后7天和14天时,与模型组比较.苁蓉总苷高剂量组爬杆时间缩短(P＜0.01),苁蓉总苷各剂量组纹状体TH阳性纤维的平均光密度值均明显增高(P＜0.01);3个剂量组的苁蓉总苷均能对抗MPTP导致的TH阳性神经元数量减少,但只有高剂量组在两个时间点上与模型组的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 苁蓉总苷能够显著改善PD模型小鼠的神经行为、抑制脑黑质DA神经元的数量减少和纹状体TH表达的降低.
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从神经血管单元探讨中医药治疗帕金森病的思路
帕金森病(PD)临床治疗主要以多巴胺(DA)替代疗法为主,疗效并不理想.近年来研究表明,神经血管单元包括脑血管内皮转运机制异常所导致的神经毒性物质清除障碍以及与DA能神经元、胶质细胞相互作用功能异常可能是PD发病的重要原因.重视神经血管单元中各成分的相互作用,将其作为一个功能性整体来研究,并运用中药多组分、多层次、多靶点和多机制的优势,在诸多靶点中选择有效的干预,是中医药治疗PD的新思路.
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“肾脑相济”电针疗法对帕金森病模型小鼠中脑黑质胶质细胞的影响
目的 探讨电针治疗帕金森病的可能作用机制. 方法 将48只小鼠随机分为空白组、模型组、电针组和美多芭组,每组12只.除空白组外,其余各组采用1-甲基-4-苯基1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)腹腔注射建立帕金森病小鼠模型.空白组灌服生理盐水0.2ml,美多芭组灌服美多芭混悬液50 mg/kg,每天1次.电针组给予“肾脑相济”电针疗法,针刺“肾俞”“百会”“太溪”穴,每日1次,每次20 min,每日取左侧或右侧交替针刺治疗.各组均干预4周.观察小鼠的行为状态,小鼠中脑黑质中酪氨酸羟化酶(TH)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、离子钙接头分子(Iba-1)阳性细胞数及蛋白表达.结果 模型组小鼠行为状态较空白组明显变差,关多芭组与电针组小鼠行为状态较模型组改善.与空白组比较,模型组小鼠中脑黑质TH阳性细胞数量及蛋白表达明显减少,GFAP和Iba-1阳性细胞数量及蛋白表达明显增多(P＜0.05);与模型组比较,电针组和美多芭组小鼠TH阳性细胞数量及蛋白表达明显增多,GFAP和Iba-1阳性细胞数量及蛋白表达明显减少(P＜0.05).美多芭组与电针组各指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 “肾脑相济”电针疗法抑制星形胶质细胞和小胶质细胞的活性,从而增加其对多巴胺能神经元的保护作用,可能是其治疗帕金森病的作用机制之一.
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天麻钩藤饮对帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元凋亡的影响
目的 研究天麻钩藤饮对帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型大鼠多巴胺能神经元凋亡的影响.方法 采用6-羟基多巴胺注射于脑右侧黑质造成单侧PD损毁模型,并将造模成功的大鼠随机分为模型组和天麻钩藤饮组(给药浓度为5.13g/ml),共给药14天.同时设立正常对照组、假手术组.应用TUNEL、透射电镜观察多巴胺能神经元凋亡的变化,免疫组化法观察黑质Bcl-2、Bax的表达.结果 模型组均能检测到TUNEL染色阳性细胞核,且模型组凋亡细胞数明显多于正常对照组、假手术组(P＜0.01).天麻钩藤饮组也能检测到凋亡细胞核,但与模型组比较,凋亡细胞数较少(P＜0.01).与正常对照组及假手术组比较,模型组Bax和Bcl-2表达水平均显著升高(P＜0.01),且以Bax蛋白升高为主;而与模型组比较,天麻钩藤饮组Bcl-2显著升高,Bax显著降低(P＜0.01).电镜结果显示,天麻钩藤饮组神经细胞病理变化比模型组明显为轻.结论 天麻钩藤饮对PD模型大鼠多巴胺能神经元凋亡有明显抑制作用,其作用机制可能是通过抗氧化应激,升高Bcl-2,抑制Bax激活而实现的.
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多效生长因子诱导人脐血间充质干细胞向多巴胺能神经元样细胞分化
目的 探讨多效生长因子(PTN)诱导人脐血间充质干细胞(CB-MSCs)向多巴胺(DA)能神经元样细胞分化的可能机制.方法 密度梯度离心和贴壁筛选法纯化CB-MSCs,加入重组人FTN(rPTN)作为诱导组(rPTN组),以单纯传代培养的CB-MSCs作为对照(CON组),培养48 h后用免疫荧光染色和RT-PCR鉴定CB-MSCs表达PTN及其受体SDC3和ALK,以及诱导分化的细胞表达TH、DAT和NSE的情况.结果 随rPTN诱导时间延长,CB-MSCs形态发生变化,TH、DAT和NSE的表达明显增加,免疫荧光细胞阳性率:TH(CON组)为3.77%±0.42%,(rPTN组)为7.91%±0.55%;DAT(CON组)为1.89%±0.28%,(rPTN组)为6.21%±0.77%;NSE(CON组)为4.35%±0.76%,(rPTN组)为7.67%±0.97%,同对照组相比(P<0.05);诱导的CB-MSCs表达PTN受体SDC3明显高于对照组;rPTN可诱导CB-MSCs自身表达PTN增加,免疫荧光细胞阳性率:PTN(CON组)为14.38%±0.54%,(rPTN组)为20.21%±1.51%;SDC3(CON组)为5.70%±0.78%,(rPTN组)为10.02%±1.45%;ALK(CON组)为4.87%±0.34%,(rPTN组)为5.01%±0.99%(P>0.05).结论 rPTN能够通过促进CB-MSCs上调PIN及其受体SDC3表达,诱导CB-MSCs向DA能神经元样细胞分化.
