首页 > 文献资料
-
构树叶总黄酮对人肝癌细胞HepG-2增殖和凋亡的作用及其机制研究
目的:探讨构树叶总黄酮(TFBP)对人肝癌细胞(HepG-2)增殖和凋亡的作用.方法:采用细胞增殖实验(MTT法),取对数生长期HepG-2,随机分为药物组和对照组,用3,6,9,12 g·L-1不同质量浓度构树叶总黄酮作用HepG-2,分别干预24,48,72 h.通过流式细胞仪检测在以上质量浓度下作用细胞48 h后的细胞凋亡率,Western blont法检测以上质量浓度构树叶总黄酮作用细胞48 h后Bcl-2基因、促凋亡基因Bax表达的情况.结果:各质量浓度构树叶总黄酮对HepG-2的生长有显著的抑制作用,呈明显的时间和剂量依赖性,经不同质量浓度的构树叶总黄酮作用48 h后HepG-2凋亡率显著增加,药物组与对照组比较为(0.478 ±0.085 vs 0.498 ±0.014; 0.354 ±0.004 vs 0.498 ±0.014;0.218 ±0.075 vs 0.498 ±0.014)有显著性差异,P＜0.05,抑癌基因Bcl-2表达量呈逐渐下降的趋势,促凋亡基因Bax表达量随着质量浓度的升高表达量呈现上升趋势.结论:构树叶总黄酮可以有效的抑制HepG-2的生长,诱导细胞凋亡,其诱导该细胞凋亡的作用可能是通过下调抑癌基因Bcl-2的表达,可为肝癌的生物学治疗提供新的方法.
-
构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞增殖及其细胞周期的影响
目的:研究构树叶总黄酮(total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP)对人肝癌细胞HepG-2的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制.方法:取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,药物组用3,6,9,12 g·L-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细胞24,48,72 h后,采用MTT法检测细胞生长抑制率;Hoechst 33342荧光染色法荧光显微镜观察细胞的形态变化并用流式细胞仪检测细胞的周期及细胞凋亡率.结果:MTT结果显示,各质量浓度3,6,9,12 g·L-1的TFBP对HepG-2有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系,3,6,9,12 g·L-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细48 h后,细胞增殖抑制率分别为20.2％,29.44％,39.21％,43.96％;9 g·L-1的TFBP作用HepG-2细胞72 h后,细胞增殖抑制率可达52.46％,与对照组具有显著性差异(P ＜0.05);Hoechst 33342荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等典型细胞凋亡特征及凋亡小体;流式细胞仪结果显示,随着TFBP作用浓度的增加,加药组细胞凋亡率加药组凋亡率与对照组相,有显著差异(P＜0.01),G0/G1期细胞逐渐减少,G2/M期细胞数逐渐增多,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05),细胞周期被阻滞在G2/M期.结论:TFBP在体外对肝癌细胞HepG-2有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用,其抑制机制可能和诱导细胞凋亡与阻滞细胞周期有关.
-
构树叶总黄酮诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡机制探讨
目的:研究构树叶总黄酮(total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP)诱导肝癌HepG-2细胞凋亡的机制.方法:采用MTT法检测浓度分别为3、6、9和12 g/L TFBP作用于HepG-2细胞24、48和72 h后对细胞生长的影响;Hoechst33342荧光染色法观察3、6、9和12 g/L TFBP作用于HepG-2细胞48 h后细胞形态学的变化;免疫细胞化学检测3、6、9和12 g/L TFBP作用于HepG-2细胞48 h后凋亡相关基因Bcl-2及Bax蛋白表达;比色法检测3、6、9和12 g/L TFBP作用于HepG-2细胞48h后Caspase-3活性.结果:随着药物浓度的增大,TFBP抑制HepG-2细胞增殖的作用逐渐增强,呈剂量依赖性,在3、6、9和12 g/L的TFBP作用于HepG-2细胞24 h后,HepG-2细胞增殖抑制率分别为7.63％、11.86％、19.02％和21.81％,F=5.16,P=0.034;48 h后分别为20.20％、29.44％、39.21％和43.96％,F=11.28,P=0.003;72 h后分别为27.24％、34.70％、52.46％和64.72％,F=86.78,P＜0.001.Hoechst33342荧光染色法可见,随着药物浓度的增大,细胞的生长变慢,胞质变疏松,细胞核皱缩,深染,出现典型的细胞凋亡形态.免疫细胞化学检测可见,经不同浓度TFBP处理HepG-2细胞48 h后,HepG-2细胞Bcl-2蛋白表达随着浓度的增加而逐渐变浅,Bax蛋白表达随着浓度的增加而逐渐变深,Bcl和Bax蛋白的阳性表达率与对照组比较差异均有统计学意义,F值分别为6.563和30.883,P值分别为0.012和0.001.比色法检测Caspase-3活性显示,对照组与3、6、9和12 g/L的TFBP对HepG-2细胞作用48 h后,Caspase-3酶活性分别为(1.38±2.13)、(3.58±2.21)、(4.95±3.61)、(5.25±1.41)和(5.75±2.24) U/mg,随着TFBP浓度的增加,Caspase-3酶活性显著增高,当TFBP浓度为6、9和12 g/L时,各实验组与对照组比较差异有统计学意义,F=5.42,P=0.003.结论:TFBP在体外对肝癌HepG-2细胞有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用.其诱导凋亡的机制可能与其下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白表达以及增强Caspase-3的活性有关.
-
超声波-微波辅助提取构树叶总黄酮的条件优化及其抗肿瘤活性研究
目的 优选构树叶总黄酮的提取工艺条件及构树叶总黄酮抗肿瘤生物活性的研究.方法 通过单因素实验考察超声波时间、超声波温度、超声波功率等级对构树叶总黄酮提取得率的影响.通过紫外分光光度计测定总黄酮含量.利用MTT法检测构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞增殖的影响.通过光学显微镜观察经药物处理48h后人肝癌HepG-2细胞的形态学变化.结果 超声波辅助提取的佳条件:超声波时间40min,超声波功率等级为80%,超声波温度为50°.12mg/ml构树叶总黄酮作用肝癌细胞72小时,抑制率可达64.53%.经倒置显微镜观察,可见肝癌细胞发生凋亡现象.结论 本工艺采用超声法对药材进行微波法提取前处理,可以极大提高构树叶总黄酮的得率,该工艺操作简单,节能环保,可适用于大规模生产;构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞的增殖有抑制作用,并呈现剂量依赖性和时间依赖性.
-
构树叶总黄酮提取物诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及机制
目的:研究构树叶总黄酮(total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP)对人肝癌细胞HepG2的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制.方法:采用MTT法检测细胞生长抑制率;Hoechst 33342荧光染色法荧光显微镜观察细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;RT-PCR法检测基因Bcl-2、Bax mRNA的表达;免疫细胞化学SP法检测基因Bcl-2 、Bax蛋白表达.结果:MTT结果显示,TFBP对HepG2有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系;Hoechst 33342荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等细胞凋亡特征;流式细胞仪结果显示,细胞出现凋亡形态改变,且细胞被阻滞于G2/M期,随浓度增加,凋亡率逐渐增加;RT-PCR和SP结果显示,随着TFBP浓度增加Bcl-2 mRNA和蛋白表达逐渐减弱,Bax mRNA和蛋白的表达逐渐增强.结论:TFBP在体外对肝癌细胞HepG2有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用.其诱导凋亡的机制可能与其下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达有关.
