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全氟辛酸对HepG2细胞的遗传毒性及氧化性DNA损伤
目的探讨全氟辛酸(PFOA)对HepG2细胞的遗传毒性及氧化性DNA损伤作用.方法 PFOA作用HepG2细胞1 h后,用单细胞凝胶电泳试验测定DNA链断裂情况;PFOA作用HepG2细胞24h后,测定微核率;PFOA作用HepG2细胞3 h后,用免疫组化方法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的表达水平.
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垂盆草醇提物抑制HepG2细胞STAT-3信号通路诱导细胞凋亡的研究
目的:研究垂盆草醇提物对STAT-3信号通路的影响,及其诱导细胞凋亡的分子机制.方法:MTT法检测垂盆草醇提物对HepG2细胞增殖的影响;流式细胞术分析结合FITC-Annexin V/PI双标记检测对肝癌细胞凋亡的影响,免疫印迹试验检测细胞凋亡Caspase-3,Caspase-9,PARP,P-STAT-3(Tyr705),STAT-3,Bcl-2,Mcl-1相关蛋白表达水平.结果:垂盆草醇提物可明显抑制HepG2细胞的增殖,诱导HepG2细胞凋亡,且抑制作用呈剂量依赖效应.垂盆草醇提物作用后,抑制STAT-3信号转导通路,下调Mcl-1和Bcl-2的表达,引起凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-9的降解/活化及PARP的降解,并呈剂量依赖效应.结论:垂盆草醇提物通过抑制STAT-3信号转导通路和Mcl-1和Bel-2的表达,进而抑制HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡.
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肝衰竭患者血浆对HepG2细胞增殖的抑制及表皮生长因子的调控作用
目的:探讨肝衰竭患者血浆(liver failure plasma,LFP)抑制HepG2细胞生长、增殖的机制及表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对其抑制作用的调控作用.方法:通过用50％LFP与HepG2细胞共同培养(肝衰竭组),以相同浓度正常人血浆(正常对照组)作对照.采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)、Hoechst法分别观察不同时间点细胞增殖率及凋亡率,并用Western blotting法检测细胞周期蛋白Cyclin D1、细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclindependent kinase 4,CDK4)表达.进一步观察不同浓度EGF对LFP培养的HepG2细胞生长及增殖的刺激作用.结果:50％LFP对HepG2细胞生长及增殖有明显的抑制作用,且呈时间依赖性.EGF对正常对照组HepG2细胞的生长及增殖有明显促进作用,但仅大剂量EGF对肝衰竭组HepG2细胞生长和增殖有一过性刺激作用.与EGF刺激正常对照组比较,肝衰竭组各时间点细胞增殖仍受到明显抑制.LFP与HepG2细胞培养后,细胞凋亡率无明显增加(P＞0.05).随着作用时间的延长,LFP抑制HepG2细胞内Cyclin D1、CDK4的表达.结论:LFP对HepG2细胞生长及增殖具有较强的抑制作用,但并不明显诱导其凋亡.大剂量EGF对LFP培养的HepG2细胞增殖虽有一过性刺激作用,但并不能逆转其抑制作用.LFP抑制HepG2细胞生长和增殖的机制可能与其抑制细胞内Cyclin D1、CDK4的表达有关.
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乙肝病毒相关肝细胞肝癌与IL-32表达相关性研究
目的 肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的恶性肿瘤之一,白细胞介素(interleukin,IL)-32是新发现的一种细胞因子,在HCC中的研究较少.本研究探讨其在乙肝病毒(heptitis B virus,HBV)相关HCC患者外周血、肝组织以及体外培养的HepG2、HepG2 2.15细胞株中表达水平的变化.方法 选择2013-01-01-2016-06-30在南通市第三人民医院住院的HBV相关肝硬化(liver cirrhosis,LC)27例和HBV-HCC 29例作为研究对象,选择体检健康者17名作为对照组,采用酶联免疫吸附方法检测外周血IL-32.选择外科手术切除HBV-HCC、癌旁LC标本20份,采用免疫组织化学的方法检测肝组织中IL-32表达情况.对HepG2、HepG2 2.15细胞进行培养,72 h后采集上清液,采用蛋白印迹法检测IL-32.结果 HBV-HCC患者外周血IL-32表达水平为(479.46±204.46) ng/L,高于HBV-LC患者(333.61±162.76) ng/L;HBV-LC患者高于健康对照组为(75.58±9.90) ng/L,P<0.005;HBV-HCC癌组织中IL-32表达水平高于癌旁LC组织,Z=2.725,P=0.006;HepG2细胞株与HepG2.2.15细胞株培养72 h后,上清液中未能检测到IL-32.结论 IL-32在HBV相关HCC外周血、HCC癌组织中均处于过度表达状态,在HBV-HCC的发生发展过程中起到一定的作用.
