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人口腔粘膜上皮角朊细胞的体外培养
人口腔粘膜上皮角朊细胞的原代培养有许多困难,其中主要是上皮细胞接种成活率、产量和成纤维细胞污染的问题。我们比较酶消化法和组织块法建立口腔粘膜上皮角朊细胞体外培养模型,并用免疫组织化学法进行培养细胞的定性研究。 1.材料:培养物来源于5个月~10岁唇裂患者修复术中的口内粘膜。切取唇内侧粘膜组织修复剩余物若干,每块约0.5 cm×0.5 cm大小。 2.方法:①酶消化法:用D-Hanks液冲洗粘膜块,剪切至0.2 cm×0.2 cm大小。配制0.3 kg/LⅠ型胶原酶和0.4% Dispase消化液的混合液(1∶1)5 ml,将粘膜块放入其中,密闭放入4℃冰箱内12~20 h。将表皮从基底撕脱,放入5 ml 0.25%胰蛋白酶液中吹打5 min,终止消化。低速离心5 min,去上清,加入5 ml含15% 胎牛血清的基础培养液中,制成细胞悬液并调整细胞数目在5×108/L,接种于25 ml培养瓶中。②组织块法:将肉眼可见的粘膜下组织尽量去除。剪切至0.1 cm×0.1 cm大小,用探针将小组织块以0.5 cm的间距放于25 ml培养瓶内用多聚赖氨酸处理过的小盖片。轻轻翻转,放入37℃温箱2~4 h,加入2 ml含15%胎牛血清的基础培养液,轻轻翻转培养瓶,使培养液浸没组织块,静置培养,每周换液2次。
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人胚中脑神经干细胞的体外分离培养及分化的研究
本文对人胚中脑神经干细胞体外分离培养及分化进行了初步研究,以期为神经干细胞临床应用提供实验依据.材料和方法一、原代中脑神经干细胞的分离培养:取胚龄10~13周水囊引产的新鲜人胚胎,在显微镜下无菌分离出胚胎中脑组织,剥除脑膜及表面血管,在PBS液中漂洗三次,用细吸管反复吹打组织碎块至完全散开,离心洗涤后吹打制成细胞悬液,经100目不锈钢滤网过滤,制成单细胞悬液,加入含B27(1∶50)(GibcoBRL)和EGF(Serotec.)20 ng/ml、bFGF(Chemicon)20 ng/ml的DMEM/F12(1∶1)(GibcoBRL)无血清培养基,台盼蓝染色计数活细胞,调整活细胞浓度为1×105/ml,将原代细胞种植于25平方厘米培养瓶(8 ml细胞悬液/瓶),37℃,5%CO2条件下静置培养.
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介绍一种简易的成纤维细胞培养方法
在研究人体细胞生物学、体细胞遗传学和疾病诊断方面,成纤维细胞培养日渐成为一种不可缺少的手段.目前,有关成纤维细胞的培养方法不尽相同.笔者经多次实验总结出一种相对简易的成纤维细胞培养方法,供同道们参考.1 材料和方法手术切取成年健康兔全层皮肤0.5cm2~1.0cm2,置盛有含10%~15%小牛血清RPMI1640(Sigma USA)营养液的容器内,在净化工作台下用眼科剪和镊将皮下脂肪组织去除干净,以PBS或Hank's液反复冲洗三次(末次可用RPMI1640液),将其剪成0.5mm3~1mm3的小块,以每块1cm的间距接种在1~2个玻璃或塑料培养瓶中,然后将其翻转倒置(接种面在上)加入适量营养液,在5%CO2孵箱中静置培养3~4h后,再轻轻翻转培养瓶(接种面在下),使组织与营养液充分接触,再置培养箱内继续培养.3d后更换营养液(保留原液体量的1/3),倒置相差显微镜下定期观察细胞的动态变化,及时更换营养液并适时传代.