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胸腹水236例液基细胞学检测及免疫细胞化学分析
目的：探讨液基薄层细胞检测和传统涂片在胸腹水细胞病理诊断中的意义以及免疫细胞化学染色在恶性胸腹水诊断中的价值。方法：收集胸腹水标本236例，进行两种方法的制片，HE 染色，并进行 CEA、CK5/6、CK7、Ki-67免疫细胞化学染色。结果：液基细胞检测技术检测胸腹水恶性肿瘤检出率高于传统涂片技术，两组间差异有统计学意义(P＜0.05)；恶性胸腹水CEA、CK5/6、CK7、Ki-67表达阳性率高于良性胸腹水，两组间差异有统计学意义(P均＜0.01)。结论：液基细胞检测技术检测胸腹水恶性肿瘤检出率高于传统涂片技术，辅以免疫细胞化学检测，对肿瘤的诊断、鉴别诊断及细胞来源有重要的价值。
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联合检测血清与胸水细胞中的CEA、CA125和CYFRA21-1鉴别良恶性胸水的临床意义
目的:探讨化学发光法与ELISA法检测血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗-125(CA125)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)联合免疫组织化学法检测胸水细胞中上述肿瘤标志物在提高非小细胞肺癌(NSCLC)诊断率的临床应用价值.方法:2005年～2009年收治不同TMN分期的NSCLC患者56例和肺部良性疾病患者36例,均合并有胸腔积液.分别检测其血清CEA、CA125、CYFRA21～1水平,其中CEA、CA125采用化学发光法、CYFRA21～1采用ELISA法检测.并用免疫细胞化学方法检测上述患者胸水细胞CEA、CA125及CYFRA21-1的表达.结果:血清CEA、CA125、CYFRA21-1的表达水平在肺癌组均高于肺良性病变组的表达水平,经统计学检验,差异有统计学意义(P＜0.05).CEA、CA125、CYFRA21-1在癌性胸水细胞中的表达显著高于良性疾病胸水中的间皮细胞.结论:免疫细胞化学法检测胸水细胞肿瘤标志物其敏感性较血清肿瘤标志物的检测高,而血清肿瘤标志物的检测其特异性较免疫细胞化学法检测胸水细胞肿瘤标志物高,两种检验方法联合应用可提高非小细胞肺癌诊断率.
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生后不同时间乳鼠心肌细胞的形态结构和功能特征
目的 观察生后不同时间乳鼠心肌细胞的形态结构和功能特征,建立理想的分离和纯化乳鼠心肌细胞技术. 方法 采用胰蛋白酶消化和机械分离,结合两次差速贴壁法以及使用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),从生后1～7d乳鼠心脏分离和纯化心肌细胞.观察细胞的形态和自发性搏动,并用心肌特异性肌钙蛋白丁(cTnT)免疫细胞化学染色进行鉴定.利用原位透射电镜术观察细胞超微结构,并观察其对肾上腺素和异丙肾上腺素的反应. 结果 从乳鼠心脏分离的细胞95%以上为心肌细胞,存活率为95%以上.乳鼠心肌细胞包括短柱状或杆状细胞和不规则形细胞.生后1～3d鼠大部分杆状细胞呈现幼稚心肌细胞的超微结构特征.6～7d鼠的杆状细胞具有类似于成熟心肌细胞的超微结构特征,cTnT呈高表达,横纹明显.不规则形细胞含有少量肌丝束,排列不规则.少数体积较小的细胞呈现未分化细胞的超微结构特征.培养72h后80%以上的细胞出现自发性搏动.肾上腺素和异丙肾上腺素刺激后,搏动细胞数目增多,搏动增强.生后6～7d鼠杆状细胞的药物反应较强. 结论 两类心肌细胞的超微结构特征、自发性搏动和对肾上腺素和异丙肾上腺素的反应不同.生后6～7d鼠心肌细胞较适合于成熟心肌细胞的体外实验研究.本实验建立的方法 是一种较理想的乳鼠心肌细胞培养方法 .