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沙利度胺联合表阿霉素抗人肝癌细胞HepG2体外增殖的影响
目的 探讨沙利度胺联合表阿霉素抗人肝癌细胞HepG2体外增殖的影响,为肝癌治疗提供依据.方法 采用人肝癌细胞株HepG2作为研究对象,共设4组:空白对照组、表阿霉素组(1.0 mg/L)、沙利度胺梯度组(50 μg/ml、100μg/ml、200 μg/ml和400 μg/ml)和联合组(沙利度胺200 μg/ml+表阿霉素1.0 mg/L),观察4组用药方案12h、24h、48h和72h时对HepG2细胞的影响,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖抑制效果,采用流式细胞术检查细胞凋亡情况.结果 MTT结果显示,沙利度胺能够有效的抑制HepG2细胞的增殖,且具有剂量和时间依赖性.作用时间为12h,24h和48h时,沙利度胺浓度为200 μg/ml的抑制率高,与其他各浓度比较,差异有统计学意义(P＜0.05).作用时间为48h时,除50μg/ml外的其他浓度的沙利度胺的抑制率高,与其他各时间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).沙利度胺200μg/ml浓度组和联合组各时间点对HepG2细胞的抑制率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).各时间点时,联合组的抑制率高于沙利度胺200μg/ml浓度组和表阿霉素组,差异有统计学意义(P＜0.05).沙利度胺200μg/ml浓度组和联合组的抑制率,48h时高,与其他各时间点比较,差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检验结果显示,作用时间为12h和24h时,沙利度胺梯度组对HepG2细胞凋亡指数(AI)影响的比较,差异有统计学意义(P＜0.05).沙利度胺浓度为50μg/ml、100μg/ml和200μg/ml时,HepG2细胞凋亡指数比较,差异有统计学意义(P＜0.05).各时间点,表阿霉素组、沙利度胺梯度组和联合组对HepG2细胞AI的比较,且联合组的抑制率显著高于其他各组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 沙利度胺具有体外抑制人肝癌细胞株HepG2增殖和促凋亡作用,具有剂量和时间依赖性,可使用沙利度胺联合表阿霉素治疗肝癌.
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肝癌组织和肝癌HepG2、SMCC-7721细胞株β-catenin的表达
目的 研究肝癌组织和肝癌HepG2、SMCC-7721细胞株β-catenin表达及分布情况.方法 收集20例肝癌组织和3例正常肝组织标本,利用免疫组织化学、免疫细胞化学和Western blot法检测肝癌组织和肝癌HepG2、SMCC-7721细胞株β-catenin的表达及分布特征.结果 免疫组化结果显示,β-catenin在肝癌细胞膜的分布不均匀、不连续,甚至缺如,在低分化肝癌细胞膜的表达较高分化癌少,而在细胞质呈高表达.有18例(90%)肝癌细胞膜β-catenin表达量明显减少,10例(50%)在胞膜的分布不连续或缺如;17例(85%)细胞质有明显的β-catenin积聚,而且分布不均匀.随肝癌分化程度不同,β-catenin表达也有明显差异,7例(77.8%)高分化肝癌细胞膜β-catenin分布较为清楚连续,细胞质表达量较多,分布均匀;4例(80%)低分化肝癌细胞膜β-catenin表达较少,细胞质β-catenin分布不均匀,呈点状积聚;中度分化的肝癌细胞膜和细胞质内β-catenin分布界于高低分化之间,5例(83.3%)细胞质β-catenin表达阳性.免疫细胞化学检测显示HepG2、SMCC-7721细胞株胞膜β-catenin表达不明显,胞质及胞核则有大量β-catenin积聚.Western blot检测显示肝癌组织和HepG2、SMCC-7721细胞株的胞质和胞核均有β-catenin表达,且在胞核内积聚.结论 肝癌组织和肝癌细胞株胞膜β-catenin表达较少,而胞质β-catenin分布较多,胞核β-catenin积聚明显,其分布与肝癌分化程度相关.
