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超声吸引刀刀头的使用和保养
自美国于1967年首次将超声吸引探头运用于白内障摘除手术以来,超声吸引刀(又称CUSA )已经广泛地运用于大部分外科手术,包括胸科手术、神经外科、消化道手术、泌尿科手术、骨科手术、妇产科手术、整型手术。和传统手术相比:超声吸引刀(又称CUSA)不但能够减少术中出血量,而且缩短手术时间。更重要的是能够安全切除以往认为危险的、不可能切除的肿瘤组织。同时避免了残留癌细胞种植的危险,对术后肿瘤复发率的减少起到了较好的作用。 CUSA性能稳定,操做方便,使用时无噪音,无异常气味,能较好裸露和处理肝内管脉,可清楚显示断面的各种管道,从而安全结扎,出血少,一般无需阻断肝门,尤其适合肝脏深部和肝门区一些较大管道的解剖。
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PLA及PGA生物可降解聚合物在骨科的研究应用
目前,PLA及PGA的聚合物已被用来作为骨替代和骨生长因子或药物的载体,并在动物及人体取得不同程度的成功。1 生物相容性Sliedregt等将大鼠上皮细胞、人成纤维细胞及骨肉瘤细胞分别植于聚合物支架上,结果所有这些支架均表现出满意的组织相容性[1]。Miko将网状PGA纤维支架作为细胞培养支架,细胞种植后8h已与PGA网表现出高程度的交流,并且没有发生副作用。尽管大量的研究资料表明PLA及PGA聚合物的副作用几乎可以忽略,但是也有相当多的资料提醒我们PLA及PGA聚合物的副作用应尽量避免[2]。Verheyen等将L-PLA种植至乳牛的胫骨,术后发生淋巴结炎症,淋巴结病检确定为L-PLA微粒[3]。Bostman等用PLA-PGA聚合物制成的螺丝治疗120例踝关节骨折病人,有6例患者在治疗过程中出现窦道[4]。PLA及PGA聚合物副作用多与PGA有关,单独由PLA引起的副作用较少。2 在骨科实验研究中的应用2.1 在神经修复过程中的应用2.1.1 防止神经粘连侯建伟等将大鼠坐骨神经完全离断后行单纯端端吻合,吻合口处套以聚乳酸管,于术后8周取出标本,发现聚乳酸管可以有效地预防神经吻合口的粘连和疤痕组织对其产生的压迫,提高周围神经损伤后的功能恢复率[5]。
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动力型带瓣大血管培养器的设计
作者设计制作了一种用于培育组织工程化带瓣大动脉组织培养器,带瓣管道支架置于其上,经血管平滑肌细胞与内皮细胞接种后或种子细胞,培养液在支架腔内以搏动血流的方式循环.培养器模拟小循环的血流生物力学条件,其生物物理条件均可控制与调节.研制的三维支架动力培养器经模拟工作测试后证明,操作性能良好,其力学特征能满足带瓣大血管组织培养模拟肺动脉系统的基本要求,表明该培养系统从理论或实践上均具有创新和实用性.
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可降解聚合物用作骨组织工程细胞外基质材料的研究进展
组织工程学是近年来发展起来的一门新学科.它是应用生物学和工程学的原理研究开发能够修复、维持或改善病损组织功能的生物替代物的一门学科.方法是体外分离、培养细胞,将一定量的细胞种植到具有一定空间结构的三维支架上,然后将此细胞-支架复合物植入体内或体外继续培养,通过细胞间的相互粘附、增殖和分化,分泌细胞外基质,从而形成具有一定结构和功能的组织或器官.目前,应用组织工程方法研究制备出人工骨、软骨、皮肤、肌腱、血管甚至人工胰、人工肝等,其中骨组织工程研究进展较快,已经利用组织工程化骨修复骨缺损取得成功[1].但是,在骨组织工程研究中还存在许多困难,其中理想的细胞外基质材料的选择和制备是骨组织工程中十分重要而迫切的任务,也是组织工程化骨组织能否应用于临床的重要影响因素之一.
