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饮用水中镉的石墨炉原子吸收法条件优化
本实验对饮用水中镉的石墨炉原子吸收法进行了条件优化。通过对该方法不同基体改进剂的添加效果、基体改进剂用量、灰化温度、原子化温度等因素的探讨和实验，确定了终优实验条件。在添加3μL 5 g/L硝酸镁基体改进剂、灰化温度800℃、原子化温度1650℃条件下，测定方法的线性、检出限、精密度、准确度和加标回收率。结果表明方法检出限为0.0092μg/L，精密度为4.89%，加标回收率为88.2%～103.3%。该方法检出限低、精密度与准确度良好，适于饮用水中微量镉的测定。
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流式细胞仪细胞分选参数调校方法的研究
目的：探讨 BD FACSAria Ⅲ流式细胞仪进行细胞分选实验快速调校佳仪器运行参数的方法。方法以稀释的 CS&T 质控微球和 Accudrop 液滴延迟测定微球为实验材料，依次使用4种不同大小型号的喷嘴，在相应的鞘液压力下调校主液流和侧液流，测定液滴延迟时间。结果确定了仪器佳分选调校参数，使用70μm，85μm，100μm，130μm 喷嘴测定出的液滴延迟参数分别为47.00、30.00、27.00、16.00。结论按照佳分选调校参数参考值设定仪器，而后根据主侧液流形态和液滴延迟左框进框亮度进行微调，是实现 BD FACSAria Ⅲ流式细胞仪分选条件快速优化的关键。
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丹参SmJAZ1蛋白原核表达及条件优化
目的:在前期克隆丹参SmJAZ1基因的cDNA全长基础上,为研究丹参SmJAZ蛋白的功能,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达丹参SmJAZ1蛋白,并对其表达条件进行优化.方法:利用分子克隆的方法将丹参JAZ1基因构建到原核表达载体pET32a上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行诱导表达.结果:对影响重组蛋白表达的4个因素,即诱导温度、诱导时间、IPTG浓度、及IPTG添加时间进行优化,确定丹参SmJAZ1重组蛋白适表达条件.IPTG浓度对目的蛋白的表达量没有显著影响；随诱导时间和诱导温度增加,SmJAZ蛋白的表达量增加；而IPTG添加时间对蛋白的表达量有明显影响.结论:丹参JAZ1蛋白在30℃温度条件下,重组菌生长2 h(A600 =0.9),加入0.1 mmol·L-1浓度的IPTG,诱导20 h后,表达条件合适.
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金荞麦银纳米粒的制备及其工艺优化研究
该研究以金荞麦提取液为还原剂和稳定剂制备银纳米粒,并通过考察金荞麦粉末提取时间、银纳米粒合成温度、金荞麦提取液加入量、AgNO3溶液的浓度等不同因素,优选金荞麦银纳米粒形成的佳工艺,并采用红外光谱仪(FT-IR)、透射电镜(TEM)、动态激光散射(DLS)、X-射线粉末衍射(XRD)对所制银纳米粒进行结构表征和形态学考察.结果显示,制备银纳米粒佳条件为金荞麦粉末煮沸5 min,提取液(质量浓度0.1 g·mL-1)与1 mmol·L-1 AgNO3体积比1∶10,反应温度25℃,反应时间3.5h.所得银纳米粒形态圆整,分布均匀、性质稳定,平均粒径约(27±2.6) nm,Zeta电位(-34.3 ±3.2)mV.结果表明该研究所建立的以中药提取液制备银纳米粒的绿色合成方法稳定可行.
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酶联免疫斑点法检测抗原特异的CTL免疫应答试验条件的优化
目的探讨影响酶联免疫斑点(ELISPOT)实验特异性及敏感性的因素,优化酶联免疫斑点法检测抗原特异的CTL免疫应答的实验条件.方法HLA-A2阳性正常人的外周血单个核细胞在体外经流感病毒抗原肽诱导1周后,观察不同实验条件对酶联免疫斑点法检测抗原特异的CTL免疫应答的影响.结果CTL诱导时,效应细胞先分离出CD8+T细胞组获得的Flu抗原特异的细胞频数要高于CTL诱导后再分离出CD8+T细胞组(P＜0.05);自体DC(树突状细胞)作APC(抗原提呈细胞)比自体CD8-PBMC作APC,CTL的诱导效率高且特异(P＜0.05);使用细胞因子组合(IL-7+IL-2+IL-6)优于单纯使用IL-2.CTL行ELISPOT检测时,T2-2细胞较T2-1细胞具有更强抗原提呈功能,增加Flu抗原特异的CD8+T细胞频数(P＜0.05).结论优化了酶联免疫斑点法检测抗原特异的CTL免疫应答的试验条件,优化后的方法在临床肿瘤疫苗的研究中具有应用价值.
