PLA及PGA生物可降解聚合物在骨科的研究应用

目前,PLA及PGA的聚合物已被用来作为骨替代和骨生长因子或药物的载体,并在动物及人体取得不同程度的成功。1 生物相容性Sliedregt等将大鼠上皮细胞、人成纤维细胞及骨肉瘤细胞分别植于聚合物支架上,结果所有这些支架均表现出满意的组织相容性[1]。Miko将网状PGA纤维支架作为细胞培养支架,细胞种植后8h已与PGA网表现出高程度的交流,并且没有发生副作用。尽管大量的研究资料表明PLA及PGA聚合物的副作用几乎可以忽略,但是也有相当多的资料提醒我们PLA及PGA聚合物的副作用应尽量避免[2]。Verheyen等将L-PLA种植至乳牛的胫骨,术后发生淋巴结炎症,淋巴结病检确定为L-PLA微粒[3]。Bostman等用PLA-PGA聚合物制成的螺丝治疗120例踝关节骨折病人,有6例患者在治疗过程中出现窦道[4]。PLA及PGA聚合物副作用多与PGA有关,单独由PLA引起的副作用较少。2 在骨科实验研究中的应用2.1 在神经修复过程中的应用2.1.1 防止神经粘连侯建伟等将大鼠坐骨神经完全离断后行单纯端端吻合,吻合口处套以聚乳酸管,于术后8周取出标本,发现聚乳酸管可以有效地预防神经吻合口的粘连和疤痕组织对其产生的压迫,提高周围神经损伤后的功能恢复率[5]。

中药对成纤维细胞增殖及胶原合成的抑制作用研究概况

临床上有多种疾病皆可引起机体组织纤维化,在此过程中,成纤维细胞起着极其重要的作用;因此,研究药物尤其是中药对人成纤维细胞的影响成为抗组织纤维化研究的热点.近年的研究表明,中药在对成纤维细胞的增殖、胶原合成等方面有显著作用,现将其研究概况综述如下.

紫外线诱导人皮肤成纤维细胞 形态改变及对基质金属蛋白酶表达的影响

目的 研究紫外线(UVB)诱导人皮肤成纤维细胞中端粒长度及基质金属蛋白酶(MMPs)的变化,及其在UVB诱导光老化中的作用.方法 原代培养人成纤维细胞,用第5代细胞进行UVB照射处理.观察细胞形态,实时定量PCR检测COL1a1和hTERT的mRNA表达细胞端粒长度,Western blot检测MMP-3和MMP-1蛋白.结果 30 mJ/cm2 UVB照射人成纤维细胞24 h后,细胞逐渐变圆、皱缩和排列紊乱;COL1a1和TERT的mRNA水平表达显著升高,基质金属蛋白酶MMP-3和MMP-1蛋白水平也显著升高,端粒长度显著缩短.结论 UVB可能诱导人皮肤成纤维细胞形态改变,及MMP-3和MMP-1的表达明显升高,启动了光老化的早期进程.

微囊化转TH基因人成纤维细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠模型的研究

目的探讨微囊化转酪氨酸羟化酶(TH)基因的细胞在帕金森病(PD)大鼠模型脑内存活、组织反应及对异常行为的治疗效果. 方法以人TH基因作为目的基因,重组到逆转录病毒载体感染人成纤维细胞,将细胞包裹在APA半透膜中进行微囊化后,植入6-羟多巴胺单侧损毁的PD大鼠模型纹状体内,观察移植物的存活状况和功能作用16周. 结果体外和植入体内的微囊化转基因细胞具有良好的存活能力.移植微囊化细胞可以使大鼠异常运动明显改善,移植位点周围的免疫反应较小. 结论微囊化对转基因细胞异种移植以进行基因治疗具有显著意义.