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增强免疫细胞化学染色敏感性的新技术研究及应用
近年来,原位杂交、PCR等分子病理学新技术有了很大发展,在一些疾病的诊断和研究中显示出巨大的优势,但是免疫细胞化学染色(ICS)技术以其突出的优点,广泛应用于肿瘤临床病理诊断和鉴别诊断.针对ICS时间长、敏感性差、抗原修复方法单一、组织固定、制片和染色等流程对抗原性均有不同程度的破坏,终影响ICS结果等缺点,我们在实践中不断探索,对影响抗原性的主要因素:抗原修复、骨组织ICS、冷冻厚切片及HBP增敏等方面进行了研究,为一些疑难肿瘤的诊断提供了准确、快速的技术保障.现简介如下.
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脱落细胞免疫细胞化学技术
在脱落细胞学诊断中免疫细胞化学技术是一项很重要的内容,随着新的抗体在识别抗原的特异性和多价性上日益完善,这项技术在临床病理诊断中的应用也越来越广泛.但在常规的脱落细胞学检查中,常因细胞涂片免疫细胞化学染色不够理想而未能充分展示出其应有的优势.因此,建立免疫细胞化学质控标准(质量保证和质量控制)对提高脱落细胞诊断准确率具有重要意义.本研究室接受了英国国际免疫组织化学质量评估中心的细胞学免疫组织化学技术评估,以下将我们的一些工作积累和参加评估学习过程中的一些体会介绍给大家.
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骨髓同种异体干细胞移植后淋巴组织增殖性疾病
1.病例简介:患者男,34岁.无明显诱因出现活动后乏力、气短,自觉头晕、头痛9个月入院.体检无明显异常.血常规示红细胞及白细胞减少,分片偶见原始细胞.骨髓穿刺示原始+幼稚淋巴细胞占59%.流式细胞学免疫分型CD33、CD7、CD11b、CD19、CD5、CD2、CD3阳性.染色体未见异常.临床诊断为急性淋巴细胞性白血病,双表型.于确诊后7个月进行骨髓同种异体干细胞移植.移植后给予环孢酰胺免疫抑制剂治疗,病情平稳.于移植后第55天检查发现患者右颈后可触及肿大淋巴结2枚,大小均约1.5 cm×1.0 cm×1.0 cm.临床考虑:(1)白血病髓外复发;(2)病毒感染;(3)淋巴瘤.因患者移植术后2个月,尚未出无菌舱,不宜手术摘取淋巴结送检,因此于无菌舱内应用"友谊式穿刺针"[1]穿刺肿大淋巴结获取尽可能多标本,除制成1张细胞涂片外,剩余组织全部制成细胞块,常规切片,HE染色、免疫细胞化学染色及EB病毒原位杂交染色.
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神经组织细胞特异性蛋白在大鼠羊膜上皮细胞中的表达
目的检测神经组织细胞特异性抗原及神经营养因子-3 (NT-3)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)在大鼠羊膜上皮细胞中的表达.方法从孕12-14 d的Wistar大鼠羊膜中分离羊膜上皮细胞,通过免疫细胞化学检测神经组织细胞特异性抗原(MAP-2、NSE、GFAP、Nestin、Musashi)及ChAT、NT-3在羊膜上皮细胞中的表达.结果羊膜上皮细胞表达神经干细胞、神经细胞、神经胶质细胞特异性抗原,并且在羊膜上皮细胞中有ChAT与NT-3的表达.结论羊膜上皮细胞与神经组织细胞具有一定的同源性;羊膜可望作为治疗神经系统疾病新的细胞来源.
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恶性浆膜腔积液脱落细胞中P21 ras蛋白表达状况及其意义
目的:检测浆膜腔积液脱落细胞P21 ras蛋白表达状况,探讨其对恶性浆膜腔积液的诊断价值.方法:将新鲜浆膜腔积液离心后收集脱落细胞,取部分细胞涂片进行常规细胞学诊断,据此将积液分为良性与恶性两组.对余下脱落细胞作"标准化"处理,包括去除红细胞、多聚甲醛固定、调整细胞浓度、制备细胞涂片,然后进行P21 ras蛋白免疫化学染色(SP法).结果:共108例浆膜腔积液,恶性53例,良性55例.39例恶性积液P21 fas蛋白免疫化学染色阳性(73.6%),且多为强阳性或阳性;12例良性积液P21 ras蛋白染色阳性(21.8%),且多为弱阳性或阳性,两组间阳性率(χ2=29.02,P＜0.001)及阳性强度(Uc=6.786,P＜0.001)的差异均有显著性统计学意义.P21 ras蛋白免疫化学染色诊断恶性积液的敏感度为73.6%,特异度为78.2%,诊断符合率达75.9%.结论:浆膜腔积液中脱落细胞P21 ras蛋白免疫化学染色在肿瘤细胞多为阳性,良性细胞多为阴性,对恶性体腔积液的诊断有较大的价值.