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新生鼠心脏成纤维细胞原代培养及脂质体转染条件优化的实验研究
目的：探讨新生大鼠心脏成纤维细胞（CFs）的原代培养方法及脂质体转染条件的优化。
方法：酶消化法原代培养CFs，倒置显微镜下观察细胞生长状态，免疫细胞化学染色鉴定CFs，并采用脂质体转染原代CFs，流式细胞术检测转染率。 -
大梯度强磁场环境下细胞培养条件优化
目的 优化大梯度强磁场环境下细胞培养条件,为后续模拟失重实验研究提供更完善的实验平台.方法 通过进行二氧化碳浓度控制单元设计,气体温度湿度调节单元设计,气体循环水浴保温单元,细胞培养三点支撑架设计,配套细胞培养容器设计,优化大梯度强磁场环境下细胞培养条件,并通过实验验证该系统的稳定性和可靠性.结果 与对照组相比,优化后的细胞培养容器细胞形态、面积、增殖均无显著性差异;腔室温度可控制在(37±0.5)℃之间,湿度及二氧化碳浓度可达到细胞培养要求.结论 优化后的系统可满足大梯度强磁场环境下细胞培养条件要求,节约实验成本,提高实验的严谨性.
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三七病程相关蛋白1基因的克隆与表达分析
在生物信息学分析基础上,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从三七中获得病程相关蛋白1(pathogensis-related protein 1,PRI)基因的开放阅读框,命名为PnPR1,测序结果显示该序列长501 bp,编码166个氨基酸,其蛋白质分子质量为18.1 kD.利用NCBI/Blastp和BioEdit软件进行同源性比对显示,PnPR1基因编码蛋白与葡萄、烟草、番茄等高等植物中的PR1蛋白同源性较高,且具有相同的富含半胱氨酸蛋白的保守结构域.将构建的重组载体pET28a(+)-PnPR1在宿主菌Escherichia coli BL21中经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,在不同诱导时间、诱导温度、IPTG诱导浓度和IPTG添加时间下对诱导条件进行优化.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明,PnPR1基因编码蛋白的佳诱导条件为:IPTG终浓度0.4 mmol·L-1、IPTG添加时间为转接后4h、诱导温度28℃、诱导时间20 h.这为蛋白纯化及单克隆抗体的制备奠定了一定的基础.
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苯酚-硫酸法测定甘露聚糖肽口服溶液中多糖含量的条件优化
目的：：优化苯酚-硫酸法测定甘露聚糖肽口服溶液中多糖含量的反应条件。方法：通过单因素和正交试验,研究各因素对实验结果的影响,并对这些因素进行优化和方法学验证。结果：实验结果表明,苯酚浓度3%、硫酸用量5．0 mL,显色时间15 min,显色温度80℃为苯酚-硫酸法测定甘露聚糖肽口服溶液多糖含量的佳条件,在此条件下平均回收率为102．7%,其RSD为1．4%。结论：优化后的方法重复性和准确性均有所提高。
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诱导白木香产生沉香真菌的固体培养条件优化
目的 对诱导白木香产生沉香的3株活性真菌的固体培养条件进行优化,为该类真菌的推广应用提供参考.方法 采用真菌固体培养方法,对影响真菌生长的营养和培养条件等因子进行优化,实验结果采用单因素方差分析法.结果 得到了培养3株活性真菌的佳固体培养基配方,获得了真菌固体生长的适温度、pH值、装料量、基质含水量和光照条件.结论 在实验得到的佳条件下,能够较快的培养出高质量的固体菌种；为3株活性真菌诱导白木香产生沉香的生产推广提供了菌种培养的优化条件.