亚油酸对成纤维细胞增殖和分泌炎症介质影响的实验研究

目的 探讨亚油酸对人成纤维细胞增殖及其分泌炎症介质的影响及其可能的作用机制.方法 体外培养人成纤维细胞,分为正常对照组(不作任何处理)和实验组(细胞培养液中分别加入4 mmol/L、2 mmol/L、1 mmol/L、0.5 mmol/L和0.25 mmol/L的亚油酸).不同培养时相点观察细胞的光镜和电镜形态学、台盼蓝染色法绘制生长曲线、MTT法检测增殖抑制、流式细胞仪检测生长周期,ELISA法检测培养上清液中TNFα、IL-1β、IL-6、IL-8的含量,改良Griess法测定NO含量.结果 亚油酸培养48 h后,细胞增殖明显降低(P<0.05),光镜下见细胞生长缓慢,形态改变;电镜下见胞内脂滴、胞核和线粒体肿胀,部分细胞胞膜与核膜溶解破裂;流式细胞分析显示,G0/G1期、G2/M期细胞增多,S期细胞明显减少.亚油酸浓度为1 mmol/L和2 mmol/L时,实验组细胞TNFα分泌量显著高于对照组(P<0.05);亚油酸浓度为4 mmol/L时,IL-1β、IL-6的分泌量与对照组相比明显升高(P<0.01);亚油酸浓度为2 mmol/L和4 mmol/L时,细胞IL-8、NO分泌量与对照组相比明显升高(P<0.05).结论 高浓度亚油酸抑制体外培养人成纤维细胞生长、增殖,并促进人成纤维细胞分泌炎症介质.

表柔比星、脂质体多柔比星单药对膀胱癌细胞和人成纤维细胞生长的抑制作用

目的:本实验旨在探讨表柔比星和脂质体多柔比星药物对人膀胱癌细胞株T24和253J,以及人成纤维细胞生长的抑制作用,以评估2种制剂在膀胱癌治疗中的价值.方法:用不同浓度(0、0.25,0.5、1.0、2.0、4.0ug/ml)表柔比星和脂质体多柔比星分别作用于T24、253J和人成纤维细胞,MTT法检测24、48和72h时对细胞生长的抑制率.结果:2种药物对肿瘤细胞和正常细胞均有抑制作用.与对T24、253J的作用相比,脂质体多柔比星对人成纤维细胞的抑制作用较小(F=21.112,P＜0.01;F=20.541,P＜0.01).脂质体药物对T24的抑制作用强于253J(F=13.264,P＜0.01).结论:恶性程度低的膀胱癌细胞对脂质体多柔比星的敏感性高,恶性程度高的细胞则化疗敏感性低.脂质体制剂较普通制剂对于正常人成纤维细胞的毒性小.

几种生物材料种植人成纤维细胞的比较

目的通过人成纤维细胞种植,比较几种形式的聚酯材料,以及脱细胞生物组织基质的细胞亲和性,为组织工程血管及瓣膜研究选择支架材料.方法①聚氨酯(PU)、第3代聚烷酸酯[PHAs,分子表达式为p(3HB-co-3HH)]、PHAs/PU共混物分别涂在载波片上制成薄膜,将人成纤维细胞种植其上,培养3天.HE染色后于显微镜下每片取相同4点计数,得出平均值.②分别在PHAs/PU片、脱细胞牛心包片、脱细胞猪肺动脉瓣(简称猪瓣)种植人成纤维细胞,PHAs/PU片培养7天,后两者培养3天.用HE染色、扫描电镜分别观察细胞生长情况.结果①3组薄膜片上细胞平均数分别为(PU)196、(PHAs)124、(PHAs/PU)160.②扫描电镜显示PHAs/PU片表面约50 %有细胞覆盖,细胞聚合成粗大束带状结构,牛心包表面紧密覆盖着厚实的鳞甲状细胞结合体,猪瓣瓣叶表面覆盖紧密联结的板状细胞结合体.③HE染色显示PHAs/PU片和牛心包片、猪瓣瓣叶单侧有联结较完整的细胞层覆盖,局部有3～4层重叠而成,牛心包片和猪瓣瓣叶上细胞与基质联结紧密.结论①PHAs混入PU后细胞亲和性显著提高,适宜作血管及补片支架材料;②脱细胞牛心包组织和猪瓣细胞亲和性明显好于合成材料,适合作血管、补片及带瓣通道组织工程支架.