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组织工程化人工神经研究进展
利用各种神经导管可成功桥接修复短段周围神经缺损已为许多学者公认,但是,这些神经导管由于缺乏许旺细胞或内部支架来支持、促进神经再生轴突长距离生长,因此不能有效修复长段周围神经缺损[1, 2].应用组织工程技术构建神经导管,为修复长段周围神经缺损提供了新的方法和思路.这项研究的核心是模拟周围神经天然结构,将许旺细胞与生物支架材料有机结合成为类似Büngner带的结构,为再生神经提供良好的生长环境,充分发挥许旺细胞对再生神经的营养,诱导作用,从而促进神经的再生.组织工程化人工神经的主要内容是将经体外培养扩增的许旺细胞种植在具有三维支架结构,可生物吸收,半渗透性的神经导管内,桥接周围神经缺损.它涉及许旺细胞体外培养扩增,人工神经内部支架构筑,神经导管的制作等关键问题.现就上述问题的研究进展作一综述. 1 许旺细胞的培养构筑组织工程化人工神经,首先需要大量许旺细胞.但在培养条件下,许旺细胞生长缓慢,而且容易为成纤维细胞污染.为解决这些问题,以往学者们采用了抗体吸附法,反复植块培养法,有丝分裂抑制剂,或许旺细胞增殖剂等来去除成纤维细胞,刺激许旺细胞增殖分裂[3~5].但上述方法操作复杂,药物对许旺细胞有细胞毒作用,影响许旺细胞的存活率[4].近来,
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人脱细胞脐动脉支架与兔骨髓内皮祖细胞构建组织工程血管的实验研究
目的:构建小口径组织工程生物血管并观察移植于兔颈动脉后的通畅情况.方法:制备人脐动脉脱细胞支架,随机分为三组:Ⅰ.实验组:将兔皮肤成纤维细胞、下肢动脉平滑肌细胞和骨髓内皮祖细胞依次接种于纤维连接蛋白包被的血管支架上;Ⅱ.对照组:血管支架未经纤维连接蛋白包被,种植细胞种类同实验组;Ⅲ.裸支架组:未经处理的脱细胞裸支架.行HE染色观察种植细胞情况;免疫组化染色鉴定种植细胞的表型;电镜下观察人工血管内皮细胞间的连接状态.将人工血管分别移植于兔颈动脉,术后0h、2h、1d、2d、3d、7d、14d及30d后行血管超声检查,对三组移植血管通畅程度进行比较.结果:植入细胞后的人工血管动态培养2w后,Ⅰ组血管在倒置显微镜可见管腔内大量细胞附着、细胞呈密集环绕生长,HE染色结果显示:血管管腔内层均匀覆盖细胞;免疫组化染色其结果显示:管腔内层细胞高表达成熟内皮细胞表面标志CD34;扫描电镜观察血管腔内较为均匀的覆盖细胞,血管壁较为光滑呈膜性结构.Ⅱ组血管在倒置显微镜下和HE染色均未见附着的细胞;免疫组化染色显示管腔内层细胞不完整;扫描电镜观察血管腔内少量细胞覆盖,血管壁为不规则的纤维状结构.兔颈动脉移植术后立即行血管超声检测,结果显示实验组血管的内径为(3.97±0.2)mm,血流通畅,与裸支架组的(3.88±0.2)mm及对照组的血管内径(4.14 ±0.6)mm相比,差异无统计学意义(P >0.05);2h血管超声检测结果显示,实验组(3.81±0.7)mm与对照组(1.89 ±0.2)mm的血管内径有显著性差别(P<0.05),后者明显狭窄,出现血栓.30d后实验组血管内径(2.50±0.2)mm与移植0h比较显著狭窄(P<0.05).结论:人脐动脉脱细胞支架与兔骨髓内皮祖细胞构建的组织工程生物血管移植于兔颈动脉可长期通畅.
