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非小细胞肺癌组织中Midkine蛋白表达上调
Midkine(MK)表达与癌发牛和生长有密切关系[1].然而,目前国内外关于MK与非小细胞肺癌(non-small cell lungcancer,NSCLC)发生与发展的研究报道极少,且结果也不尽一致.目前,新鲜冷冻切片已广泛应用于免疫组化研究,且丙酮或甲醛固定的冷冻切片已成为评价抗原修复在甲醛固定、石蜡包埋组织切片中免疫组化染色效果的标准.
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Midkine和Caspase-3在胰腺癌中的表达与细胞凋亡的关系
目的:研究人胰腺癌组织中Midkine(MK)和Caspase-3蛋白的表达特点,探讨其表达与胰腺癌细胞凋亡的关系.方法:收集人胰腺癌组织标本49例,免疫组织化学SP法检测MK和Caspase-3蛋白的表达,原位凋亡检测试剂盒辣根过氧化物酶(TUNEL)检测细胞凋亡指数.以同期15例正常胰腺组织标本为对照.结果:MK蛋白、Caspase-3蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率高于正常胰腺组织(71.4%VS 0,P＜0.01;77.6% VS 46.7%,P＜0.05),MK蛋白表达与胰腺癌组织学分化、临床分期和淋巴转移相关(P＜0.05),Caspase-3蛋白表达仅与组织学分化有关;胰腺癌组织标本中,MK阳性表达组凋亡指数显著低于MK阴性表达组(5.13±2.69 VS 7.93±6.65,P＜0.05);胰腺癌组织中MK与Caspase-3蛋白的表达呈负相关(r=-0.34.P＜0.05).结论:MKC和Caspase-3参与了胰腺癌的发生发展,MK在胰腺癌组织中的高表达具有抑制细胞凋亡的生物学功能,其作用机制可能是通过抑制Caspase-3的活性.
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Midkine在胰腺癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨人胰腺癌组织中Midkine(MK)的表达及其与肿瘤细胞增殖的关系和意义.方法 免疫组织化学SP法检测49例胰腺癌、13例慢性胰腺炎及15例正常胰腺组织中MK和Ki67蛋白的表达.结果 胰腺癌组织中MK和Ki67均高表达,阳性率分别为77.1 %(35/49)、81.6%(40/49),二者的表达都与肿瘤组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关(P ＜0.05).胰腺癌组织中Ki67表达显著高于慢性胰腺炎(3/13,P ＜0.01)和正常胰腺组织(0/15,P ＜0.01).慢性胰腺炎和正常胰腺组织中未见MK阳性表达.胰腺癌组织中MK蛋白的表达与Ki67的表达呈正相关(r ＝ 0.4,P ＜0.05).结论 检测MK蛋白对于胰腺癌的诊断及与慢性胰腺炎的鉴别诊断具有参考价值.MK在胰腺癌中高表达可能与肿瘤的发生发展及细胞增殖密切相关.
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Midkine基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
目的:构建妊娠中肾细胞因子(Midkine,MK)的原核表达载体并诱导其表达.方法:利用RT-PCR技术从人胎儿肾组织总RNA扩增MK成熟肽的DNA的编码序列,将扩增产物插入至温控表达载体pBV220中并转化E.coli DH 5α温度诱导表达.结果:琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物的长度与目的片段相符.对重组质粒分析表明,插入片段的序列与Gene Bank发表的人MK基因编码序列一致.SDS-PAGE电泳显示,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为13×103的蛋白产物.结论:人MK编码序列已被克隆至表达载体pBV220中并在大肠杆菌诱导表达.