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胚胎干细胞诱生的胰岛素分泌细胞分泌胰岛素的研究
目的:研究小鼠胚胎干细胞ES-D3诱生的胰岛素分泌细胞(IPCs)分泌胰岛素的能力及其所分泌的胰岛素的活性.方法:将ES-D3细胞培养于经处理的鼠胚成纤维细胞滋养层上保持未分化状态扩增,对数生长期时转入无血清含bFGF的DMEM液进行诱导,隔天换液,21 d后,采用DTZ染色、免疫细胞化学染色和ELISA等方法检测胰岛素的生成与分泌情况;用RT-PCR法检测PDX-1、Insulinl、Insulin2和Glut2等胰岛素分泌细胞相关基因mRNA的表达,并通过动物实验研究生成的IPCs所分泌的胰岛素的降糖活性.结果:在诱导21 d,DTZ染色法观察到被DTZ染成洋红色的IPCs;免疫细胞化学染色法显示诱导体系中有胰岛素特异性免疫反应阳性的细胞群;ELISA法测定结果表明IPCs受高糖刺激后分泌胰岛素,动物实验证明所分泌的胰岛素具有降糖活性;RT-PCR法检测到有Insulin2和PDX-1 mRNA的表达,Insulinl呈弱表达,Glut2不表达.结论:小鼠胚胎干细胞ES-D3诱生的IPCs能够合成并分泌胰岛素,而且分泌的胰岛素具有降糖活性.
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胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL的基因转录与表达
目的:探讨胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL基因转录与表达情况,为胃癌与Fas及FasL基因的相关研究提供帮助.方法:利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL基因mRNA转录情况.采用免疫细胞化学染色鉴定胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL基因有无蛋白表达及其表达程度.结果:从提取的胃癌细胞总RNA中分别扩增出Fas及FasL的D NA片段,免疫细胞化学染色亦显示胃腺癌细胞株SGC7901中存在Fas及FasL蛋白表达产物.结论:中国人胃腺癌细胞株SGC7901中存在Fas及FasL基因的mRNA转录及蛋白的表达.
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新生鼠心脏成纤维细胞原代培养及脂质体转染条件优化的实验研究
目的：探讨新生大鼠心脏成纤维细胞（CFs）的原代培养方法及脂质体转染条件的优化。
方法：酶消化法原代培养CFs，倒置显微镜下观察细胞生长状态，免疫细胞化学染色鉴定CFs，并采用脂质体转染原代CFs，流式细胞术检测转染率。 -
一种培养细胞片免疫细胞化学染色方法
应用培养的细胞进行免疫细胞化学、原位杂交等是细胞生物学研究基本的方法.国内外多数研究者均采用将培养的贴壁细胞经过消化、离心、涂片、固定后免疫细胞化学的方法,但是,操作过程中细胞的形态和功能可能发生变化,操作烦琐.下面介绍一种简便、快速、可靠的在盖玻片上进行免疫细胞化学染色的方法.
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胸腹水液基薄层细胞涂片中Ki-67的表达联合CA 153、CYFRA 211、CEA的检测与胸腹水良恶性质的相关性
目的 本实验通过选用单克隆抗体Ki-67标记胸腹水液基薄层细胞涂片,并联合定量分析CA153、CYFRA211及CEA等三项肿瘤标志物在胸腹水中的含量,对比这几种检测指标的不同检测组合的效能评价来鉴别胸腹水的良、恶性质.方法 本实验共收集恶性组胸腹水标本51例,良性组胸腹水标本34例,对每份标本部分采用免疫细胞化学染色法检测液基薄层细胞涂片中Ki-67表达及半定量分析,其余部分检测肿瘤标志物CA 153、CYFRA211及CEA的含量,后分别对4项指标单独及联合检测的不同组合进行效能评价.结果 恶性组中胸腹水Ki-67的表达分析及CYFRA211、CEA含量均高于良性胸腔积液组,差异有统计学意义(P<0.05).在效能评价中,4个项目单独检测胸腹水时,敏感度和阴性预测值低的是CA 153、特异性低的是CYFRA 211、阳性预测值低的是CEA.当两两组合检测中Ki-67和CYFRA 211的敏感性高,可达98.0%,但特异性低.而Ki-67和CA 153联合检测,特异性尽管高,达76.4%,但敏感性却低,为88.3%.而在3项组合中,每种组合均可将敏感性提高到90.0%以上,但特异性却比单项检测或两两结合检测的结果均低.而当以上4项指标共同联合检测时敏感度为100.0%,而特异性却为几种检测方式中的低,为44.1%.结论 分析所测结果,细胞免疫组化Ki-67的表达联合CEA、CYFRA 211检测可将恶性胸腹水诊断的敏感性提高到98.0%,而特异性也可达到70.5%,从而成为在鉴别胸腹水良、恶性质中大互补作用的项目组合.