静态与动态下脱细胞猪主动脉瓣种植人成纤维细胞初步研究

目的探索在脱细胞猪主动脉瓣膜材料上种植人成纤维细胞的方法与效果;材料和方法采用在脱细胞猪主动脉瓣膜材料上静态与动态种植人成纤维细胞,并对其结果进行比较研究;结果静态种植不能在猪主动脉瓣叶的两侧形成完整的单层人成纤维细胞融合层;而经过动态种植,在一定条件下可以在猪主动脉瓣叶两侧形成完整的单层人成纤维细胞融合层;结论动态种植较之静态种植易达到形成完整均匀的细胞种植效果.

复方汉防己对人成纤维细胞ICAM-1及CD126表达的影响

作者的临床研究结果提示复方汉防已有良好的抗肝纤维化作用,但其机制尚不清楚,本文观察复方汉防己对培养的成纤维细胞表达细胞间粘附分子 ICAM-1,CD126的影响,探讨其抗肝纤维化机制.

TGF-β对 AngⅡ调节人成纤维细胞 Toll 样受体2表达中的影响

目的：研究生长转化因子β（ transforming growth factor beta ，TGF-β）在血管紧张素Ⅱ（ AngiotensinⅡ，AngⅡ）对体外培养的人成纤维细胞（HT-1080）toll样受体2（toll like receptor 2，TLR2）调控中的作用。方法取处于对数生长期的成纤维细胞，分为5组：空白对照组、阴性对照组，AngⅡ刺激组、TGF-β刺激组、TGF-β抑制剂Decorin＋AngⅡ共刺激组。给药后采用实时定量PCR检测各组细胞内TLR2基因的表达量，并对各组结果进行统计分析。结果AngⅡ作用组中TLR2的表达量高于空白对照组（ P ＜0．05）；TGF-β组中低浓度（0．1、0．01μg/L）促进细胞内TLR2的表达，且表达量高于空白对照组，高浓度（1．0、10μg/L）抑制TLR2的表达，且表达量低于空白对照组（ P ＜0．05）；TGF-β抑制剂Decorin和AngⅡ联合作用组中TLR2的表达量高于空白对照组，且高表达量高于其他各组（ P ＜0．05）。结论 AngⅡ能够上调HT-1080中TLR2的表达量；TGF-β高浓度时抑制HT-1080中TLR2表达量，低浓度时促进TLR2的表达；在TGF-β低浓度时可与AngⅡ协同促进HT-1080中TLR2的表达。

异种(猪)无细胞真皮基质的制备及体外生物相容性

背景:人同种无细胞真皮基质作为一种永久性真皮支架,已成功应用于烧伤创面修复及美容医学等领域,但由于来源有限,限制了其应用.目的;研制异种(猪)无细胞真皮基质,并对其体外生物相容性进行评价.设计、时间及地点:体外细胞学对比观察实验,于2007-08/2008-06在中国辐射防护研究院生物材料与制药技术研究所实验室完成.材料:实验猪由中国辐射防护研究院实验动物中心提供;人成纤维细胞来自武警山西总队医院健康儿童包皮环切术切除的包皮组织.方法:无菌条件下获取健康小白猪猪皮,用高渗盐溶液-去污剂、胰酶消化及超声清洗的方法,制备猪无细胞真皮基质.体外培养人成纤维细胞,用猪无细胞真皮基质浸提液法及人成纤维细胞和猪无细胞真皮基质直接贴附法,评价猪无细胞真皮基质体外生物相容性.主要观察指标:①猪无细胞真皮基质的组织学形态.②猪无细胞真皮基质的体外生物相容性.结果:制备的猪无细胞真皮基质,完全去除了表皮和真皮中的细胞成分,保留了胶原基质.猪无细胞真皮基质浸提液对人成纤维细胞增殖无明显影响.人成纤维细胞可以在猪无细胞真皮基质上贴附、增殖.结论:此种方法制备的无细胞真皮基质完全去除了表皮和真皮中的细胞成分,有较好的体外生物相容性.