关键词： 癌 肝细胞 β-catenin HepG2细胞株 SMCC-7721细胞株 -
痰热清注射液抑制HepG2细胞的研究
目的 研究痰热清注射液对HepG2肝癌细胞株的抑制及对细胞周期的影响.方法 采用MTT法检测痰热清注射液对HepG2肝癌细胞株的抑制,采用凯基细胞周期法检测该药对细胞周期的影响.结果 痰热清注射液呈剂量依赖性抑制HepG2细胞,使细胞阻滞于G0/G1期,细胞DNA合成减少.结论 痰热清注射液对肝癌细胞具有一定抑制作用,可能与使细胞阻滞于休眠期或DNA合成前期,导致细胞DNA合成减少有关.
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咖啡酸酯类衍生物的合成及其生物活性研究
目的 设计并合成天然产物咖啡酸的酯类衍生物,并对其进行体外抗脂质代谢紊乱活性的研究.方法 以咖啡酸为原料,通过2条反应路线制得目标化合物,利用HepG2细胞株评价该类化合物的调血脂活性.结果 设计并合成10个咖啡酸酯类衍生物C1～C10,均经波谱技术确证结构.药理结果表明,10个化合物对HepG2细胞呈现不同程度的调血脂活性,其中衍生物C3和C5的调血脂活性明显优于先导物咖啡酸和阳性药辛伐他汀.结论 化合物C5为未见文献报道的咖啡酸类新化合物,初步总结了咖啡酸酯类衍生物调血脂活性方面的构效关系.
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siRNA沉默STAT3基因对肝癌细胞株HepG2中STAT3及其下游相关基因表达的影响
[目的]探讨小分子干扰RNA片段(small interfering RNA,siRNA)沉默信号转导与转录活化因3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)基因对肝癌细胞株HepG2生长、凋亡及STAT3与其下游基因表达的影响.[方法]构建STAT3-siRNA,并将其稳定转染到肝癌细胞株HepG2中,建立HepG2/STAT3-siR NA细胞株.MTT比色法检测转染对细胞增殖的影响;RT-PCR和Western blotting分别检测STAT3基因及其下游细胞周期蛋白D1 (cyclinD1)、存活蛋白(survivin)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因mRNA和蛋白表达水平;Hochest33342荧光染色法检测细胞凋亡.[结果]MTT结果显示,转染后HepG2细胞存活率显著降低(t=4.262,P=0.001;t=25.330,P=0.000; t=50.288,P=0.000).RT-PCR和Western blotting结果显示,转染后HepG2细胞STAT3、cyclinD1、survivin、VEGF基因mRNA和蛋白表达水平显著降低(F=770.918,P=0.000;F=940.630,P=0.000;F=723.783,P=0.000;F=582.362,P=0.000)(F=496.363,P=0.000;F=484.556,P=0.000;F=468.469,P=0.000;F=193.845,P=0.000).Hochest33342荧光染色结果显示,转染后细胞凋亡显著增加(F=3311.491,P=0.000).[结论]通过RNA干扰技术沉默STAT3基因可有效下调肝癌细胞HepG2中STAT3基因及cyclinD1、survivin、VEGF基因表达并抑制肝癌细胞存活增加细胞凋亡,STAT3-siRNA有望成为治疗原发性肝癌的新技术.
