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肺结核患者肺组织微生物组特征研究
目的 探讨肺结核患者肺部病灶坏死区、肉芽肿区和正常肺区的微生物组基本特征.方法 选取2016-2017年首都医科大学附属北京胸科医院10例临床及病理确诊为肺结核患者的福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的组织标本,通过显微切割技术分别获得FFPE组织的坏死区、肉芽肿区和正常肺区.采用高通量测序的方法,检测其微生物组特征.结果 肺结核患者肺部切除标本中主要的微生物类群(门水平,相对丰度>1%)有Proteobacteria、Actinobacteria、Firmicutes、TM7和Bacteroidetes.在门水平上,坏死区、肉芽肿区和正常肺区的微生物群落组成未见差异.在属水平上,主要有7个类群(相对丰度>1%):坏死区、肉芽肿区、正常肺区相对丰度Ochrobactrum分别为(50.70±6.76)%、(56.18±7.50)%、(61.31±7.95)%;Sphingomomas分别为(7.50±2.07)%、(7.69±1.29)%、(3.81±2.08)%;Corynebacterium分别为(5.39±2.39)%、(5.23±1.39)%、(7.43±3.56)%;Brevundimonas分别为(1.67±0.42)%、(1.75±0.67)%、(2.09±0.34)%;Brevibacterium分别为(2.38±2.23)%、(2.60±2.60)%、(2.29±0.64)%;Sphingobacterium分另别为(0.72±0.31)%、(0.78±0.26)%、(1.20±0.38)%和Enhydrobacter分别为(1.25±1.28)%、(0.31±0.19)%、(0.67±0.80)%.基于Bray-Curtis距离的Adonis分析结果表明,在属水平上,坏死区和正常肺区,肉芽肿区和正常肺区中微生物群落组成差异有统计学意义(F值分别为3.94和4.76,P值分别为0.005和0.002).Mycobacterium的相对丰度非常低,主要存在于肺结核病灶的坏死区[(0.81±1.92)%].配对样品检验结果表明Mycobacteri um的相对丰度在坏死区[(0.81±1.92)%]和肉芽肿区[(0.01±0.01)%]、坏死区和正常肺区[(0.01±0.02)%]中差异有统计学意义(Z值分别为2.10和-2.37,P值分别为0.036和0.018).结论 结核病患者肺部自坏死区、肉芽肿区到正常肺的组织变化中,Sphingomonas、Enhydrobacter、Kocuria和Mycobacterium的相对丰度整体呈下降趋势,而Ochrobactrum和Sphingobacterium的相对丰度总体呈上升趋势.肺结核患者肺部菌群的变化特征可能与肺结核的发病有重要关系.
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骨髓活检在血液病中的应用196例
目的:探讨骨髓活检石蜡包埋切片在血液病诊断中的意义.方法:对196例骨髓活检标本进行石蜡包埋,HE染色、特殊染色、免疫组化染色及光镜观察,并对142例有明确诊断的进行了与骨髓细胞学的对比分析.结果:196例骨髓活检中再生障碍性贫血(AA)52例、白血病(AL)22例、慢性骨髓增生性疾病(CMPDs)26例,骨髓增生异常综合征(MDS)19例、浆细胞骨髓瘤(PCM)12例,转移癌(MCBM)4例,其他61例.结论:骨髓活检对AA、CMPDs、MDS、AL、PCM及MCBM等可直接作出诊断,但对于AL的分型需要结合细胞学诊断,部分骨髓增生低下和活跃的病例必须结合临床及相关检查才能作出诊断.
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非小细胞肺癌组织中Midkine蛋白表达上调
Midkine(MK)表达与癌发牛和生长有密切关系[1].然而,目前国内外关于MK与非小细胞肺癌(non-small cell lungcancer,NSCLC)发生与发展的研究报道极少,且结果也不尽一致.目前,新鲜冷冻切片已广泛应用于免疫组化研究,且丙酮或甲醛固定的冷冻切片已成为评价抗原修复在甲醛固定、石蜡包埋组织切片中免疫组化染色效果的标准.
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人食管癌中TGF-β受体Ⅰ和Ⅱ表达的临床分析
转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)受体Ⅰ和/或受体Ⅱ的变异可促进肿瘤的发生和发展,为此我们对63例食管癌实体瘤中TGF-β受体Ⅰ和受体Ⅱ的表达进行了研究.1 材料与方法石蜡包埋的食管癌标本共63例(取自哈尔滨医科大学第一和第三临床医学院病理科),其中男45例,女18例;鳞癌41例,腺癌22例;平均年龄56.7岁.
