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组织工程化软骨-软骨细胞的获取
软骨缺损的修复一直是骨科界的难题之一,自1968年Chesterman等[1]首次采用体外培养的软骨细胞修复软骨缺损以来,该方面的研究越来越受到人们的重视,近几年发展起来的应用组织工程学方法修复软骨缺损虽未应用于临床,但逐渐被认为是一种有希望治疗全层软骨缺损的手段.
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淋巴结转移性鼻咽癌针吸检查中细胞块样本的应用
目的 探讨细针吸取(FNA)涂片联合细胞块(CB)切片、免疫组化标记(IHC)和EBER原位杂交在淋巴结转移性鼻咽癌中的应用.方法 采用友谊式细针穿刺器和21G注射针对31例鼻咽癌头颈部淋巴结转移病灶获取样本制片,观察其细胞形态学及CB组织形态学特征、IHC和EBER原位杂交表达.比较分析单纯细胞涂片、细胞涂片联合CB切片、细胞涂片联合CB切片及IHC和EBER原位杂交3种不同方式对鼻咽癌头颈部淋巴结转移病灶的诊断准确率.结果 ①所有病例的细胞涂片及CB切片均显示为非角化性癌的形态学特征.②CB切片IHC和EBER原位杂交显示:肿瘤细胞CK5/6、p63、Ki-47及EBER均为(+);LCA和CK7均呈(-).③3种不同方式对鼻咽癌头颈部淋巴结转移病灶的诊断准确率比较显示:单纯细胞涂片诊断的敏感度(90.3％,28/31)及确诊率(74.2％,23/31)低;细胞涂片联合CB切片诊断的敏感度(93.5％,29/31)及确诊率(77.4％,24/31)居中;细胞涂片联合CB切片及IHC和EBER原位杂交诊断的敏感度(96.8％,30/31)及确诊率(96.8％,30/31)高.结论 FNA细胞涂片联合CB切片、IHC及EBER原位杂交的方式,对头颈部淋巴结转移性鼻咽癌的早期诊断、寻找原发灶、治疗以及预后判断具有重要意义.
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469例乳腺肿物针吸细胞学与组织学的对照分析
目的 探讨乳腺肿物针吸细胞学(FNAC)形态学特点与组织学的关系.方法 对1149例乳腺肿物患者行FNAC检查,其中469例获得组织病理学对照.结果 469例中,211例针吸涂片多数性质相同的病例显示具有相对一致的形态学特征;237例恶性肿瘤诊断的敏感性为92%,232例良性病变诊断的特异性为92.7%, 总准确率为92.3%; 假阴性率为8%, 潜在假阳性率为7.3%, 总误诊率为7.7%,无假阳性报告.结论 结合病史、临床触诊及穿刺针感对乳腺肿物做出综合判断更有利于乳腺肿物FNAC诊断.
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激光捕获显微切割联合基因芯片在肿瘤差异表达基因研究中的应用
目的 为激光捕获显微切割(LCM)联合基因芯片在肿瘤差异表达基因研究中应用摸索可行的技术方法.方法 采用LCM 技术分别自原发性膀胱移行癌患者手术切除的癌组织和癌旁正常组织冻存标本获取细胞,提取RNA,用Agilent 2100 Bioanalyzer 芯片分析系统进行RNA完整度(RIN)检测.取总RNA 100 ng 进行线性扩增和荧光标记,获得aRNA 探针.取等量的癌组织探针与癌旁正常组织探针,与Agilent 人全基因组寡核苷酸基因表达谱芯片杂交.通过自身比较实验分析芯片的假阳性基因数,计算假阳性率(FPR).通过数据分析寻找癌组织与癌旁正常组织差异表达基因.结果 LCM 所获微量RNA 的RIN 都在8.0 以上,表明LCM 后RNA 完整度较高.100 ng RNA 经过线性扩增与荧光标记,获aRNA 产量约16 μg,片段大小0.5 ～ 2.5 kb.芯片自身比较实验结果良好,FPR ＜ 1%,验证了实验系统的可靠性.相对于癌旁正常组织,癌组织发生表达上调的基因有286 条,下调的基因112 条.结论 以LCM 技术获得的细胞提取RNA 用于制备基因芯片探针,获得了可信的芯片杂交结果,为肿瘤基因差异表达研究提供了可行的技术方法.