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新型隐球菌性脑膜炎患者脑脊液中隐球菌与CD4+ T细胞关系的分析
目的:探讨新型隐球菌性脑膜炎患者的脑脊液特点.方法:腰椎穿刺术获得脑脊液,脑脊液标本涂片墨汁染色查找带有荚膜的新型隐球菌.采用免疫细胞化学染色方法观察隐球菌数量与白细胞计数及CD4+ T细胞计数的关系.结果:28例新型隐球菌性脑膜炎患者,脑脊液白细胞数在(10～300)×10(6)/L之间,多以淋巴细胞为主.随着疾病病程的进展和治疗,出现隐球菌先增后减与白细胞先减后增的变化趋势,而CD4+ T细胞则随疾病的治疗逐渐减少.结论:脑脊液中CD4+ T细胞可作为新型隐球菌性脑膜炎患者疗效观察的指标.
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提高免疫细胞化学染色的新技术研究及应用
近年来,原位杂交、PCR等分子病理学新技术有了很大发展,在一些疾病的诊断和研究中显示出了巨大的优势,但是免疫细胞化学染色(ICS)技术以其操作简单、敏感性高、特异性强,能将形态、代谢和机能密切结合起来等优点而广泛应用于肿瘤临床病理诊断和鉴别诊断.
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CK 7CK20 CA125及TTF-1在液基细胞学腺癌细胞中的表达及意义分析
目的:研究CK7、CK20、CA125及TTF-1在液基细胞学腺癌细胞中的表达情况并分析其临床意义.方法:选取从2015年2月至2016年3月,我院病理科经组织学确诊为腺癌的浆膜腔积液标本137例,利用液基薄层细胞学制片技术以及免疫细胞化学染色方法,观察不同组织来源腺癌细胞的CK7、CK20、CA125及TTF-1等抗体的表达情况.结果:CK7在肺腺癌的阳性率100%,卵巢浆液性癌大部分表达,肠道腺癌个别阳性;CK20在肠道腺癌中的表达阳性率为88.89%(32/36),在肺腺癌及卵巢浆液性癌中未见表达;CA125在卵巢浆液性癌中表达率为70.45%(31/44),在肺腺癌以及肠道腺癌中表达较少;TTF-1在肺腺癌中的表达阳性率为80.70%(46/57),在卵巢浆液性癌及肠道腺癌中未见表达,差异均有统计学意义(均P<0.05).低分化肺腺癌中TTF-1表达阳性率显著低于中高分化,差异均有统计学意义(均P<0.05).低分化卵巢浆液性癌中CA125表达阳性率显著低于中高分化,差异有统计学意义(P<0.05).低分化肠道腺癌中CK20表达阳性率显著低于中高分化,差异有统计学意义(P<0.05).结论:CK7、CK20、CA125及TTF-1在液基细胞学腺癌细胞中的表达情况有利于鉴别浆膜腔积液中来自肺、卵巢以及肠道的腺癌.