关键词: 小口径组织工程人工血管 细胞种植 血管移植 -
细胞种植支架与支架术后再狭窄
经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)及支架置入术后一年内的再狭窄发生率分别高达40%和20%[1],为降低支架内再狭窄率,除药物包被支架外,细胞种植支架也是近年来的研究热点.
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优化超声辐照条件促进EGFP在293 T细胞内转染的实验研究
目的:探讨超声辐照促进EGFP转染至293T细胞的佳条件。
方法:将293T细胞种植于24孔板内,细胞密度1.5×105/孔,24 h后更换为转染液进行超声辐照。根据辐照条件分别优化输出功率、辐照时间、微泡浓度。质粒浓度固定选择15μg/ml;输出功率选择1.5 w/cm2、2.0 w/cm2、2.5 w/cm2;辐照时间选择30s、45s、60s;微泡浓度选用20%、30%、40%。转染液为EGFP、微泡、Opti-MEM的混合液,总体积为1 ml,微泡选用sonovue,EGFP质粒浓度为1μg/μl。辐照仪器为超声基因转染仪,辐照后4 h更换为不含抗生素含血清的DMEM培养基。每个条件相互组合,重复4次。转染后72 h荧光显微镜下观察细胞内绿色荧光蛋白的绿色荧光,流式细胞仪检测荧光细胞比例,CCK-8检测细胞存活率,计算转染效率=荧光细胞比例×细胞存活率。统计方法采用多因素方差分析。 -
骨髓单个核细胞来源内皮细胞种植支架的实验研究
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骨组织工程学种子细胞研究与应用现状
近20年来,随着组织培养、生物材料技术的发展,对成骨细胞的来源、培养条件及生物材料进行了大量的研究.1977年Green进行了将活细胞种植到人工材料上并将此复合物植入动物体内的试验.在此基础上Ohgushi等[1]及Breitbart等[2]开始应用含有活细胞的异体植入物来修复实验性骨缺损,取得了成功的经验.1995年Vacanti等[3]正式将组织工程学定义为应用工程学和生命科学原理将经体外分离、培养的高浓度的功能相关的活细胞种植于天然的或人工合成的支架上,使之植入人体后能够形成新的有功能的组织,来制造、保存或恢复失去的组织功能.组织工程学再造组织的出现为骨修复提供了新的方法.其中,种子细胞的获取和体外培养、扩增无疑是基础和为重要的环节.
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骨组织工程中细胞外基质材料的选择
成骨细胞种植的细胞外基质材料的选择是骨组织工程研究中的关键环节,也是限制骨组织工程研究进一步发展的主要因素之一。理想的骨组织工程细胞外基质材料的要求有[1,2]:(1)良好的生物相容性:除满足生物医用材料的一般要求,如无毒、不致畸等之外,还要利于种子细胞粘附、增殖,降解产物对细胞无毒害作用,不引起炎症反应,甚至利于细胞生长和分化。(2)良好的生物降解性:基质材料在完成支架作用后应能降解,降解率应与组织细胞生长率相适应,降解时间应能根据组织生长特性作人为调控。(3)具有三维立体多孔结构:基质材料可加工成三维立体结构,孔隙率好达90%以上,具有高的面积体积比。这种结构可提供宽大的表面积和空间,利于细胞粘附生长,细胞外基质沉积,营养和氧气进入,代谢产物排出,也有利于血管和神经长入。(4)可塑性和一定的机械强度:基质材料具有良好的可塑性,可预先制作成一定形状。并具有一定的机械强度,为新生组织提供支撑,并保持一定时间直至新生组织具有自身生物力学特性。(5)良好的材料-细胞界面:材料应能提供良好的细胞界面,利于细胞粘附、增殖,更重要的是能激活细胞特异基因表达,维持细胞正常表型表达。目前,在骨组织工程研究中应用的细胞外基质材料主要有生物类材料、生物陶瓷类材料、聚合物类材料以及复合类材料。以上述要求衡量,这些材料各具优势和不足,现综述如下。
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双层血管细胞种植提高人工血管内皮细胞粘附性
目的采用血管内皮细胞(EC)和平滑肌细胞(SMC)双层种植方法,提高人工血管腔面EC的保存率. 方法聚四氟乙烯(PTFE)人工血管经纤维连结蛋白预衬处理,管腔面先后种植SMC和EC,将受试的人工血管接入脉冲式体外灌注装置灌注1 h,计算比较灌注前后受试标本SMC和EC密度. 结果灌注1 h后,单纯EC种植组61%细胞脱落,单纯SMC种植组36%细胞脱落,而双层细胞种植组仅有27%EC脱落,双层细胞种植组细胞保存率明显高于单纯EC种植组(P<0.01).低流速预灌注未能改善EC的保存率. 结论在EC和人工血管壁之间种植SMC可提高EC的保存率.