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75例血液病骨髓活检病理诊断分析
目的 探讨骨髓活检石蜡包埋切片在血液病诊断中的意义.方法 收集经临床初诊的各种血液病75例,行常规髂后上棘骨髓活检,石蜡包埋,HE、Gomori、Perls普鲁蓝铁染色及光镜观察.结果 75例中男性30例,女性45例,中位年龄50岁(10~77岁).其中CIMF2例、AA15例、MDS9例、PCM3例、ALL2例、CML1例、贫血待查22 例、全血细胞减少16例、白细胞减少4例、发热待查1例,确诊率61.33%.结论 骨髓活检石蜡包埋切片对AA、CIMF、MDS及白血病可直接作出诊断,对贫血及部分血细胞减少性疾病,必须紧密结合临床或BMA方可作出诊断.建议采用骨髓活检塑料包埋切片,以提高BMB诊断水平.
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肺穿刺诊断包虫病1例
患者男性,28岁.X线透视发现肺内有一5 cm×6 cm包块.行右肺穿刺活检术,进针时有包膜抵抗感,用力刺入有落空感,抽出无色透明清亮液体70 ml,内含多枚针尖大小灰白色颗粒状物.液体沉淀离心后,将颗粒状物石蜡包埋,切片,HE染色.镜检为细粒性棘球蚴原头节(图1,2).
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牙骨质骨化纤维瘤10例临床病理分析
牙骨质骨化纤维瘤又名化牙骨质纤维瘤、骨化纤维瘤,属于较少见的骨源性良性肿瘤.现将收集到的10例牙骨质骨化纤维瘤临床及病理形态观察结果报道如下.1材料与方法收集广州市南方医院1993-2001年手术切除经病理确诊的化牙骨质纤维瘤6例、骨化纤维瘤4例,标本全部用10%福尔马林固定,脱钙液脱钙,常规石蜡包埋切片,HE染色.
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尖锐湿疣183例临床病理分析
尖锐湿疣是由人乳头状瘤病毒(HPV)感染引起的一种性传播疾病.近年来发病率呈明显上升趋势,本文就我院诊治的183例尖锐湿疣进行临床病理分析.1材料与方法本组资料为我院1990-01-2001-06间的外检活检标本,组织经10%福尔马林固定,石蜡包埋切片,HE染色,光镜检查.
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常规石蜡包埋组织的电镜制样及结果观察
透射电子显微镜技术不仅需要有高分辨率、高放大倍数的电子显微镜,还需要超微结构保存良好、厚度适合、反差适中的电镜观察样品.电镜制样由于步骤繁多、操作复杂,组织和细胞结构的形态很可能发生变化,因此各操作环节都要备加小心.
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组织细胞固定保护液在AKP组化染色中的应用
传统的碱性磷酸酶(AKP)组织化学染色法,染色前多采用10%福尔马林-钙液及丙酮等固定液在4℃冰箱内对组织进行处理后,再进行冷冻制片或低温石蜡包埋切片.在实际应用过程中,我们发现经这些方法处理的组织,染色后酶活性明显降低且定位不佳.我们在酶染色前改用自行研制的组织细胞固定保护液(tissue cell fix protection solution,TCFPS)对组织进行前期处理,可收到理想染色效果.
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石蜡包埋肿瘤组织单细胞核悬液制备方法的改进
从石蜡包埋肿瘤组织提取的细胞核可以用于流式细胞仪检测肿瘤细胞DNA的含量、DNA图像定量及荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)分析等实验[1,2].以往从石蜡包埋组织中提取细胞核的方法是将组织消化后得到的细胞悬液及未消化的块状组织用200目的细胞筛进行分离[3],除去未被消化的组织,该法不仅增加细胞悬液被污染的机会,而且对微量的液体进行操作比较困难.本研究在上述方法的基础上加以改进,使实验操作更加简便,并获得了良好效果.
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石蜡包埋组织DNA快速提取法在分子病理检测中的应用
随着分子生物学的飞速发展,分子生物学技术已在分子靶向治疗、HPV分型检测、淋巴瘤的诊断等方面发挥了极为重要的作用.分子病理检测的首要步骤就是从石蜡包埋组织中提取DNA,常用的DNA提取方法主要有酚-氯仿法、离心柱法等.酚-氯仿法操作复杂,DNA损失较多,并且对人体有害,不适宜用于临床;离心柱法操作较为简便、能够得到较高质量的DNA,是目前临床分子病理DNA提取的主要手段,但其采用蛋白酶K进行组织消化,耗时过长,常需消化过夜.
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石蜡包埋全喉大切片的制备及特殊染色
为配合临床病理对喉癌及其周围组织的相关性研究,我们开展了全喉大切片的制作及特染工作,在以往的报道中[1],大切片的制作只限于肺等实质性脏器.包埋剂多用火棉胶或明胶,其过程复杂,还需特殊的切片机,切片太厚(400μm)影响观察.我们采用石蜡包埋、普通轮转式切片机,制成全喉大切片,并进行特殊染色,得到较好的效果.