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BIOMED-2系统引物用于检测T细胞淋巴瘤石蜡样本T细胞受体γ基因重排的研究
目的 了解BIOMED-2系统T细胞受体(TCR)γ引物组合对T细胞淋巴瘤的常规石蜡包埋组织样本中TCR基因重排的检出情况及其实用性.方法 用酚/氯仿法提取55例各种组织类型的T细胞淋巴瘤石蜡包埋组织样本的DNA并通过扩增看家基因β-globin检测其质量,利用BIOMED-2系统TCR-γ引物组合和TCR-γ基因通用型引物(TVG/TJX)对55例进行TCR基因重排检测,比较二者的检出率并进行统计学分析.结果 BIOMED-2系统TCR-γ引物组合和TCRγ基因通用型引物(TVG/TJX)的TCR基因重排检出率分别为76.4%和60.0%,前者高于后者,二者的差异无统计学意义(P>0.05).结论 BIOMED-2系统TCRγ引物组合适用于本组T细胞淋巴瘤石蜡包埋组织样本的TCR基因重排检测.
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肺细针吸取微小组织学与细胞学检查诊断价值的探讨
目的探讨经皮细针肺肿块吸取细胞块和微小碎片组织学(简称微小切片)与涂片细胞学的诊断价值.方法对有组织学对比的187例经皮细针(7号) 肺部肿块吸取资料作微小切片组织学与涂片细胞学比较分析.结果 (1)微小切片组的诊断敏感性88.3%,特异性100%,总准确率89.5%;涂片组分别为87.7%、93.8%和88.8%;涂片结合微小切片则分别为91.6%、93.8%和92.0%.(2)微小切片组对恶性肿瘤的组织分型准确率93.3%(83/89),比涂片组的67.9%(91/134)高(P<0.01).对良性病变分类诊断准确率分别为86.4%(19/22)和 60.0%(18/30) (P<0.05).(3)66.3%的病例获取微小组织切片,其免疫组织化学染色结果与术后病理组织切片的相同.结论微小切片组织学和细胞学的诊断准确性均高,两者结合应用将提高诊断准确性,前者对组织分型、分类诊断接近术后病理诊断,有很高的应用价值.
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细胞病理学刮片在皮肤和黏膜病变检查中的应用及体会附148例细胞学与组织学对照
目的探讨细胞病理学刮片方法在皮肤和黏膜病变诊断中的可靠性、实用性和局限性.方法比较使用不同标本采集方法(载玻片刮片、压舌板刮片和针吸涂片)获取18例皮肤和黏膜恶性肿瘤的细胞数量;对456例皮肤和黏膜病变行刮片检查,其中148例获得组织病理学核对.结果载玻片刮片法对皮肤和黏膜恶性肿瘤的细胞获取量满意;其诊断良性病变的特异性为100%(37/37),诊断恶性肿瘤的敏感性92.8%(103/111),诊断的总准确率94.6%(140/148);假阴性率为7.2%(8/111),假阳性率为0,总误诊率为5.4%(8/148).结论在皮肤和黏膜病变细胞病理学检查中,采用载玻片刮片法具有操作简便、安全及获取细胞量充分,诊断准确率较高,应用范围广等优点;但存在一定的局限性,需要通过组织病理学诊断解决.
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宫颈细胞学与阴道镜活检组织学诊断一致性分析
目的 探讨宫颈疾病患者细胞学检查为阳性而组织学未发现阳性病灶的现况及原因.方法 以低级别鳞状上皮内病变及以上为细胞学阳性标准,收集2008至2016年复旦大学附属妇产科医院病理科细胞学诊断阳性的病例12097例,首次活检阴性3107例,其中675例复核活检,细胞学与组织学活检诊断的一致性采用Kappa值表示.结果 首次活检的总阳性率为74.3％(8990/12097),首次活检阴性经复核活检证实确有病变287例(42.5％,287/675),患者的年龄明显大于首次活检阳性的患者,且再次送检标本类型较初次送检切取范围更广,包括更多比例的阴道壁活检、锥切活检和全子宫切除标本.复核原细胞学结果,终阳性组织学诊断与初始细胞学诊断具有一定的相关性,Kappa值为0.505(P<0.01).结论 合格的宫颈细胞学诊断是活检组织学的有益补充且一致性较好,在活检阴性时不能忽略初始细胞学阳性结果.在细胞学与活检组织学结果不符的病例中,重复阴道镜活检以及适当扩大活检范围有助于发现隐匿的宫颈病变.