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重组SRH融合蛋白工程菌发酵的工艺研究
目的 通过对影响表达SRH融合蛋白工程菌发酵的主要因素的研究,建立适宜SRH融合蛋白工程菌的发酵工艺.方法 通过对发酵过程中的pH、溶氧调控、诱导温度、诱导时机及诱导时间进行优化建立SRH蛋白的发酵工艺,利用SDS-PAGE电泳分析表达情况.进一步利用离子交换和凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,并对纯化后目的蛋白的溶栓活性和抗凝活性进行检测.结果 优化后发酵条件为:发酵pH为7.0、溶氧为45％、菌体浓度达到OD600=8时开始诱导,诱导温度为41℃,诱导时间为4.5h.该发酵条件下得菌量为25g/L.SRH蛋白表达量为45％,并且90％以上为可溶性表达,纯化后蛋白纯度达95％以上,纯品SRH蛋白溶栓活性为1.80×104AU/mg,抗凝活性为100AU/mg.结论 建立了SRH融合蛋白工程菌稳定的发酵工艺,该条件下SRH工程菌发酵蛋白表达量较高,多为可溶性表达,且杂蛋白较少,发酵产物具有生物学活性.
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聚乙二醇沉淀联合电化学发光法检测巨泌乳素血症实验条件优化
目的 通过PEG沉淀预处理的实验条件(沉淀时温度,相对离心力和离子强度)优化,使PEG沉淀预处理联合电化学发光检测筛检结果与凝胶层析法检测巨泌乳素血症结果具有可比性.方法 通过同定离心时间,优化离心速度、温度及离子强度,达到优化实验条件的目的.结果 25%PEG 6000 1M PBS沉淀液,选择离心速度为1800g,离心温度18℃,离心时间为10min,其处理后的结果接近凝胶层析法合并电化学发光法测得小分子PRL浓度.结论 优化后的聚乙二醇沉淀联合电化学发光法适合用于巨分子泌乳素血症的筛检.
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制备纳米银的液相还原法的条件优化研究
目的 研究液相还原法制备纳米银粉过程中的反应条件,以制得粒度分布均匀、结晶性能良好的纳米级银粉.方法 以硝酸银为原料,水为反应介质,三乙醇氨为乳化剂,聚乙烯吡咯烷酮为保护剂,甲酸铵作为还原剂,在常温条件下通过改变还原剂的浓度、硝酸银的浓度、保护剂聚乙烯吡咯烷酮与硝酸银的质量比以及产品干燥的方式,以得到佳的制备条件.结果 随着AgNO3浓度的增加,纳米银粒径变化趋势明显;当AgNO3浓度为0.25～0.30mol/L时,产品粒度达小.增加还原剂的浓度,纳米银粒径逐渐变小,在HCOOH浓度为0.70mol/L时,可得到粒径≤10nm的银粉颗粒.PVP与AgNO3质量浓度比在1.5～1.0范围内,可以起到很好的保护作用,得到粒径较小且比较均匀的银粉颗粒.结论 该方法工艺稳定可靠,操作简便,可以制备出分散性好且颗粒大小均匀的纳米银粉.
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离子色谱法测定食品中的亚硝酸盐和硝酸盐的探讨
目的 探讨使用离子色谱法测定食品中的亚硝酸盐和硝酸盐.方法 通过实验分析,确定测定中离子色谱的优化条件.结果 亚硝酸盐精密度为0.42%,加标回收率为96.8%～100.7%;硝酸盐精密度为0.36%,加标回收率98.4%～101.8%.结论 该方法具有选择性好,灵敏度高,准确性高等优点.
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HPLC法测定五淋散中芍药苷的含量
五淋散由黄连、赤芍、地黄、琥珀、地龙5味中药制成,用于湿热引起的尿频、尿急、尿痛等尿路感染症.本品标准尚无含量控制指标.赤芍为处方之臣药,投料量较大,芍药苷为赤芍的主要活性成分,在生药中含量较高,且易溶于水,在水提浸膏制剂中含量较高,并且芍药苷具有血管扩张、抗炎等药理作用,与本品治疗作用一致,故测定其含量,能够控制本品的内在质量.芍药苷含量测定多采用HPLC法[1,2],但存在峰形偏差,方法重现性不够理想的问题.本实验采用的HPLC法测定五淋散中芍药苷的含量,通过色谱条件优化,取得了满意的效果.