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伊立替康及联合5-氟尿嘧啶、顺铂对人肝癌细胞株的细胞毒作用实验研究
[目的]探讨伊立替康(CPT-11)及联合5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)对人肝癌细胞株的细胞毒性作用.[方法]利用MTT比色法检测CPT-11,5-FU,DDP 3种药物时人肝癌HepG2细胞株的抑制率,进一步测定3种药物单药及联合用药对细胞生长抑制的情况并进行比较.[结果]不同浓度CPT-11,5-FU,DDP作用细胞后,细胞生长受到不同程度的抑制,这一抑制作用随药物浓度的升高而增强(P＜0.01),单药对肝癌细胞株抑制作用强的为CPT-11,其次为DDP,5-FU(三药作用于相同起始浓度的肝癌细胞株48、72、96、120 h后细胞数量分别为4.70±0.25、12.71±0.23、20.30±1.59、24.20±2.31;6.50±0.81、16.25±0.72、24.60±0.65、31.30±2.31:9.50±0.06、17.75±0.19、30.00±0.41、38.40±1.01;单位为1×104个/孔,与对照组比较P＜0.01).联合用药时抑制作用强的为CPT-11、DDP、5-FU联合用药组,后依次为CPT-11、DDP联合、CPT-11、5-FU联合、5-FU、DDP联合(四组药物作用于相同起始浓度的肝癌细胞株48、72、96、120 h后细胞数量分别为6.30±0.79、9.50±0.66、14.50±0.03、21.40±0.66;6.60±0.54、12.20±0.71、20.90±0.45、28.80±0.36:9.00±0.61、16.40±0.29、30.40±0.37、37.30±0.25;12.00±0.02、18.80±0.39、30.70±0.07、35.40±0.08;单位为1×104个/孔,与对照组比较P＜0.01).[结论]CPT-11对肝癌细胞株具有一定的细胞毒性作用,并强于目前肝癌临床常规用药5-FU、DDP,CPT-11可与DDP、5-FU联合应用于原发性肝癌的治疗.
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登革病毒感染HepG2-严重联合免疫缺陷小鼠模型的建立
缺乏合适的动物模型严重限制了登革病毒(DENV)致病机制研究的进展.本研究旨在构建DENV感染小鼠模型,为阐明其致病机制提供实验材料.首先在严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠腹腔内接种人肝癌细胞株HepG2,构建人鼠嵌合体动物模型；移植后10d腹腔接种DENV,通过检测病毒在体内分布及主要器官的组织学改变,评价该动物模型的实用价值.结果显示,在SCID小鼠成功移植HepG2并感染DENV后,出现病毒血症及主要器官严重损伤等现象,但无后肢麻痹等人类登革热无关症状.本研究成功构建了HepG2-SCID人鼠嵌合模型,该模型能支持DENV复制,并表现出部分人类DENV感染的临床症状,为研究DENV的致病机制提供了有价值的实验材料.
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抗肿瘤血管生成药bevacizumab对VEGF促人肝癌细胞株HepG2增殖的阻断作用
目的:观察bevacizumab对肝癌细胞株HepG2增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:应用免疫细胞化学法和RT-PCR分别从蛋白和基因水平检测肝癌细胞株HepG2中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1、KDR的表达;ELISA检测HepG2培养上清液中VEGF蛋白的浓度;人重组VEGF(rhVEGF)和bevacizumab分别处理HepG2细胞后,MTT法检测细胞增殖活性,应用RT-PCR和Western印迹分别从基因和蛋白水平检测VEGF表达量的变化.结果:HepG2细胞中VEGF、Flt-1和KDR蛋白均呈阳性表达.rhVEGF可促进HepG2细胞的增殖,在0~100 ng/ml区间其促进增殖的作用呈剂量依赖性;而bevacizumab可抑制HepG2细胞的增殖,浓度为0.1、1、10、20 μg/ml时细胞增殖抑制率分别为(8.76%±1.15)%、(26.83±1.20)%、(31.87±1.30)%、(28.20±1.28)%.rhVEGF可促进HepG2细胞中VEGF的表达,而bevacizumab能抑制VEGF的表达.结论:Bevacizumab可能通过阻断VEGF的促增殖作用而抑制HepG2细胞增殖.
