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青蒿琥酯通过诱导凋亡发挥抗THP-1细胞增殖作用
目的:了解青蒿琥酯(artesunate,ART)是否能抑制THP-1细胞的增殖,并探讨其相关的抗白血病的作用机制.方法:分别用5种浓度的青蒿琥酯处理THP-1细胞24、48和72 h,采用CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot方法检测STAT3、Caspase3和Caspase8蛋白表达水平的变化.结果:与对照组相比,ART能明显抑制THP-1细胞的增殖,其效应呈剂量依赖性(r=0.9829,P＜0.05);流式细胞术实验结果表明,ART能显著增加THP-1细胞的凋亡,且ART处理THP-1细胞后STAT3蛋白表达显著下降(P＜0.01),同时Caspase3及裂解的Caspase3和Caspase8表达均增加(P＜0.01).结论:青蒿琥酯能抑制THP-1细胞的生长,可能与下调STAT3蛋白的表达,并同时激活Capase3和Caspase8有关.
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STAT3基因在急性髓系白血病中的表达及临床意义
目的:探讨STAT3基因在初诊急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达及其与临床特征的相关性.方法:采用实时荧光定量PCR检测38例AML患者骨髓中STAT3 mRNA表达水平,分析其与临床特征及预后的相关性;利用Western blot检测AML患者骨髓中STAT3蛋白表达水平.选择15例正常人作为对照组.结果 在mRNA水平上,AML组的STAT3表达水平明显高于正常对照组(P＜0.05);AML组的STAT3表达水平与危险程度呈正相关(P=0.01,r=0.592),高危组的STAT3表达水平明显高于标危组及对照组,其差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.01),其余各组间差异无统计学意义(P＞0.05);M5组STAT3表达水平显著高于对照组,且有统计学差异(P=0.01);M2与M5及对照组之间STAT3表达水平无统计学差异(P=1,P=0.066).STAT3低表达组患者的中位生存时间长于高表达组,但其差异无统计学意义(P=0.146).在蛋白水平上,AML组STAT3表达水平高于对照组(P=0.017).结论:STAT3基因在AML患者中存在高表达,且与患者免疫分型、危险度具有相关性.
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骨髓增殖性肿瘤中STAT3基因的变异及其意义
目的:检测骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者STAT3基因的突变和单核苷酸多态性,分析其与骨髓增殖性肿瘤各亚型之间的关系.方法:选取147例MPN患者,包括真性红细胞增多症(PV) 28例,原发性血小板增多症(ET) 46例,原发性骨髓纤维化(PMF) 10例及慢性髓系白血病(CML) 63例.以88名健康人为正常对照.提取所有病例骨髓或外周血的DNA,采用位点特异性PCR检测JAK2V617F基因突变;用PCR扩增STAT3基因23个外显子,测序分析STAT3基因的突变及Rs2293152的单核苷酸多态性.结果:8例CML患者出现STAT3基因突变,且均为新发突变,突变率12.7％,其中3例为错义突变(S629T),5例为同义突变(Q469Q 3例、G618G 2例),其中1例同时有S629T及G618G 2个位点的突变;正常对照组无突变.Rs2293152检测显示,CML组G等位基因均明显高于正常对照、PV、ET、PMF组(P＜0.01),提示携带G等位基因的患者可能更容易发生CML;PV、ET及PMF组C等位基因均明显高于CML组(P＜0.05),提示携带C等位基因的患者可能更容易发生PV、ET及PMF;JAK2V617F阴性组G等位基因较正常对照组及JAK2V617F阳性组明显降低(P＜0.01),提示携带Rs2293152G等位基因可能是JAK2 V617F突变的保护性因子.结论:在MPN患者中,STAT3基因不稳定,容易发生突变,其Rs2293152位点上不同的等位基因与骨髓增殖性肿瘤中的不同亚型有关,与JAK2V617F阴性的MPN有关.
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STAT3和胃癌的研究进展
人类STAT3基因定位于第17号染色体(q21.31),STAT3蛋白是信号转导子与转录激活子家族(signal transducers and activators of transcription ,STATs)的重要成员.近年来,STAT3与胃癌(gastric cancer,GC)关系引起人们的广泛关注,现就其研究进展作一综述.一、STAT3概述
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siRNA沉默STAT3基因对人肝癌细胞的抑制及对相关生长调控基因的调节
目的: 探讨RNA干扰技术沉默STAT3基因表达对人肝癌细胞的抑制作用及对相关生长调控基因的调节.方法:构建pSilencer 3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒, 转染人肝癌细胞株SMMC 7721, 采用MTT法观察重组质粒对肝癌细胞的生长抑制, RT-PCR和Western blot及免疫组化法分别观察STAT3基因和蛋白水平的变化, 同时检测 survivin, c-myc, VEGF, p53, caspase3生长调控基因的mRNA, 并用流式细胞技术(FCM)及AO/EB染色方法观察细胞凋亡.结果: pSilencer 3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒对肝癌细胞的生长有抑制作用, 实验组48 h和72 h抑制率分别为59.32%, 76.49%, 与空白组及阴性组细胞相比有显著性差异(P<0.01);在重组质粒组, STAT3基因mRNA及蛋白水平表达降低, surviving, VEGF的mRNA表达下调, p53, caspase3的mRNA表达上调(P<0.01), c-myc的mRNA表达却无明显改变;重组质粒可诱导SMMC 7721细胞凋亡, 凋亡率达21.6%(P<0.01), 细胞周期分析显示细胞阻滞于G2期.结论:pSilencer 3.0-H1-STAT3-siRNA可能通过下调基因survivin和VEGF mRNA表达, 上调p53和caspase3 mRNA表达来抑制STAT3基因在人肝癌细胞中的表达.