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低氧促进P19细胞向多巴胺能神经元分化
目的 观察低氧对P19细胞神经分化的影响,针对其向多巴胺能神经元分化的现象及机制进行探讨.方法 实验分为常氧组(20%O2)和低氧组(3%O2,每天低氧10 min).对诱导分化的神经元采用免疫细胞化学染色方法鉴定.用流式细胞术及Western blot检测多巴胺能神经元,高效液相色谱法测定分泌的多巴胺.用RT-PCR技术检测低氧诱导因子HIF-1 α mRNA水平.结果 ①在分化的P19细胞中,低氧组神经元含量高于常氧组(P＜0.05),低氧组多巴胺能神经元含量及所分泌的多巴胺显著高于常氧组(P＜0.001);②低氧组诱导期HIF-1 α mRNA表达水平明显高于常氧组.结论 低氧可以促进P19细胞的神经分化,尤其促进P19细胞向多巴胺能神经元分化,HIF-1α可能在其中起了一定作用.
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Desert Hedgehog诱导大鼠胚胎中脑神经前体细胞定向分化为多巴胺能神经元
目的 研究Desert Hedgehog(DHH)对胚胎中脑神经前体细胞(NPCs)向多巴胺能神经元分化的诱导作用.方法 大鼠DHH病毒上清感染COS7、NIH/3T3和9L细胞,用免疫荧光、实时定量PCR和Western blot方法 检测DHH表达.分离培养大鼠胚胎中脑神经前体细胞,免疫荧光鉴定神经前体细胞的增殖分化特性.条件细胞表达DHH成功后分别与上述NPCs共培养10 d,免疫荧光检测酪氨酸羟化酶(TH)的表达.结果 DHH在COS7、NIH/313和9L细胞中成功表达;同时,分离培养的大鼠胚胎中脑神经前体细胞具有良好的增殖分化特性,但两者共培养10 d后偶见TH阳性的细胞.结论 DHH编码的蛋白不能或不能单独诱导NPCs定向分化为多巴胺能神经元.
关键词： Desert Hedgehog 神经前体细胞 多巴胺能神经元 分化 大鼠 -
大鼠脑黑质区注射LPS致多巴胺能神经元及血清TNF-α的变化
目的 研究脂多糖(LPS)对黑质多巴胺(DA)能神经元的毁损情况及其与血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平之间的关系.方法 向大鼠右侧黑质立体定位注射LPS或PBS后,用免疫组化法观察DA能神经元的损伤状况,用放射免疫法测定血清TNF-α水平.结果 LPS注射后24 h右侧黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元较左侧显著减少(P<0.001),14 d达到低点,14～28 d没有明显改变;血清TNF-α水平在LPS组24 h、14 d和28 d显著高于对照组(P<0.01);LPS组大鼠的黑质TH阳性神经元存留率与其血清TNF-α水平之间存在负直线相关(P<0.05).结论 LPS注入黑质能诱导DA能神经元变性、血清TNF-α水平升高,且两者之间存在负直线相关.
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低氧促进hMSCs向多巴胺能神经元分化
目的 观察低氧对体外培养的人骨髓间充质于细胞(hMSCs)向多巴胺能神经元分化的影响.方法 采用细胞免疫化学法、流式细胞分析和高效液相色谱-电化学法,检测多巴胺能神经元的数量以及诱导分化后培养基中多巴胺的含量.结果 低氧处理后,低氧分化组酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数量明显增多,为常氧分化组的3倍(P＜0.01),并且分化后的神经细胞合成的多巴胺(DA)及其代谢产物高香草酸(HVA)含量也高于常氧分化组(P＜0.05).结论 低氧可促进hMSCs向多巴胺能神经元方向分化,这为hMSCs临床应用于治疗帕金森病提供了新的思路.
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影响多巴胺能神经元体内外分化的因素
帕金森病是神经系统变性疾病,以黑质多巴胺能神经元变性缺失为特征.现在,人们通过对多巴胺能神经元体内外分化条件的研究,获得利于其分化和存活的佳条件,为帕金森病的细胞替代治疗提供充足的多巴胺能神经元.本文对体内外神经干细胞向多巴胺能神经元诱导分化的影响因素做一综述.