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骨髓塑料制片重包埋处理的一点经验
骨髓组织活检常用塑料包埋法制片.塑料块由两种有机化学试剂按一定比例混合凝固而成,如若凝固不好,已包埋的组织就不能像石蜡包埋制片那样,再进行溶解后重包埋处理.
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骨髓活检的诊断
本文从骨髓的正常结构、各系细胞定位和细胞分化规律及其特征等着手,概括了辨识这些细胞的要点,以求正确识别,为活检诊断提供依据,并指出作出一份正确的诊断报告所须具备的条件,包括活检、制片、镜下描述和联系临床等.以供基层同道和初接触骨髓活检者参考.
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免疫组化技术(一)
1 引言新引进的有关预测预后方面的免疫组化标记物在患者的治疗和处理上产生了巨大的影响.过去的60年中,关于免疫组化方法的理论在逐步发展,方法学上实现了在甲醛固定和石蜡处理的组织上使用抗体和适当的标记系统来鉴别特异性或高选择性的细胞表位.当前诊断实验室的趋势是尝试着尽量在甲醛固定石蜡包埋的组织上进行免疫组化研究,避免使用冷冻切片.
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石蜡包埋尤文瘤/外周原始神经外胚瘤中EWS-FLI1融合基因的表达
目的运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测石蜡包埋尤文瘤/外周原始神经外胚瘤(ES/pPNET)组织中特异性染色体易位融合基因EWS-FLI1/ERG mRNA的表达并探讨其诊断意义.方法运用一步法RT-PCR技术检测25例石蜡包埋ES/pNETs和15例其他小圆细胞肿瘤(包括8例胚胎型和腺泡型横纹肌肉瘤、4例低分化滑膜肉瘤、2例神经母细胞瘤和1例淋巴瘤)组织中EWS-FLI1/ERG的表达.结果25例ES/pPNET中20例检测到EWS-FLI1/ERG融合基因的表达(80%),15例对照组均未检出EWS-FLI1的表达.结论EWS-FLI1/ERG mRNA的表达是ES/pPNETs分子诊断的可靠指标,一步法RT-PCR是一种适用于临床常规石蜡包埋组织EWS-FLI1融合基因表达的检测方法.
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BIOMED-2系统引物用于检测T细胞淋巴瘤石蜡样本T细胞受体γ基因重排的研究
目的 了解BIOMED-2系统T细胞受体(TCR)γ引物组合对T细胞淋巴瘤的常规石蜡包埋组织样本中TCR基因重排的检出情况及其实用性.方法 用酚/氯仿法提取55例各种组织类型的T细胞淋巴瘤石蜡包埋组织样本的DNA并通过扩增看家基因β-globin检测其质量,利用BIOMED-2系统TCR-γ引物组合和TCR-γ基因通用型引物(TVG/TJX)对55例进行TCR基因重排检测,比较二者的检出率并进行统计学分析.结果 BIOMED-2系统TCR-γ引物组合和TCRγ基因通用型引物(TVG/TJX)的TCR基因重排检出率分别为76.4%和60.0%,前者高于后者,二者的差异无统计学意义(P>0.05).结论 BIOMED-2系统TCRγ引物组合适用于本组T细胞淋巴瘤石蜡包埋组织样本的TCR基因重排检测.
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免疫组织化学-激光显微切割-聚合酶链反应技术在胃癌石蜡切片中检测p53突变的应用
目的探索在石蜡切片中应用免疫组织化学-激光显微切割-聚合酶链反应(PCR)技术,检测进展期胃癌p53蛋白表达阴性或阳性的p53基因外显子5~8的突变情况.方法对41例进展期胃癌标本进行p53蛋白的免疫组织化学标记,再用激光显微切割(LMD)技术切取p53表达一致的癌组织及远离癌灶的正常胃黏膜腺体.经消化后直接进行p53基因外显子5~8的PCR扩增、单链构象多态性分析及直接测序.结果41例进展期胃癌标本均扩增出特异的目的条带.其中有11例p53蛋白表达阳性,15例p53基因检测到突变.蛋白表达阳性者中有8例突变(8/11);表达阴性者中有7例突变(7/30,23.3%).p53蛋白表达和p53基因突变具显著相关(P=0.004).结论免疫组织化学-LMD-PCR技术应用于石蜡切片可获得满意的结果,此技术可将细胞特定基因的结构状态和表达水平很好地结合起来检测分析.
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免疫细胞化学在细胞病理学中的应用
免疫细胞化学(ICC)在细胞病理学中是一很有用的辅助诊断方法.目前在甲醛固定的石蜡包埋切片和冷冻组织切片中应用的抗体也多数能应用于乙醇或甲醛固定的细胞涂片[1-3].免疫细胞化学常用的标本制备方法有4种:直接涂片(CS)法、细胞离心涂片法(cytospin)、细胞块石蜡包埋(CB)法和液基薄层制片法.