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肝素涂敷管道与体外循环
常规体外循环(CPB)中血液与人工材料表面接触可造成机械性损伤、血浆蛋白变化和血细胞激活.多种生物瀑布的激活引起术后全身炎症反应,称为"灌注后综合征",直接影响病人术后康复.所以,人们采用不同方法如内皮细胞种植、肝素涂敷等提高血液接触面的生物相容性.目前认为肝素涂敷管道可有效地提高聚合材料的生物相容性,减轻术后全身炎症反应,作为CPB中肝素减量的唯一方法,其临床应用越来越受到人们的重视.
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脉动流预适应增强组织工程心脏瓣叶上内皮细胞的黏附性
将受体的细胞种植于可降解材料或去细胞的异种或同种瓣膜上制成的组织工程心脏瓣膜无需抗凝,耐久性好,且有生长潜力,理论上是理想的心脏瓣膜替代物.但生理情况下,心脏瓣膜要受到高速、高压的血流冲击,简单的将内皮细胞种到瓣膜支架,经过血流冲击,细胞很快被冲掉.
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自制吸引器头在巨大卵巢囊肿术中的应用
妇科巨大囊肿多指如孕4个月以上大小的囊肿,常于卵巢肿瘤,个别的可长到足月妊娠大小.卵巢肿瘤手术时应遵循的原则是可疑恶性尽可能完整取出肿物,防止肿瘤被剥破、囊液流出及癌细胞种植于腹腔[1].以往切除巨大囊肿时多采用较大腹壁切口,将肿物完整取出,也有是在巨大囊肿上切一小口,然后将普通吸引器头插入囊腔吸出囊液后再切除,或用粗针头抽出部分囊液,降低囊内压后再将针眼扩大,放人普通吸引器头吸净囊液再切除囊壁;但用以上方法手术可给患者带来巨大切口的创伤和囊内液外漏污染腹腔及囊液抽出困难等问题.
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牙周组织工程研究进展
牙周骨移植、引导组织再生(guided tissue regeneration, GTR)为牙周病治疗和牙周缺损修复带来新的希望,但在恢复牙周组织的生理结构和功能上还远未达到所期望的目标.组织工程学是近年来发展起来的一门新兴边缘学科,其基本方法是将体外培养的高浓度、功能相关的活细胞种植于具有良好生物相容性和生物降解性的细胞外基质材料上,经过一段时间的培养,将这种细胞与生物材料复合体植入机体病损部位以形成新的具有其原来特殊功能和形态的相应组织和器官,达到修复创伤和重建功能的目的.将组织工程技术引入牙周组织再生治疗,为牙周病的治疗和牙周缺损的修复开辟了新的研究空间.