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妊娠中肾细胞因子与肿瘤
Midkine(NK)是一种肝素结合生长因子,与PTN共同组成NK家族.NK具有一系列与肿瘤发生发展密切相关的生物学功能.它在多种肿瘤组织,包括一些癌前病变肿瘤组织中高度表达,并与病程相关.在一些肿瘤患者血清中MK水平明显升高,此外,MK抗体对某些肿瘤细胞的生长具有抑制作用.因此,对MK的研究有可能在肿瘤的诊断、预后及治疗中发挥重要作用.肿瘤防治杂志,2001,8(3):168-171
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原发性胆囊癌组织中Midkine的表达及其临床意义
目的 观察Midine(MK)在原发性胆囊癌中的表达情况,并探讨其与原发性胆囊癌临床病理指标之间的关系.方法 选择1995年1月～2003年6月胆囊癌53例、腹腔转移灶12例、淋巴结转移灶12例和正常胆囊20例、胆囊腺瘤14例,均采用免疫组织化学方法检测MK在其中的表达情况；结合53例胆囊癌患者临床病理资料分析MK表达指数与组织学类型、分化程度、临床分期、局部淋巴结转移、肝脏浸润及腹腔广泛转移的关系.结果 正常胆囊、胆囊腺瘤与原发性胆囊癌的MK表达标记指数(LI)中位数分别为0％、17％(5％,29％)、72％(41％,98％),三者比较差异有高度统计学意义(P＜0.01)；胆囊淋巴结转移灶及腹腔转移灶Midkine表达LI的中位数分别为90％(76％,100％)、88％(65％,100％),二者Midkine表达LI与原发灶比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；结合临床病理资料统计分析发现,胆囊癌的分化程度越低,Midkine表达LI越高,差异有统计学意义(P＜0.05)；Midkine在晚期胆囊癌中表达LI水平高于早中期,差异有统计学意义(P＜ 0.05)；Midkine在伴有肝脏浸润灶中表达LI水平高于不伴肝脏浸润,差异有统计学意义(P＜ 0.05)；Midkine在伴有广泛腹腔转移中表达LI水平高于不伴腹腔广泛转移,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Midkine可作为胆囊癌新的标记物；Midkine表达与胆囊癌发生、发展有关,对胆囊癌的临床分期、浸润转移的估计和病人预后的判断有一定意义.
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Midkine在甲状腺癌标志物中的价值
Midkine(MK)有多重生物学功能,对肿瘤的诊治具有重要作用.MK在不同的肿瘤中高度表达,促进癌细胞增殖、迁移和新生血管形成.近年来的研究发现,MK和甲状腺癌关系密切.免疫组化研究表明,MK在甲状腺癌细胞和组织中的表达明显高于正常甲状腺.甲状腺结节穿刺洗脱液的MK水平对甲状腺结节的良恶性判断有很好的诊断价值.MK是可分泌到血液中的细胞因子,其作为血清学标志物可以判断甲状腺结节良恶性,对分化型甲状腺癌¨1I治疗的预后(是否存在转移病灶)有明确的判断价值.在甲状腺球蛋白抗体阳性的情况下,MK可作为预测分化型甲状腺癌转移的有效血清学标志物.MK的大局限性是肿瘤特异性差,很多情况下,需要和其他特异性强的肿瘤标志物联合测定.今后的研究重点是MK在甲状腺癌发生、发展和治疗耐药机制方面的探讨.笔者主要综述MK在甲状腺癌标志物中的价值.
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血清midkine对甲状腺球蛋白抗体阳性甲状腺癌患者转移病灶的预测价值
目的 研究midkine在甲状腺球蛋白抗体(TgAb)阳性的分化型甲状腺癌患者首次131Ⅰ治疗前,对甲状腺癌是否有转移病灶的预测价值.方法 根据严格的纳入和排除标准,入选151例分化型甲状腺癌患者,运用酶联免疫吸附法测定midkine (MK)水平.终有转移病灶的TgAb阳性的分化型甲状腺癌患者28例,无转移病灶者123例.用受试者工作特征(ROC)曲线评估患者131Ⅰ治疗前MK预测转移病灶的价值.结果 有转移病灶的分化型甲状腺癌患者的MK水平高于无转移的患者.MK显示出良好的诊断价值,佳截断值为550 ng/L时,诊断准确率为83％,ROC曲线下面积为0.856(P＜0.001).结论 当TgAb阳性而不适合用甲状腺球蛋白做标志物时,MK可以作为预测分化型甲状腺癌转移的标志物.
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Midkine在胰腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨Midkine在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化EliVisionTM Plus法检测70例手术切除的原发性胰腺癌组织及15例癌旁胰腺组织中Midkine的表达.结果 Midkine在70例原发性胰腺癌组织中的阳性率为71.4%(50/70),而在癌旁胰腺组织中未见表达;Midkine表达与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴结转移显著相关(P＜0.05).Midkine表达阴性组累积总体生存率高于阳性组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Midkine的表达与胰腺癌的临床病理指标密切相关,其高表达提示患者预后不良.
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细胞因子midkine基因的克隆及其转化甲醇酵母Pichia pastoris
目的克隆细胞因子midkine (MK)基因,并转化甲醇酵母Pichia pastoris.方法利用RT-PCR方法从人胃癌MGC803细胞总RNA中扩增MK cDNA,构建分泌表达载体pPic9k-MK,然后转入宿主菌GS115中,提取GS115的基因组DNA,用PCR法扩增鉴定阳性克隆.结果成功构建了分泌表达载体pPic9k-MK,并转入GS115中,筛选到抗4.0 mg/ml G418的重组菌株,鉴定出5个阳性克隆.结论 MK基因可以转入甲醇酵母Pichia pastoris中,为今后在Pichia pastoris中表达有活性的MK蛋白,并进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了实验基础.
关键词： Midkine Pichia pastoris pPic9k 电转化 -
黏蛋白1和midkine在外阴鳞癌中的表达及意义
目的:探讨黏蛋白1(MUC1)和midkine(MK)在外阴上皮内瘤变(VIN)和外阴鳞状细胞癌(VSCC)中的表达及临床意义.方法:采用免疫组化方法对50例VSCC,25例VIN,10例正常外阴表皮进行研究,同时将MUC1和MK表达与外阴肿瘤的临床病理特征相比较.结果:VSCC中MUC1蛋白表达及阳性细胞率高于VINⅢ(P<0.05),VIN Ⅰ,Ⅱ和正常表皮无表达;MUC1阳性细胞率在高、中、低分化VSCC中差异显著(P<0.05).VSCC中MK蛋白表达及阳性细胞率高于VINⅢ(P<0.05),VIN Ⅰ,Ⅱ和正常表皮中无表达;MK更强表达于分化型(高分化和中分化)的VSCC中,与未分化(低分化)的VSCC相比差异显著(P<0.05).结论:MUC1表达可作为VSCC一种有效的肿瘤标志物.MUC1和MK与外阴肿瘤细胞分化有关,随着细胞分化程度的降低,MUC1表达增加,MK表达减弱.
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乳腺癌组织中Midkine、Survivin、MMP2基因用于预测预后
目的:探讨Midkine、Survivin、MMP2表达与乳腺癌预后的关系.方法:通过免疫组化方法检测临床随访病例的乳腺癌组织中Midkine、Survivin、MMP2的表达,并分析与临床随访资料的关系.结果:62例乳腺癌病例中23例(37.1%)3项表达均阳性,18例(29.0%)2项表达阳性,21例(33.9%)仅1项表达阳性或均阴性.随肿瘤分期上升,表达阳性率增加.以阳性率作为危险度,显示阳性率与远处转移发生(P<0.001),及5年存活率下降相关(P<0.01).结论:联合检测乳腺癌组织中的Midkine、Survivin、MMP2有助于判断预后.