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大鼠肌源性干细胞的分离、纯化和培养
背景:要获得满足临床需要的肌源性干细胞,体外筛选和扩增已成为关键环节.目的:拟建立稳定高效的成年大鼠肌源性干细胞的分离培养、纯化方法.方法:成年SD大鼠麻醉后,无菌条件下取骨骼肌,采用Ⅺ型胶原酶、Dispase和胰酶消化法获得肌源性干细胞,以密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化.记录细胞生长曲线,MTT比色法观察不同接种密度对细胞生长的影响,采用免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定.结果与结论:原代肌源性干细胞体积较小,贴壁缓慢,折光性较好,多呈球形、梭形或纺锤形,增殖缓慢.传代培养后,加入含体积分数为20%血清浓度的完全培养基,以1×109L-1密度接种时活细胞数量多,为适宜接种密度,传1～4代细胞生长状态良好.免疫细胞化学染色结果为desmin(+),CD34(+),CD45(-),Sea-1(+),证实通过体外原代培养获得了高纯度的肌源性干细胞,并成功扩增.
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雷公藤多糖诱导胰腺干细胞成胰岛样细胞团
背景:胰岛细胞来源不足说明胰岛细胞移植治疗糖尿病不能满足临床需要.因此,体外诱导胰腺干细胞分化为胰岛细胞成为研究的热点.目的:观察雷公藤多糖对小鼠胰岛来源的胰腺干细胞的诱导分化作用,从而探索中药诱导胰腺干细胞分化为胰岛β细胞的作用.方法:采用雷公藤多糖体外诱导经纯化的小鼠胰腺干细胞分化为胰岛细胞.胰岛样细胞团进行形态学观察,双硫腙染色和Western blot分析.结果与结论:①细胞形态学、细胞生长特性及免疫细胞化学染色显示,实验不仅得到了纯度高的小鼠胰腺干细胞,而且该细胞经雷公藤多糖诱导后能形成球形的胰岛样结构,有细长的蒂与培养瓶底部相连,双硫腙染色呈铁红色;②Western-blot检测显示,胰岛样细胞团中有β细胞素蛋白的表达;③结果表明,小鼠胰腺干细胞可以体外经雷公藤多糖诱导分化为含有β细胞的胰岛样细胞团.
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P16ink4a作为分子标记物在宫颈癌筛查中的应用
目的:探讨P16ink4a作为肿瘤抑制因子在宫颈液基细胞学(LCT)中的应用.方法:选取120例细胞学检查标本,分别进行液基细胞学检测和P16ink4a免疫细胞化学染色,对阳性标本进行组织学检查.结果:P16ink4a作为分子标记物在宫颈液基细胞学诊断为未见上皮内病变及癌变(NILM)、非典型鳞状上皮细胞(ASC)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)的阳性表达率分别为0(0/20)、42.5％ (17/40)、27.5％ (11/40)、95％ (19/20),其中ASC、HSIL组的阳性率显著高于LSIL、NILM组(P＜0.05).结论:P16inka作为分子标记物在免疫细胞化学染色中提高了对非典型鳞状上皮细胞的识别能力和宫颈癌筛查的准确性.
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CXCL8及其受体 CXCR1、CXCR2在慢性乙肝患者外周血 PMNs中的表达
目的：探讨慢性乙肝患者外周血中性粒细胞（ PMNs）上CXCL8及其受体CXCR1、CXCR2的表达。方法：以中性粒细胞分离液分离、纯化PMNs，检测患者血清HBeAg及PMNs内HBV DNA，入选患者依据检测结果进行分组，SABC免疫细胞化学染色法检测各组患者PMNs内CXCL8及其受体CXCR1、CXCR2的表达。结果：SABC免疫细胞化学染色结果显示， CXCL8主要位于PMNs胞浆中，CXCR1、CXCR2多见于胞浆和胞膜上。其中HBeAg （＋）者CXCL8、CXCR1免疫着色较深，而CXCR2免疫着色较浅；PMNs内HBV DNA（＋）者CXCL8、CXCR1免疫着色亦较深，而CXCR2免疫着色亦较浅。患者CXCL8和CXCR1的水平均显著升高，与正常对照相比，差异均有显著性（ P＜0.05），而CXCR2的表达无统计学意义（ P＞0.05）。结论：HBV侵染中性粒细胞后可促进CXCL8分泌，使胞膜CXCR1表达进一步增强。 CXCL8、CXCR1、CXCR2免疫组化染色程度与患者HBeAg表达、HBV DNA载量密切相关。高表达CXCR1的中性粒细胞与CXCL8相互作用，趋化吸引更多PMNs至病灶，参与局部炎性损伤和组织修复。