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骨组织工程的研究
“组织工程学”这个名称是1987年被正式提出的,早的定义是:“应用工程学和生命科学的原理和方法,认识哺乳动物正常和病理组织中结构-功能关系,并开发生物代用品,以恢复、维持或改善组织的形态和功能”。随着组织工程学研究的深入和发展,其内涵不断扩大。近年来,有人将生物材料诱导细胞分化、组织再生亦归于组织工程学范围,其定义也将会有所更改。组织工程的基本做法是,取少量自体组织,在体外分离、培养细胞,将一定量的培养细胞接种到具有一定空间结构的三维支架材料上,再将此细胞-支架复合物在体外继续培养,并植入体内培养,通过细胞生长繁殖、相互贴附、分泌细胞外基质,形成具有一定结构和功能的组织或器官。 1.骨的组织工程:骨组织工程是继软骨组织之后研究得较早、较多的对象。Vacanti(1993年)等将小牛骨膜细胞种植于多层编织的聚羟基乙酸(polyglycolic acid, PGA)支架中,然后移植于裸鼠体内,结果证实骨细胞可以增殖成为骨骼;Crane等[1]全面提出了骨组织工程研究的概念、方法、现状和前景,引起了广大学者的关注。近年来骨组织工程研究进展主要有两个方面:一是骨组织诱导;二是细胞传输[2]。和其他组织的组织工程研究原理和方法一样,组织工程骨的研究主要也是集中在种子细胞、支架材料和骨的构建3个方面。
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宫腔镜联合腹腔镜手术治疗瘢痕妊娠临床分析
剖宫产是结束高危妊娠的良好方法,近年来,剖宫产指征逐渐被放宽,剖宫产术后并发症也相应增多.剖宫产术后子宫瘢痕妊娠(caesarean scar pregnancy,CSP)是剖宫产的远期并发症之一,其危险性不容忽视,可导致子宫破裂、胎盘植入乃至孕妇的死亡[1].如漏诊、处理不及时或不当,可引起严重出血,甚至需要切除子宫.CSP是一种特殊类型的异位妊娠[2],是指受精卵、滋养叶细胞种植于子宫疤痕处,受精卵在痕疤处生长发育.近年来,CSP呈现逐年上升的趋势,其早期临床并无特异性表现,发病前难以明确诊断,若处理不当易导致阴道大出血和子宫破裂,严重者则需切除子宫以挽救生命.我们分析了我院收治的8例剖宫产瘢痕妊娠患者的临床资料,现报道如下.
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骨组织工程学对骨缺损修复研究的进展
因多种疾病(如骨坏死、肿瘤、创伤、感染及先天畸形等)引起的骨缺损临床常见,但治疗困难.近二十年来,应用生物学和组织工程学的原理,将体外培养的高浓度的种子细胞种植于天然或人工合成的细胞外基质载体上,并复合诱导因子,然后移植于体内,达到形成新的有功能的组织的目的[1].本文就骨髓基质细胞、基质材料及生长因子的特点、作用以及在实验、临床应用方面对骨组织工程学的研究作一综述.
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早期膀胱内灌注丝裂霉素预防膀胱癌术后复发
膀胱癌是泌尿外科临床上常见的肿瘤之一,是直接威胁患者生命的疾病.在我国,男性膀胱癌发病率高于女性.经尿道膀胱肿瘤切除术(TUR-BT)是非肌层浸润性膀胱癌的主要治疗手段,TUR-BT术应将肿瘤完全切除直至露出正常的膀胱壁肌层,切除肿瘤后,应进行基底部组织活检,便于病理分级及下一步治疗方案的选择,可降低术后复发几率,TUR-BT术后的患者有10%-67%在12个月内复发,可能与新发肿瘤、肿痛细胞种植或原发肿痛切除不完全有关.术后膀胱灌注化疗是临床上预防非肌层浸润性膀胱癌术后复发的常规方法,术后膀胱灌注治疗可以大大降低由于肿瘤细胞播散而引起的复发.我院自2001年1月-2011年10月共行经尿道膀胱肿瘤切除术治疗非肌层浸润性膀胱癌132例,术后均行膀胱灌注丝裂霉素化疗预防膀胱癌复发.对于术后早期(3小时内)和常规灌注化疗的疗效报告如下: