生长因子Midkine家族与恶性肿瘤

生长因子是控制细胞分裂和增殖的重要因素,与肿瘤的发生和发展密切相关.Midkine家族是生长因子家族的新成员,研究表明其在肿瘤的发生和发展中具有重要作用.

人Midkine启动子驱动的HSV-TK自杀基因体外抗肝癌作用

目的 观察以人Midkine(MK)启动子调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统在体外对人肝癌细胞的杀伤效应.方法 以含有人MK启动子调控的HSV-TK基因的重组腺病毒分别感染体外培养的甲胎蛋白(AFP)阳性人肝癌细胞BEL-7402和AFP阴性人肝癌细胞SMMC-7721,RT-PCR法检测HSV-TK基因在上述两种细胞中的转录表达,观察GCV对人肝癌细胞的杀伤作用.结果 GCV在体外对重组腺病毒感染的BEL-7402及SMMC-7721均有明显的杀伤作用,又以前者为著.相同的病毒滴度,其杀伤作用随着GCV浓度的增高而增强.均具有旁观者效应.结论 在体外表现HSV-TK基因的AFP阳性及阴性人肝癌细胞均可被人MK启动子调控的自杀基因HSV-TK杀伤.

人Midkine基因启动子片段的克隆

目的克隆人Midkine(MK)启动子基因2 335bp片段.方法自健康人血中提取人类基因组DNA作为模板,聚合酶链式反应(PCR)技术克隆人MK启动子基因2 335bp片段.琼脂糖凝胶电泳初步鉴定PCR产物,切取目的条带纯化并将其克隆入p GEM T载体中.选取阳性克隆进行DNA测序.结果电泳结果显示PCR产物包含有大小约为2 300 bp和1 400 bp的条带各1条;较大片段的测序结果显示,其与Genbank中的人MK启动子片段吻合.结论本研究成功克隆了人MK启动子基因2 335 bp片段.

健胃愈疡颗粒对胃溃疡大鼠胃组织MK、和表皮生长因子受体表达的影响

目的:探讨健胃愈疡颗粒的疗效及抗复发机制.方法:以Okabe改良法复制大鼠实验性胃溃疡,采用免疫组织化学和原位杂交技术,观察该药对胃溃疡组织Midkine(MK)和表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响.结果:模型组MK和EGFR的表达较正常组增高,而健胃愈疡治疗组MK和EGFR的表达增高较模型组更为明显.结论:健胃愈疡颗粒可增加MK和EGFR的上增性表达,这可能是其促进溃疡愈合和提高溃疡愈合质量从而减少溃疡复发的物质基础.

中期因子蛋白在脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的:研究人脑胶质瘤中中期因子蛋白(MK)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,探讨两者在胶质瘤的侵袭和恶性进展中的作用.方法:应用免疫组化SP法检测48例脑胶质瘤和10例正常脑组织中MK和PCNA的表达和分布情况.结果:MK和PCNA在正常脑组织中均无表达.在48例脑胶质瘤中39例有MK的表达,其在高级别脑胶质瘤中的阳性表达率明显高于低级别脑胶质瘤的阳性表达率(P＜0.01).PCNA在41例胶质瘤中表达,其在高级别胶质瘤中的表达明显高于低级别胶质瘤(P＜0.01).并且发现MK和PCNA在人脑胶质瘤中的表达呈正相关(r=0.635,P＜0.01).MK的阳性表达患者生存时间明显低于阴性患者,两者间差异有明显统计学意义.结论:MK在脑胶质瘤中的高表达与肿瘤的发生发展和细胞增殖有关,可以作为一个反映脑胶质瘤增殖能力和恶性程度的指标,为胶质瘤的基因治疗提供一个新的靶点.