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对乳腺肿物针吸细胞学诊断标准的探讨——951例细胞学与组织学的对照分析
目的探讨乳腺肿物针吸细胞学检查(FNAC)的基本形态学要素及拟定的诊断标准的可靠性与局限性.方法对4 309例患者行FNAC检查,其中951例获得组织病理学核对.结果 413例针吸涂片中,多数性质相同的病例显示具有相对一致的形态学变化特征.732例恶性肿瘤诊断的敏感性为97.3%,219例良性病变诊断的特异性为97.7%,总准确率为97. 4%;假阴性率为2.7%,潜在假阳性率为2.3%,无1例假阳性,总误诊率为2.6%.结论 (1)导管上皮细胞分化、排列方式以及良性裸核细胞的数量是分析乳腺肿物FNAC形态学变化的3个基本要素.(2)拟定的乳腺肿物FNAC诊断标准检查结果可靠性很强;但仍存在一定的局限性,需要通过病理组织学诊断解决.
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宫颈细胞学ASCUS/LSIL的临床意义及处理
目的 探讨宫颈不典型鳞状上皮/低度鳞状上皮内病变(ASCUS/LSIL)的临床意义及处理方法.方法 对中国医学科学院肿瘤医院2004～2006年妇科门诊用TCT(宫颈液基细胞学)的方法检出的254例ASCUS/LSIL以病理结果为金标准进行回顾性分析,其中136例进行了阴道镜检查.结果 在140例ASCUS中,宫颈上皮内瘤变(CIN)病变占51.5%,其中高度病变占22.9%,114例LSIL中CIN病变占59.6%,其中高度病变占30.7%,两组资料比较差异无统计学意义,P＞0.05.其中136例中阴道镜诊断炎症47例,低度宫颈上皮内病变53例,高度宫颈上皮内病变36例及病理检查结果炎症55例,低度宫颈上皮内病变41例,高度宫颈上皮内病变40例,阴道镜与病理对照进行了一致性检验,Kappa=0.314,U=0.064,P＜0.05,一致性好.病理证实人乳头状瘤病毒(HPV)阳性的妇女中CIN发生率79%(67/84),而HPV阴性者中CIN发生率43.5%%(74/170),结果显示两组资料比较差异有统计学意义,x2=29.88,P＜0.05.本组资料中年龄在35～55岁的妇女占83.5%与HPV阳性的妇女年龄高峰一致.结论 对ASCUS的患者应与LSIL同样重视,立即进行阴道镜检查以避免22.9%的高度病变的患者漏诊或失访,对35～55岁的HPV感染的妇女应更加重视.
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一种快速制作胸腹水细胞块方法的探讨
笔者采用快速细胞块法进行石蜡包埋切片检查,石蜡切片染色质量较涂片清晰,且收集的细胞较集中,可根据要求重复切片,亦可进行免疫组化对肿瘤细胞进行标记,对提高胸腹水细胞诊断的阳性率及准确性等方面取得良好效果.
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关于改进病理制片技术提高病理诊断率的探讨
随着人们保健意识的增强和医学知识的不断普及,人们对病理诊断重要性的认识越来越深入,对病理诊断质量的要求也越来越高,而病理制片技术又直接影响病理诊断的准确率,但在病理技术常规工作中要确保做出一张优质的切片并非易事,从标本取材固定、脱水及切片、染色等一系列过程,每一过程都尤为重要,若因操作不规范将会直接影响切片质量,从而延误诊断.因此如何提高病理制片技术已成为病理工作者普遍关心的问题.