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免疫组化测定 Midkine 和核因子 kB 对甲状腺乳头状癌以及转移灶的诊断价值
目的： Midkine(MK)和核因子 kB(NF-kB)在肿瘤发生过程中起着重要的作用,均被认为是新的恶性肿瘤生物标志物。本研究旨在探讨免疫组化方法测定 MK 和 NF-kB 对甲状腺乳头状癌(PTC)的诊断价值以及对 PTC 是否同时存在转移灶的判断价值。方法对76例 PTC 和70例结节性甲状腺肿(MNG)的术后病灶进行研究,PTC 组进一步分为亚组1(16例,有转移灶)和亚组2(60例,无转移灶),汇总所有患者的临床资料、影像学资料、手术后131 I 治疗情况、131 I 扫描结果等。 MK、NF-kB p65和 Ki-67的免疫组化在石蜡包埋的术后病灶标本上进行、并对结果进行量化(得到免疫组化积分或阳性百分率),对各个参数采用受试者工作特性曲线(ROC)进行统计分析,确定参数的诊断灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值。提取病灶蛋白,对 MK 和 NF-kB p65进行 Western 印迹,证实上述免疫组化结果。结果MK 和 NF-kB p65的免疫组化积分、以及 Ki-67的阳性百分率,PTC 组明显高于 MNG 组(均 P<0.01)；ROC结果显示三者具有良好诊断 PTC 的能力,诊断准确度分别为82.192%、80.137%和84.091%。 PTC 亚组1的上述3个参数显著高于亚组2(均 P<0.01)；ROC 结果显示三者具有良好诊断 PTC 转移灶的能力,诊断准确度分别为82.895%、80.263%和76.316%。 Western 印迹结果显示 MK 和 NF-kB p65的蛋白水平在PTC 亚组1明显高于亚组2,二者均明显高于 MNG(均 P<0.01)。结论 MK 和 NF-kB 的免疫组化可以用于 PTC 和 MNG 的鉴别诊断,并且可以判断 PTC 是否存在转移。
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Midkine特异的shRNA对胃肿瘤细胞BGC823增殖及凋亡的影响
目的 研究shRNA 干扰midkine对胃肿瘤细胞BGC823增殖能力及凋亡的影响.方法 构建midkine基因的特异性小RNA干扰质粒,采用脂质体2000转染BGC823细胞,运用CCK-8检测细胞的增殖能力,PI染色检测细胞凋亡情况.结果 成功转染重组体的BGC823细胞增殖明显受到抑制(P<0.01)细胞形成克隆数明显降低(P<0.01),并且有明显的亚二倍体峰出现(P<0.05).结论 针对midkine基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞BGC823 midkine表达,细胞增殖能力减弱,细胞凋亡增加,为midkine 基因靶向治疗提供一定的实验依据.
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子宫腺肌病组织中midkine的表达及其意义
目的 研究midkine(MK)蛋白在人子宫腺肌病组织中的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系.方法 收集人子宫腺肌病组织标本24例(子宫腺肌病组),免疫组化SP法检测组织中MK蛋白的表达,Western blot 法检测组织中Bcl-2的表达,另取正常子宫平滑肌标本19例作对照(对照组).结果 对照组未发现MK表达,子宫腺肌病组MK阳性表达率为70.83%(17/24);子宫腺肌病组Bcl-2的表达明显高于对照组(P＜0.05),其中MK阳性组Bcl-2平均光密度值135.16±31.47显著高于MK阴性组103.87±23.21(P＜0.05).结论 MK在子宫腺肌病中的表达可能起到促进细胞增殖和抑制凋亡的作用,可作为反映子宫腺肌病生物学行为的指标之一.
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槲皮素对人宫颈癌HeLa细胞midkine和caspase-3表达的影响
目的 通过观察槲皮素对宫颈癌 HeLa 细胞中midkine(MK)、caspase-3 基因和蛋白表达水平,探讨槲皮素体外诱导 HeLa 细胞凋亡的机制.方法 宫颈癌细胞株 HeLa 细胞经培养、传代后分为实验组(分别加入浓度为10、20、40、80及160 μmol/L的槲皮素)和空白对照组.采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)方法检测细胞内的MK和caspase-3基因mRNA和蛋白表达水平.结果 随槲皮素浓度的增高HeLa细胞中MK mRNA和蛋白表达依次下降,其中80 μmol/L、160 μmol/L组下降较明显,而caspase-3的mRNA和蛋白表达随药物浓度增高表达增强(P<0.01).结论 槲皮素可能通过下调MK、上调caspase-3的表达水平而发挥抗宫颈癌作用.