甲状腺结节患者血清Midkine检测及其临床意义

目的 分析中期生长因子(MK)在甲状腺良性和恶性结节患者血清中的水平,探讨MK对诊断甲状腺结节良恶性的临床意义.方法 收集因“甲状腺结节”入院行切除术171例患者的血清,收集健康体检各项指标均正常的22例正常人血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MK的浓度.结果 良性结节患者122例,MK的浓度为(1.54±0.57) ng/ml,恶性结节患者49例,MK的浓度为(3.46±1.44) ng/rrl,正常对照组MK的浓度为(1.44±0.45) ng/ml.甲状腺恶性结节组血清中MK浓度明显高于良性结节组,两组间有显著性差异(P＜0.05),而甲状腺良性结节组与正常对照组的血清MK浓度接近,组间差异无统计学意义(P＞0.05);采用ROC曲线分析,以2.25ng/ml为阈值,对诊断甲状腺恶性结节有较高的诊断效能.结论 甲状腺恶性结节患者血清中MK浓度明显高于良性结节患者和正常人群,血清MK对甲状腺良恶性结节的诊断具有一定的临床意义.

胰腺癌组织中Midkine的表达与细胞增殖及凋亡的关系

目的 研究Midkine(MK)蛋白在人胰腺癌组织中的表达与肿瘤细胞增殖和凋亡之间的关系及意义.方法 收集人胰腺癌组织标本49例,免疫组化SP法检测MK蛋白和增殖细胞核抗原Ki67的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数,另取同期15例正常胰腺组织作对照.结果 15例正常胰腺组织中均未发现MK和Ki67阳性表达,细胞凋亡较少(0.63±0.21);77.1%(35/49)的胰腺癌组织中有MK阳性表达,其表达与肿瘤组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05);49例胰腺癌组织中Ki67平均标记指数(LI)为(31.67±15.41),平均凋亡指数(AI)为(5.93±4.18);MK表达阳性组Ki67平均标记指数为(35.27±16.03),显著高于阴性组的(22.67±13.66)(P<0.05);MK表达阳性组凋亡指数为(5.13±2.69),显著低于阴性组的(7.93±6.65)(P<0.05).结论 MK蛋白可作为反映胰腺癌生物学行为的指标之一,其在胰腺癌中的表达可能起到促进肿瘤细胞增殖和抑制凋亡的作用,MK基因可能成为胰腺癌治疗的新靶点.

新型肝素结合细胞因子midkine的心血管作用

Midkine(MK)是一种碱性肝素结合生长因子,由121个氨基酸组成,相对分子质量约为13kD,富含碱性氨基酸和半胱氨酸残基,人类的该物质编码序列位于15kb的DNA片段上,编码序列有4个外显子.每一外显子与内含子界面和鼠类多有高度的同源性.

Midkine在口腔颌面部肿瘤中的研究

中期因子(midkine,MK)是肝素结合性生长因子家族中新发现的一类成员,是一种分泌型肝素结合生长因子,在小鼠妊娠中期广泛表达,出生后则只在肾脏中有表达,因此将这一基因命名为中期因子(midkine,MK),是妊娠中期(midgestation)和肾脏(kidney)的缩写,其生物活性类似成纤维细胞生长因子,但结构却不同[1],这个家族包含2个成员,即多效蛋白(pleiotrophin,PTN)和MK.

Midkine在口腔颌面部肿瘤中的研究

中期因子(midkine,MK)是肝素结合性生长因子家族中新发现的一类成员,是一种分泌型肝素结合生长因子,在小鼠妊娠中期广泛表达,出生后则只在肾脏中有表达,因此将这一基因命名为中期因子(midkine,MK),是妊娠中期(midgestation)和肾脏(kidney)的缩写,其生物活性类似成纤维细胞生长因子,但结构却不同[1],这个家族包含2个成员,即多效蛋白(pleiotrophin,PTN)和MK.