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HPLC法测定抗敏胶囊中升麻苷的含量
抗敏胶囊由防风、黄芪、淫羊藿等9味中药经特殊制剂工艺提取后加适量赋形剂制成的胶囊,临床上具抗过敏之功效,作用显著,且疗效持久,用于治疗过敏性鼻炎.防风为方中君药,升麻苷为其主要成分,因制剂成分较多,干扰较大,文献报道的升麻苷的HPLC测定方法[1～3]不适宜本品测定.经色谱条件优化,本实验建立了一种HPLC法测定抗敏胶囊中升麻苷的含量,重现性好,可作为评价防风及其制剂中该成分的指标.
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球面对称设计优选白芍的提取工艺
白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lacttiflora Pall.的干燥根.其味苦、酸、微寒,归肝、脾经.具有平肝止痛,养血调经,敛阴止汗功效,用于头痛眩晕,肋痛,腹痛,四肢痉挛,血虚萎黄,月经不调,自汗,盗汗等[1].芍药苷是自芍的主要有效成分,具有镇静、解痉、抗炎、抗应激性溃疡等功效.白芍中芍药苷的提取工艺目前文献报道多采用水提或者醇提,主要采用正交设计对其工艺参数进行优化.中药提取条件优化常采用试验设计方法有正交设计、因子分析设计、均匀设计等.正交设计仅对已有因素的已有水平进行判断;均匀设计因其试验次数太少,试验精度不够,并且也只能对已有的因素水平作判断;因子分析设计的试验次数太多而费时费力.
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阿基瑞林合成条件的优化
阿基瑞林(Argireline，Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2)，又名乙酰六胜肽-3，又被称为类肉毒杆菌素，是模仿SNAP-25蛋白N端6个氨基酸的寡肽[1-2]。阿基瑞林为高端化妆品常用的原料之一，功效主要是减少由面部表情肌收缩造成的皱纹，对额头或眼睛周围的皱纹有理想的祛除效果[3-4]。另外，它还能促进胶原蛋白的生成，有助于肌肤组织重建。阿基瑞林是一种更安全、更廉价、温和的肉毒杆菌毒素替代品。
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超声波-微波辅助提取构树叶总黄酮的条件优化及其抗肿瘤活性研究
目的 优选构树叶总黄酮的提取工艺条件及构树叶总黄酮抗肿瘤生物活性的研究.方法 通过单因素实验考察超声波时间、超声波温度、超声波功率等级对构树叶总黄酮提取得率的影响.通过紫外分光光度计测定总黄酮含量.利用MTT法检测构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞增殖的影响.通过光学显微镜观察经药物处理48h后人肝癌HepG-2细胞的形态学变化.结果 超声波辅助提取的佳条件:超声波时间40min,超声波功率等级为80%,超声波温度为50°.12mg/ml构树叶总黄酮作用肝癌细胞72小时,抑制率可达64.53%.经倒置显微镜观察,可见肝癌细胞发生凋亡现象.结论 本工艺采用超声法对药材进行微波法提取前处理,可以极大提高构树叶总黄酮的得率,该工艺操作简单,节能环保,可适用于大规模生产;构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞的增殖有抑制作用,并呈现剂量依赖性和时间依赖性.
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金黄色葡萄球菌REP-PCR指纹图谱分型方法优化
目的 优化金黄色葡萄球菌细菌基因组重复序列PCR(REP-PCR)指纹图谱分型方法,并在临床分离株分型研究中应用,为构建金黄色葡萄球菌同源性追踪体系提供依据.方法 试剂盒法提取金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 25923基因组DNA作为模板,根据参考文献设计REP引物,PCR扩增其基因组中靶序列.优化反应体系Mg~(2+)浓度、模板量、引物浓度和退火温度,以得到佳指纹图谱.以优化好的REP-PCR方法对10株金黄色葡萄球菌临床分离株进行分型.结果 PCR反应体系Mg~(2+)浓度2.5 mmol/L,DNA模板量125 ng/25 μL,引物REP1R、REP2浓度各0.6 μmol/L,退火温度40℃时,指纹图谱条带清晰、明亮;10株临床分离株指纹图谱均在0.5～1.0 kb之间出现1条相同条带,其中1～3,4,5,8,9号菌株图谱相同;7和10号菌株除在0.5～1.0 kb出现1条条带外,还在1.0～1.5 kb出现1条条带,在1.5～2.0 kb出现1条条带;6号菌株共产生5条条带,分别出现在0.5～1.0 kb(2条),1.0～1.5 kb(2条)和1.5～2.0 kb(1条).结论 成功建立优化的金黄色葡萄球菌REP-PCR指纹图谱分型方法;10株临床分离株用该法分为3型.