关键词： 组织细胞学制备技术 -
骨髓涂片和切片中的巨核细胞多形性改变在慢性骨髓增殖性疾病中的诊断意义
目的 探讨骨髓涂片和切片中巨核细胞多形性改变在慢性MPD(CML-CP、ET、PV及PMF)中的诊断意义.方法 182例MPD患者采用骨髓抽吸-活检双标本同步取材,获取骨髓涂片和切片标本.骨髓涂片行瑞氏-姬姆萨染色和CD4_41免疫组织化学染色,骨髓切片行苏木素-姬姆萨-酸性品红染色.将涂片和切片中的巨核细胞多形性形态定义为5类,分别为Ⅰ型(包含型);Ⅱ型(少分叶核型);Ⅲ型(巨大多分叶核型);Ⅳ型(小核固缩型)和Ⅴ型(脱落型).骨髓涂片和切片中的巨核细胞簇分别计为未见巨核细胞簇状分布(0);小于6个的小簇巨核细胞组成为主(+1);至少6个以上的大簇巨核细胞组成为主(+2)3种情况.同步分析骨髓涂片和切片中的各型巨核细胞多形性变化以及巨核细胞簇的检出率.结果 CML-CP组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和正常型的巨核细胞在骨髓涂片中的检出率分别为(3.73±3.84)%、(14.19±7.62)%、(5.99±4.67)%、(34.37±10.79)%、(9.45±6.87)%及(32.28±7.67)%,在切片中的检出率分别为(3.13±2.30)%、(12.61±9.28)%、(4.94±4.27)%、(35.26 4±9.63)%、(9.47±5.89)%及(34.58±6.81)%,两者差异无统计学意义(t值分别为0.524、0.510、0.645、0.239、0.011、0.869,P均>0.05).ET组Ⅰ型巨核细胞的骨髓涂片检出率为(6.17±2.89)%,明显高于骨髓切片的(2.42±1.28)%,差异有统计学意义(t=7.183,P<0.01):Ⅴ型巨核细胞的骨髓涂片检出率为(6.28±3.34)%,明显低于骨髓切片的(10.18±4.03),差异有统计学意义(t=3.944),P<0.01);其余各型(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和正常型)差异无统计学意义(t值分别为0.079、0.122、1.643、1.638,P均>0.05).PV组V型巨核细胞的骨髓涂片检出率为(6.55±4.11)%,明显低于骨髓切片的(10.30±3.34)%,差异有统计学意义(t=2.351,P<0.05),其余各型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和正常型)差异无统计学意义(t值分别为1.635、0.301、0.132、0.704、0.681,P均>0.05).PMF组Ⅳ型巨核细胞的骨髓涂片检出率为(13.05±5.24)%,明显低于骨髓切片的(29.14±8.72)%,差异有统计学意义(t=5.245,P<0.01);正常型巨核细胞在骨髓涂片检出率为(33.58±14.39)%,明显高于骨髓切片的(23.01±7.96)%,差异有统计学意义(t=2.132,P<0.05),其余各型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ型)差异无统计学意义(T值分别为0.787、0.646、2.062、0.869,P均>0.05).CML-CP组和PV组中骨髓涂片和切片中巨核细胞簇检出率差异无统计学意义(x~2=2.772,P>0.05),均以小簇检出为主.ET组中骨髓涂片中小簇状分布的巨核细胞簇的检出率明显高于切片,而大簇状分布的巨核细胞簇检出率明显低于切片(x~2=13.748,P<0.01).PMF组中骨髓涂片无巨核细胞簇的检出率明显高于切片,而大簇状分布的巨核细胞簇的检出率明显低于切片(x~2=18.741,P<0.01).结论 骨髓涂片与骨髓切片同样可以观察到巨核细胞多形性改变,通过仔细观察巨核细胞多形性改变,我们认为对MPD的分型和鉴别诊断具有一定的参考价值.
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TUNEL技术原位观察肝细胞凋亡
目的采用TUNEL技术对福尔马林固定、石蜡包埋的肝组织和培养肝癌细胞进行染色,以探讨肝细胞凋亡的形态特征和分布.方法使用德国宝灵曼公司生产的原位末端标记试剂盒. 石蜡包埋组织经微波处理后,行常规TUNEL染色,观察凋亡细胞的形态和分布.结果 TUNEL阳性信号为黄绿色或黄色荧光,位于胞核,呈小圆形或环行. TUNEL阳性细胞大多在形态学上表现为凋亡的细胞. 对肝组织TUNEL LI的分析显示,肝癌组织中细胞凋亡指数(0.395)比肝硬变(0.075)和癌旁肝组织(0.105)要高,且癌组织恶性程度越高,这种凋亡就越显著.结论改进的TUNEL技术对福尔马林固定、石蜡包埋的难处理组织进行染色是一个有效的方法.
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组织芯片研究CD44s和CD44V6在乳腺癌组织中的表达
目的:研究CD44s和CD44V6的表达与乳腺导管癌分化、浸润及转移的关系.方法:用组织芯片技术及免疫组织化学方法检测120例乳腺导管癌标本和20例正常乳腺标本中CD44s和CD44V6表达情况.结果:CD44s和CD44V6在乳腺癌组织中表达阳性率分别为46%(55/120)和53%(64/120),在正常乳腺组织中均没有表达;CD44V6在低、中分化腺癌中表达阳性率分别为70%(24/34)和46%(40/86),差异有显著意义,χ2=5.68,P<0.05.CD44s和CD44V6表达与乳腺导管癌淋巴结转移明显相关,P<0.01;而且与癌细胞浸润有关,P<0.01.结论:CD44s和CD44V6过量表达与乳腺导管癌转移和浸润密切相关,联合检测CD44s和CD44V6能更准确地判断乳腺导管癌的转移状态.CD44V6表达还与乳腺导管癌的进展程度相关.