细胞因子Midkine融合蛋白的表达及其单克隆抗体的制备与应用

目的: 克隆细胞因子midkine(MK)基因,表达其融合蛋白,制备抗MK单克隆抗体(mAb)并检测MK在肿瘤细胞中的表达.方法:利用MK基因的特异性引物,通过RT-PCR从人肾癌组织mRNA中扩增人MK cDNA分子.将其定向克隆于原核表达载体中,在大肠杆菌中表达MS2-MK融合蛋白.以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,用传统的杂交瘤技术,进行细胞融合、筛选、克隆化并制备mAb腹水.用ELISA法分析其Ig亚类,用免疫细胞化学染色法检测MK在肿瘤细胞中的表达.结果:成功地克隆出MK基因并表达了MS2-MK融合蛋白.通过免疫和筛选,获得2株分泌小鼠抗人MK mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb的Ig亚类分别为IgG1和IgG2a.免疫细胞化学染色显示,2株mAb与人胃癌细胞株MGC803和胃癌组织呈强阳性反应.结论:在原核细胞中获得MS2-MK融合蛋白的表达,并制备出抗MK的mAb,为研究MK的生物学活性提供了条件.

基因在肿瘤治疗中的研究进展

中期因子(midkine,MK)是一种肝素结合生长因子,在多种肿瘤中存在过表达,与肿瘤发生、发展、转移和预后密切相关.目前针对Mikdine检测的试剂盒已经开发,针对Midkine的反义核苷酸、RNA干扰和小分子抑制剂的研究已经广泛开展,同时鉴于其在肿瘤内高表达,人们正在研究利用其启动子进行肿瘤治疗,并对其作为肿瘤标志物进行评估.本文就MK在肿瘤治疗中的研究进展做一综述.

Midkine shRNA对胃癌SGC7901细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究shRNA 干扰midkine对胃肿瘤细胞SGC7901生物学特性的影响.方法:构建midkine基因的特异性小RNA干扰质粒,采用脂质体2000转染SGC7901细胞,检测细胞的增殖和克隆形成能力以及细胞凋亡情况.结果:与对照组相比,转染重质粒后1-5天, SGC7901细胞增殖明显受到抑制(P＜0.01),细胞形成克隆数明显降低(P＜0.01),并且有明显的亚二倍体峰出现(P＜0.05).结论:针对midkine基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞SGC7901 midkine表达,细胞增殖及克隆形成能力减弱,细胞凋亡增加,为midkine 基因靶向治疗提供一定的实验依据.

人胃腺癌BGC823细胞Midkine高表达前后基因表达谱芯片分析

目的:用基因芯片技术分析、筛选Midkine高表达前后胃腺癌相关基因谱的差异表达.方法:建立Midkine高表达BGC823胃腺癌细胞系,提取细胞总RNA,逆转录Cy3、Cy5 标记cDNA 探针,应用晶芯表达谱芯片,分析差异表达的基因.结果:发现Midkine高表达前后BGC823胃腺癌细胞有显著性表达差异的基因共有550个,其中上调基因407个,下调基因143个.对550条差异表达基因进行初步功能分类分析,结果表明这些基因与Midkine促进胃腺癌发病机制存在相关性.结论: Midkine高表达前后BGC823胃腺癌细胞部分功能基因存在显著的表达差异,多数差异表达的基因参与细胞黏附、细胞骨架形成、细胞周期以及细胞代谢等过程.

Midkine、MMP-2 在胆囊癌中的表达及其临床意义

目的:探索中期因子(Midkine)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在胆囊癌中的表达水平及两者的相关性.方法:采用免疫组织化学方法检测40例胆囊癌和15例慢性胆囊炎中Midkine、MMP-2的表达,并结合临床特征分析两者的表达,数据统计采用SPSS 13.0统计软件完成.结果:Midkine、MMP-2在胆囊癌和慢性胆囊炎组织中的表达呈显著性差异(P＜0.05)；在胆囊癌组织中有无淋巴结转移、分化程度、远处转移组高表达率方面具有显著性差异(P＜0.05),而在年龄、性别、肿瘤浸润程度组则无显著性差异(P＞0.05).结论:Midkine、MMP-2共同参与了胆囊癌的发生、发展,促进肿瘤细胞的增殖、迁徙,临床上联合检测有利于胆囊癌的早期诊断及判定胆囊癌的生物学行为.