槲皮素对人成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 探讨槲皮素对人成纤维细胞(HSF)生长及胶原分泌能力的影响.方法 原代培养HSF,并以不同浓度的槲皮素干预24 h,以MTT法检测细胞增殖能力,以流式细胞术测定其细胞周期,对培养上清用碱水解法测定其中羟脯氨酸(Hyp)含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)及透明质酸(HA)含量.结果 槲皮素作用HSF 24 h后,与对照组比较,槲皮素各剂量组细胞处于增殖期的细胞数目、增殖能力逐渐增加(P<0.05),并呈现一定的剂量效应关系;不同浓度槲皮素作用于HSF 24 h后,培养上清中Hyp、Col Ⅰ及HA含量均明显高于对照组(P<0.05),并具有剂量-效应关系.结论 槲皮素可促进HSF增殖、刺激其分泌胶原及HA,对维持皮肤弹性、减少皮肤皱纹形成、延缓衰老有重要意义.

金纳米花粒子对体外人成纤维细胞的毒性作用

目的:探讨具有近红外吸收功能的金纳米花粒子对人成纤维细胞的体外细胞毒性作用,为其在生物医学领域的应用提供依据.方法:分离培养人成纤维细胞,采用含不同浓度金纳米花粒子(1.875、3.750、7.500、15.000、30.000 mg· L-1)的含金培养液进行培养,以不加金纳米粒子组为空白对照组,应用MTT比色法检测其细胞毒效应,倒置显微镜观察细胞形态.结果:培养液中加入不同浓度金纳米花粒子后,各组细胞相对增殖率(RGR)分别为92.245%、88.980%、86.939%、75.782%和71.756%,加入30.000mg·L-1金纳米花组,其RGR与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),各组毒性评级均为一级.倒置显微镜下可见加入低浓度金纳米花粒子的人成纤维细胞形态正常,生长良好.结论:此种具有近红外吸收功能的金纳米花粒子体外细胞毒性具有剂量依赖性,低浓度金纳米花粒子具有良好的生物相容性.

富组蛋白1促皮肤创伤愈合的细胞学研究

目的 了解富组蛋白1(histatin1,Hst1)对人表皮细胞(human adult skin keratinocytos,HaCaT)、人成纤维细胞株增殖和迁移功能的影响.方法 细胞增殖实验:(1)将HaCaT细胞、人成纤维细胞均分为空白对照组(1640/DMEM+1%新生牛血清)、Ⅰ组(100 μg/ml Hst1)、Ⅱ组(30 μg /ml Hst1)、Ⅲ组(3 μg/ml Hst1),比较两种细胞的增殖数量;(2)细胞划痕实验:将两种细胞分为空白对照组(1640+1%新生牛血清)、A组(30 μg/ml Hst1)、B组[10 ng/ml人重组表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)]、C组(30 μg/ml Hst1+10 ng/ml rhEGF)、D组(15 μg/ml Hst1+5 ng/ml rhEGF)、E组(15 μg/ml Hst1+10 ng/ml rhEGF),比较两种细胞体外创面愈合速度.结果 (1)3～100 μg/ml的Hst1 能够促进HaCaT增殖,72 h时Ⅰ组细胞数高于空白对照组、Ⅱ组及Ⅲ组(P＜0.01);3～100 μg/ml的Hst1能够促进人成纤维细胞增殖,24 h时Ⅰ、Ⅱ组细胞数高于其余各组(P＜0.01);(2)30 μg/ml Hst1能促进HaCaT细胞迁移,16 h时A组划痕愈合率高于空白对照组(P＜0.01),C、D组高于A组(P＜0.05);30 μg/ml Hst1能促进人成纤维细胞划痕创面愈合,与rhEGF联合应用时划痕愈合率高于单独用药.结论 Hst1能够促进HaCaT细胞和人成纤维细胞增殖和迁移,与rhEGF联合应用时对其促进体外创伤愈合具有协同作用.