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荧光原位杂交法检测HER2基因状态过程中两种切片预处理方法的对比
目的 观察两种方法消化石蜡切片对荧光原位杂交(FISH)法检测HER2结果判读的影响.方法 分别采用美国PanPath公司生产的FISH检测试剂常规消化和美国lnvitrogen公司生产的显色原位杂交(CISH)试剂中的预处理液改良消化乳腺癌石蜡切片.结果 常规法使细胞问质完全消化,细胞或重叠或孤立,细胞核中红绿信号清晰,在荧光湿微镜下容易计数细胞;改良法细胞间质尚在,细胞核中红绿信号清晰,但不易计数单个无重叠细胞.结论 对于HER2基因不扩增或高度扩增的病例,采用改良法消化石蜡组织切片,简单快速.又不影响结果判读;对于HER2基因状态为交界性(4～6个信号点)或多倍体的病例,其石蜡切片应采用常规消化,这有利于FISH法在临床上的推广应用.
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液基薄层细胞制片术在脱落细胞学中的应用
目的 探讨体液脱落细胞学检查技术制片的佳方法.方法 对妇科子宫颈刮片、胸腹腔积液、痰标本进行传统细胞涂片及液基薄层细胞制片术(TLT),HE染色,对比观察.结果 对2004年1月至2004年12月的3200例进行传统细胞涂片,确诊癌336例(10.5%),重度核异质及可疑癌570例(17.8%);对2005年1月至2005年12月的3248例采用TLT,确诊癌719例(22.1%),重度核异质及可疑癌231例(7.1%).结论 TLT在标本的采集、制片等方面都有很大进步,制片质量优良,使体液脱落细胞学确诊率明显提高.
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新柏氏液基细胞学检查技术及其应用
目的 推广液基薄层细胞制片技术.方法 介绍新柏氏液基薄层细胞学检测(TCT)技术的原理、操作过程及临床应用.结果 TCT制成的薄片清晰,细胞形态完好,阳性率高,适用于妇科阴道子宫颈及非妇科脱落细胞学检查.结论 TCT广泛适用于临床细胞学检查,可提高细胞学检查的阳性率,是一项值得推广的新技术.
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改进普通涂片操作在肿瘤患者淋巴结穿刺诊断中的应用
目的 对淋巴结细针吸取细胞学(FNAC)诊断中改进普通涂片操作方法的优越性进行评价.方法 FNAC获取标本注入装有清洗液的离心管内轻微振荡离心,弃上清液,充分振荡管底沉淀物,取样,制成涂片.95%乙醇固定,HE染色.同一标本同时行液基薄层细胞学(TCT)检测作对照,对肿瘤的分类和分型不够准确的涂片用免疫细胞化学染色.结果 149例淋巴结穿刺标本中,TCT法检出癌95例,可疑癌26例,改进普通涂片检出癌92例,可疑癌29例,灵敏度均为81.20%,两者相比差异无统计学意义(χ2=0.13,P>0.05).特异性均较强.结论 改进普通涂片方法检查对淋巴结穿刺标本进行诊断可达到与TCT相同的灵敏度,且可弥补TCT费用昂贵的缺陷,同时应用免疫细胞学技术检测可明显提高病理细胞学诊断结果的准确性.
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264例乳腺肿块微小切片组织学诊断分析
目的 探讨经皮细针乳腺肿块微小碎片组织学(简称微小切片)的诊断价值.方法 回顾分析有组织学对比的264例乳腺肿块微小切片与涂片细胞学(简称涂片)检查结果.结果 ①微小切片对恶性肿瘤诊断敏感性88.1%,良性肿瘤诊断特异性100%,总准确率89.8%;涂片分别为82.7%、93.2%和84.5%;涂片结合微小切片分别为91.6%、93.8%和92.0%.②微小切片与涂片对恶性肿瘤组织分型诊断的准确率分别92.9%、67.6%,2组差异有统计学意义(P＜0.01);对良性病变的组织分类诊断准确率分别为86.7%和63.6%,P＜0.05.结论 微小切片和涂片的诊断准确性均高,两者结合提高诊断准确性;微小切片对恶性肿瘤组织学分型、良性病变分类诊断价值高.