关键词： 肝细胞癌 HepG2细胞株 bevacizumab 血管内皮生长因子类 -
顺铂对肝癌细胞株HepG2增殖和SATB1表达的影响
目的:观察特异AT序列结合蛋白1(special AT-rich sequence-binding protein 1,SATB1)在不同肝癌细胞株中的表达情况,并探讨顺铂对肝癌细胞株HepG2的细胞形态及SATB1表达的影响.方法:半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HepG2、BEL-7402、SMMC-7721三种肝癌细胞株中SATB1 mRNA的表达情况;HepG2细胞株中加入终浓度为2.5、5.0和10.0 μg/ml顺铂培养24 h,倒置显微镜下观察细胞形态变化.结果:SATB1在肝癌细胞株BEL-7402、SMMC-7721、HepG2中均有表达,差异无统计学意义(P＞0.05).HepG2细胞与顺铂共培养24 h后,倒置显微镜下可见细胞形态明显改变,细胞数减少,损伤、死亡的细胞增多.SATB1 mRNA的表达随着顺铂浓度的增加而减少,其中5.0、10.0 μg/ml顺铂组SATB1 mRNA的表达量与对照组差异均有统计学意义(P<0.05).结论:SATB1在三种肝癌细胞株中均有表达,顺铂可抑制HepG2细胞增殖和SATB1的表达,从而达到抑制肝癌细胞生长的目的.
关键词： 肝肿瘤 特异AT序列结合蛋白1 HepG2细胞株 顺铂 -
L-选择素在肝癌细胞株HepG2中的表达
目的 观察L-选择素在人正常肝细胞株(L-02)和人肝癌细胞株(HepG2)中的表达.方法 应用RT-PCR法检测肝癌细胞株HepG2、正常肝细胞株L-02中L-选择素mRNA表达情况;应用流式细胞术检测HepG2细胞、L-02细胞中L-选择素的蛋白表达.结果 L-选择素mRNA在HepG2细胞中有表达,而在正常肝细胞株L-02细胞中无表达;HepG2细胞L-选择素的表达量为(10.09±0.51)%,而在L-02细胞中则无表达.结论 L-选择素在HepG2细胞中有表达而在L-02细胞中不表达.
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熊果酸对HepG2增殖和凋亡的影响及部分机制研究
目的:观察熊果酸对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其部分机制的研究.方法:将不同浓度熊果酸体外培养人肝癌HepG2细胞,通过MTT法检测熊果酸对细胞增殖抑制的情况.利用流式细胞检测术观察熊果酸对细胞凋亡及细胞周期的影响.同时利用Western blot法检测不同浓度熊果酸干预后人肝癌HepG2细胞pERK1/2蛋白、Cyclin D1蛋白的表达情况.结果:不同浓度熊果酸对人肝癌HepG2细胞的增殖均有抑制效应,并呈剂量、时间依赖性(P＜0.05);60 u mol/L熊果酸作用于人肝癌细胞株HepG2 72 h后达到大细胞凋亡率(78.723±3.623)％.熊果酸可明显增加G0/G1期的细胞含量,诱导人肝癌细胞株HepG2的凋亡.熊果酸可抑制pERK1/2蛋白、Cyclin D1蛋白的表达,并随着浓度、时间逐渐上调抑制作用更加明显.结论:熊果酸可抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,阻滞细胞期于GJG1期,促进癌细胞凋亡,这一过程可能与下调细胞pERK1/2蛋白、Cyclin D1蛋白的表达有关.
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人肝脏胶原样凝集素1在肝癌细胞株HepG2内的定位及其功能探讨
目的 观察人肝脏胶原样凝集素1(CL-L1)在肝癌细胞株HepG2内的定位及其功能.方法 利用pcDNA3.1/myc-his和pEGFP-N1载体将CL-L1基因转染HepG2细胞,通过免疫荧光标记技术及激光共聚焦显微镜观察CL-L1在HepG2细胞内的定位及HepG2细胞的克隆形成能力.结果 CL-L1主要定位于HepG2细胞的细胞质基质中,高尔基体、内质网和细胞核中不存在CL-L1.CL-L1基因过表达可引起HepG2细胞克隆形成能力的明显下降.结论 CL-L1定位于HepG2细胞的细胞质基质,可能是肝癌相关抑癌基因.