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融合蛋白表达载体MK-EGFP的构建及其在不同肿瘤细胞中的定位
MK(Midkine)是一种肝素结合性生长因子,初发现与细胞生长、迁移和存活有关,随后的研究发现它在多种人源恶性肿瘤中高表达[1-2].
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MK 通过 EPCR/PAR1通路促进乳腺癌 MDA-MB-231细胞体外血管生成
目的：探讨中期因子( midkine, MK)在人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外血管生成中的作用及其机制。方法采用shR-NA干扰技术降低MDA-MB-231细胞MK表达,应用Western blot技术检测肿瘤细胞中内皮蛋白C受体( endothelial protein C receptor, EPCR)的表达；干扰MK和EPCR表达或通过抗体阻断活化蛋白酶激活受体1(protease-activated receptor 1, PAR1)作用后,制备肿瘤条件培养基作用于人脐静脉内皮细胞( human umbilical vein endothelial cells, HUVECs),通过CCK-8试剂盒检测HUVECs增殖、Transwell小室检测迁移以及Matrigel表面培养检测脉管形成能力。结果干扰MK表达后,EPCR表达随之降低。干扰MK和EPCR低表达后,HUVECs增殖、迁移及脉管形成能力均低于对照组(P<0．05),EPCR干扰组低于MK干扰组(P<0．05)。应用抗PAR1作用后,HUVECs增殖、迁移及脉管形成能力低于对照组和EPCR干扰组(P<0．05)。结论 MK可通过EPCR/PAR1通路促进乳腺癌MDA-MB-231细胞体外血管生成。
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人Midkine基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
目的：构建人Midkine( MK)基因RNA干扰( RNA interference, RNAi)慢病毒载体并鉴定,为其体内外实验研究提供基础。方法设计针对人MK基因序列的4条RNAi靶点序列,分别与慢病毒载体进行连接,获得GV115-MK-1、GV115-MK-2、GV115-MK-3和GV115-MK-4质粒,转染感受态细菌,经PCR及测序技术的鉴定,然后与pHelper 1．0和pHelper 2．0共转染293T细胞,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。4种病毒载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,用RT-PCR检测MK mRNA的表达。结果 PCR和测序检测结果证实,插入的MK RNAi核苷酸序列正确,共转染293T细胞后可见大量绿色荧光。浓缩病毒后测定其滴度分别为6×108、5×108、5×108和6×108 TU/ml。感染 MDA-MB-231细胞后, RT-PCR 检测结果表明, GV115-MK-1干扰效果明显,MK基因敲减效率达87．2%( P<0．05)。结论成功构建人MK RNAi慢病毒表达载体,并可有效抑制MDA-MB-231细胞MK基因的表达。
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PTN和MK在子宫内膜异位症中的表达及意义
目的:探讨pleiotrophin(PTN)和midkine(MK)mRNA在子宫内膜异位症(EMs)中的表达及意义.方法:采用病例对照研究方法,以35例EMs患者在位和异位子宫内膜(研究组)以及25例非EMs妇女子宫内膜(对照组)为样本,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PTN、MK mRNA的表达.结果:研究组在位内膜中PTN和MK表达均明显高于对照组(P＜0.01);异位内膜 PTN mRNA表达高于对照组(P＜0.05),差异有统计学意义.EMs在位内膜中PTN、MK mRNA表达与内异症的临床期别呈正相关.无论增殖期或分泌期,EMs在位内膜中PTN、MK表达均高于对照组(均P＜0.05).结论:EMs患者在位子宫内膜组织中PTN和MK表达的变化可能与子宫内膜异位症的发生、发展有关.