静电纺丝壳聚糖-明胶复合纤维的制备和体外生物相容性评价

目的 采用静电纺丝技术制备壳聚糖-明胶复合纤维,体外评价其生物相容性.方法 采用扫描电镜(SEM)观察纤维支架的表面形貌,考察纺丝溶液浓度、黏度以及壳聚糖/明胶质量比对纤维直径和结构的影响.将人成纤维细胞接种在纤维支架表面,绘制细胞生长曲线,观察细胞在支架表面的形态.结果 通过静电纺丝技术,制备的壳聚糖-明胶复合纤维均匀、光滑,无珠状结构,纤维平均直径为600 nm～1.6 μm.随着纺丝溶液浓度和黏度增加,纤维平均直径增大;随着壳聚糖/明胶质量比增加,纤维直径也随之增大.成纤维细胞在复合纤维支架上生长良好,增殖快,并且保持较好的成纤维细胞形态.结论 通过静电纺丝技术制备的壳聚糖-明胶复合纤维具有良好的生物相容性,有望作为皮肤组织工程的支架材料.

006博来霉素增加人成纤维细胞Ⅰ型胶原、纤连蛋白和核心蛋白多糖mRNAs的稳态水平

维生素E对体外培养人成纤维细胞基质金属蛋白酶-12及赖氨酸氧化酶基因表达的影响

维生索E(Vit E)是体内重要的脂溶性抗氧化剂之一,其主要生物学功能是将脂质过氧化自由基还原成脂质过氧化物.从而阻止分子氧和自由基通过非酶反应对不饱和脂肪酸的氧化.

与乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-1表达上调及意义

目的：探索乳腺癌间质成纤维细胞对乳腺癌作用的分子机制，研究与人乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-l（fibroblast-specific protein-1，FSP-l）的表达及对乳腺癌生长的影响。方法Transwell 方法共培养人乳腺癌细胞株 MDA-MB-231和人成纤维细胞株 ESF；实时 RT-qPCR 检测共培养的 MDA-MB-231和 ESF 细胞 FSP-1 mRNA 水平；免疫荧光流式细胞仪检测共培养 MDA-MB-231和 ESF 细胞 FSP-1蛋白表达水平；Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测 MDA-MB-231细胞的增殖；免疫荧光激光共聚焦显微镜观察荷瘤裸鼠乳腺癌组织 FSP-1的表达，检测 FSP-1对荷瘤裸鼠肿瘤体积的影响。结果MDA-MB-231细胞和 ESF 细胞共培养可上调 ESF 细胞表达FSP-1并促进 MDA-MB-231细胞增殖；ESF＋MDA-MB-231组 MDA-MB-231细胞表达 FSP-1，但在 MDA-MB-231组未检测到 FSP-1蛋白表达；荷瘤裸鼠 MDA-MB-231细胞和 ESF 细胞共生长的癌组织高表达 FSP-1并促进肿瘤生长。结论与人乳腺癌细胞共培养可上调人成纤维细胞 FSP-1的表达并促进乳腺癌生长。

绵头雪莲花提取物对UVA照射后人成纤维细胞增殖的影响

目的:明确绵头雪莲花提取物对UVA照射下的人成纤维细胞的保护作用.方法:制备绵头雪莲花浸膏,将培养的人成纤维细胞分为正常对照组、UVA照射组(10 J/cm2)及UVA+药物组,CCK8法检测细胞增殖活性,并比较各组吸光度值.结果:UVA+药物组漂浮死细胞(低于5％)少于UVA照射组(约20％～30％);UVA+药物组(200 μg/mL)吸光度值为1.16±0.22,高于UVA照射组的0.5±0.12,差异有统计学意义(P<0.05).结论:绵头雪莲花提取物对UVA照射人成纤维细胞具有一定的保护作用.

热休克蛋白糖蛋白96的量子点荧光标记检测及意义

热休克蛋白(HSP)糖蛋白(gp)96可作为肿瘤抗原肽的分子载体,在呈递肿瘤抗原和激活CD8+T淋巴细胞方面发挥重要作用[1].量子点(QDs)是一种能够接受激发光产生荧光的半导体纳米颗粒.本研究尝试采用量子点荧光这一新型标记技术,检测体外培养人肾癌细胞株(ACHN)和人成纤维细胞中HSP gp96的表达,证实量子点荧光标记检测技术的可行性.