Midkine对PFSK细胞的定向分化诱导作用

本研究的目的是观察midkine基因对PFSK细胞的定向诱导作用.通过分子克隆和转染,将人midkine基因导入具有神经前体细胞可分化特性的PFSK细胞,用显微镜观察细胞的形态变化,并以RT-PCR对神经细胞相关基因的表达进行检测,研究midkine诱导的PFSK细胞分化.结果表明,PFSK细胞被转化后,细胞的突起生长明显.同时细胞内MAP-2和NCAM基因的表达趋向活跃;nestin基因的表达大大减弱;GFAP基因仍检测不到.所有这些结果一致地表明,转染midkine后,PFSK细胞呈现向神经元、而不是向神经胶质细胞转化的趋势.本研究对阐明midkine的功能及建立PFSK/midkine研究模式具有一定的意义.

维甲酸诱导鼠磨牙牙胚midkine基因表达的研究

目的:探讨RA与midkine (MK)基因表达在牙胚发育过程中的相互关系.方法:将16d胎龄的鼠胎下颌第一磨牙牙胚分别置于含不同浓度的外源性RA(分别为5×10 -8 ,5×10-7 和5×10-6mol/L)的 RPMI 1640半固态培养基表面 .培养2d后分别提取总 RNA,经 RT-PCR 扩增25个循环,采用 Southern 印迹法检测MK mRNA 在牙胚组织中的表达变化.结果:体外培养2d后,对照组(无外源性 RA )牙胚MK mRNA 的表达为弱阳性;随培养基中外源性 RA浓度的增加,牙胚组织中 MK mRNA 的表达逐渐增强.结论:MK基因在牙胚发育中的作用可能受RA 调控.

BACKGROUND: Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common cancers worldwide. Most of the patients with HCC lose the surgical opportunity at the time of diagno-sis. Some novel therapeutic modalities, like gene therapy, are promising for the treatment of HCC. However, the success of gene therapy depends on two aspects: efficient gene materials and gene delivery vectors. The present study was to develop new chitosan-based nanoparticles for a midkine-siRNA (anti-HCC gene drug) delivery.
METHODS: The novel gene delivery vector (MixNCH) was syn-thesized by hybrid-type modification of chitosan with 2-chloro-ethylaminehydrochlorideandN,N-dimethyl-2-chloroethylamine hydrochloride. The chemical structure of MixNCH was char-acterized by FT-IR and 1HNMR. The cytotoxicity of MixNCH was determined by MTS assay. The gene condensation ability and size, zeta potential and morphology of MixNCH/MK-siRNA nanoparticles were measured. The in vitro transfection and gene knockdown efficiency of midkine by MixNCH/MK-siRNA nanoparticles was detected by qRT-PCR and Western blotting. Gene knockdown effect at the molecule level on the proliferation of HepG2 in vitro was determined by MTS assay.
RESULTS: MixNCH was successfully acquired by aminoalkyl-ation modification of chitosan. The MixNCH could condense MK-siRNA well above the weight ratio of 3. The average size of MixNCH/MK-siRNA nanoparticles was 100-200 nm, and the surface charge was about +5 mV. Morphologically, MixNCH/MK-siRNA nanoparticles were in regular spherical shape with no aggregation. Regarding to the in vitro transfection of nanoparticles, the MixNCH/MK-siRNA nanoparticles reduced MK mRNA level to 14.03%±4.03%, which were comparable to Biotrans (8.94%±3.77%). MixNCH/MK-siRNA effectively inhibited the proliferation of HepG2 in vitro.
CONCLUSION: MixNCH/MK-siRNA nanoparticles could be effective for the treatment of hepatocellular carcinoma.

Midkine在大肠癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨Midine在大肠癌组织中的表达及临床意义.方法:本文选取我院自2016年1月到2017年1月接诊的大肠癌患者25例作为研究组,选取同期来我院体检的健康者25例作为对照组,采用SP组化法检测本次所有受检者的Midkine水平,使用统计学方法对两组受检者的阳性率进行对比分析.结果:研究组患者的Midkine阳性率为20％,明显低于对照组的88％,对比差异有显著统计学意义,P<0.05.结论:及时检测Midkine阳性水平对大肠癌的早期预防和治疗有积极意义,值的进一步总结推广.