关键词： 人肝脏胶原样凝集素1 肝肿瘤 肝癌 HepG2细胞株 克隆形成 -
羽扇豆醇Lupeol通过Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制肝癌细胞增殖的机制
目的 探讨羽扇豆醇Lupeol通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制肝癌细胞增殖的作用机制.方法 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法及碘化丙锭(PI)单染法检测Lupeol对肝癌细胞的生长抑制作用及细胞周期的影响;以荧光素酶TOPflash/FOPflash报告系统检测Lupeol对HepG2细胞中Wnt信号通路的影响;Western blot法检测Lupeol对HepG2细胞中β-catenin蛋白表达的影响;荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Lupeol处理后c-Myc及细胞周期素D1(Cyclin D1)的mRNA表达水平;运用pGL3-Basic荧光素酶报告系统研究Lupeol对Cyclin D1启动子活性的影响.结果 Lupeol作用48h后,对HepG2细胞具有显著的抑制作用[细胞半数致死量半数抑制剂量(IC50)为(57.2±5.0) μmol/L].Lupeol处理HepG2细胞24、48 h使S期的细胞分布百分比上升至27％及42％;Top/Fop flash荧光素酶实验显示Lupeol使HepG2细胞中T细胞因子/淋巴增强因子(TCF/LEF)经典Wnt信号通路关键蛋白β-catenin介导的转录活性降低80％,并使细胞内累积的β-catenin的蛋白表达下调约30％,并减少了c-Myc及Cyclin D1的mRNA表达;同时其作用于Cyclin D1启动子使Cyclin D1的转录激活降低了3倍.结论 Lupeol可作用于Wnt/β-catenin信号通路进而抑制HepG2细胞增殖并呈现S期阻滞效应,其机制可能与减少β-catenin在细胞内累积及降低c-Myc与Cyclin D1的表达有关.
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构树叶总黄酮提取物诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及机制
目的:研究构树叶总黄酮(total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP)对人肝癌细胞HepG2的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制.方法:采用MTT法检测细胞生长抑制率;Hoechst 33342荧光染色法荧光显微镜观察细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;RT-PCR法检测基因Bcl-2、Bax mRNA的表达;免疫细胞化学SP法检测基因Bcl-2 、Bax蛋白表达.结果:MTT结果显示,TFBP对HepG2有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系;Hoechst 33342荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等细胞凋亡特征;流式细胞仪结果显示,细胞出现凋亡形态改变,且细胞被阻滞于G2/M期,随浓度增加,凋亡率逐渐增加;RT-PCR和SP结果显示,随着TFBP浓度增加Bcl-2 mRNA和蛋白表达逐渐减弱,Bax mRNA和蛋白的表达逐渐增强.结论:TFBP在体外对肝癌细胞HepG2有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用.其诱导凋亡的机制可能与其下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达有关.
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利用体外合成mRNA方法研究Betatrophin对糖代谢关键基因表达的影响
目的:利用体外合成mRNA的方法研究新基因Betatrophin在HepG2细胞中对糖代谢关键基因表达的影响.方法:以合成Betatrophin mRNA的质粒为模板,体外合成Betatrophin mRNA转染入HepG2细胞,利用免疫荧光和Western blot检测Betatrophin mRNA在细胞内Betatrophin蛋白过表达情况,再利用qPCR和Western blot检测Betatrophin过表达对糖代谢关键基因表达影响.结果:成功构建Betatrophin mRNA合成载体,体外合成的Betatro-phin mRNA可高效转染到HepG2细胞株中并正确表达Betatrophin蛋白,高表达的Betatrophin可上调糖代谢关键基因Glut2表达.结论:本实验初步证实Betatrophin可能是通过调控Glut2表达来影响糖代谢,为进一步研究Betatro-phin对调控糖代谢的分子作用机制打下基础.
关键词： Betatrophin HepG2细胞株 糖代谢 GLUT2 -
TALEN介导的Betatrophin敲除HepG2细胞株的建立
目的:构建新基因Betatrophin敲除HepG2细胞株,为研究该基因功能提供模型细胞.方法:构建的Betatrophin TALEN质粒转入HepG2细胞,通过T7E1酶切确定打靶效率高达50％以上,并通过测序筛选出Betatrophin双基因敲除的单克隆细胞,Western blot进一步证实Betatrophin基因表达完全沉默.结果:通过TALEN打靶获得了Betatrophin双基因敲除的HepG2细胞株.结论:Betatrophin双基因敲除HepG2细胞株的建立为后期进一步研究Betatrophin在肝细胞中调控糖代谢和改善胰岛素抵抗作用机制奠定基础.
关键词： TALEN Betatrophin HepG2细胞株 基因打靶