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脑胶质瘤治疗新策略——STAT3 RNA干扰结合传统放疗
STAT3基因是近年来发现的凋亡抑制基因,具有抑制凋亡和参与细胞周期调控的双重功能.研究报道证明,在基础和临床实验中STAT3基因与放、化疗的敏感性有着密切的关系.因而目前研究关注于以STAT3 基因为靶点的基因治疗,尤其是RNA干扰技术抑制STAT3 基因的表达,增加肿瘤的自发性凋亡和放、化疗诱导的凋亡,抑制肿瘤生长,提高肿瘤对放、化疗的敏感性.
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肝细胞癌中信号传导与转录活化因子-3表达与细胞凋亡的关系
目的 探讨信号传导与转录活化因子-3(STAT3)在肝细胞癌发生发展中的作用及其与细胞凋亡的关系.方法 应用免疫组织化学法检测52例原发性肝癌、17例癌旁组织和12例良性病变肝组织中STAT3与Bcl-xL的蛋白表达情况,同时采用原位末端标记法(TUNEL法)测定52例癌组织中细胞凋亡的表达并计算凋亡指数.结果 STAT3蛋白在肝癌组织、癌旁组织和良性病变肝组织中的阳性率分别为69.23%(36/52)、52.94%(9/17)和25.00%(3/12);Bcl-xL蛋白在肝癌组织、癌旁组织和良性病变肝组织中的表达率分别为65.38%(34/52)、41.18%(7/17)和16.67%(2/12).STAT3表达阳性的肝癌组织的平均凋亡指数明显低于阴性组(P＜0.05).结论 STAT3高表达可能是肝癌发病机制中的早期事件,STAT3基因可能通过直接或间接促进Bcl-xL的表达,抑制细胞的凋亡,从而在肿瘤的发生发展过程中起重要作用.
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siRNA沉默STAT3基因对肝癌细胞株HepG2中STAT3及其下游相关基因表达的影响
[目的]探讨小分子干扰RNA片段(small interfering RNA,siRNA)沉默信号转导与转录活化因3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)基因对肝癌细胞株HepG2生长、凋亡及STAT3与其下游基因表达的影响.[方法]构建STAT3-siRNA,并将其稳定转染到肝癌细胞株HepG2中,建立HepG2/STAT3-siR NA细胞株.MTT比色法检测转染对细胞增殖的影响;RT-PCR和Western blotting分别检测STAT3基因及其下游细胞周期蛋白D1 (cyclinD1)、存活蛋白(survivin)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因mRNA和蛋白表达水平;Hochest33342荧光染色法检测细胞凋亡.[结果]MTT结果显示,转染后HepG2细胞存活率显著降低(t=4.262,P=0.001;t=25.330,P=0.000; t=50.288,P=0.000).RT-PCR和Western blotting结果显示,转染后HepG2细胞STAT3、cyclinD1、survivin、VEGF基因mRNA和蛋白表达水平显著降低(F=770.918,P=0.000;F=940.630,P=0.000;F=723.783,P=0.000;F=582.362,P=0.000)(F=496.363,P=0.000;F=484.556,P=0.000;F=468.469,P=0.000;F=193.845,P=0.000).Hochest33342荧光染色结果显示,转染后细胞凋亡显著增加(F=3311.491,P=0.000).[结论]通过RNA干扰技术沉默STAT3基因可有效下调肝癌细胞HepG2中STAT3基因及cyclinD1、survivin、VEGF基因表达并抑制肝癌细胞存活增加细胞凋亡,STAT3-siRNA有望成为治疗原发性肝癌的新技术.
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STAT3基因在原发性肝癌组织中的表达及意义
目的 探讨STAT3基因在肝癌发生发展中的作用及意义.方法 应用RT-PCR检测STAT3基因及相关基因c-myc、p53、survivin、VEGF的mRNA水平的表达,应用Western Blot法及免疫组化法检测STAT3基因的蛋白水平及定位表达.结果 肝癌组织及癌旁组织中STAT3基因mRNA的表达均明显高于正常肝组织(P＜0.05),肝癌及癌旁组织中c-myc、survivin、VEGF基因mRNA的表达上调,p53基因mRNA的表达下调,肝癌组织及癌旁组织中STAT3基因蛋白水平的表达均高于正常肝组织(P＜0.05).结论 STAT3基因的持续激活在肝癌的发生发展中起重要作用,可作为早期诊断的指标及治疗的新靶点.
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RNAi沉默STAT3基因联合mTOR抑制剂rapamycin诱导BEL-7402肝癌细胞凋亡
目的:探讨PI3K/AKT/mTOR和JAK/STAT3 2条信号转导途径共同作用对肝癌细胞凋亡的影响,为肝癌基因治疗提供依据.方法:选取对数生长期BEL 7402细胞,随机分为对照组、mTOR抑制剂rapamycin(Rapa)组、阴性质粒组、阴性质粒+Rapa组、STAT3-siRNA质粒组和STAT3-siRNA质粒+Rapa组,应用LipofectamineTM2000转染试剂将含有目的基因的质粒转染BEL-7402细胞,同时应用rapamycin,分别采用流式细胞术和Hoechst33258荧光染色检测缅胞凋亡率和形态学的变化,JC-1荧光染色观察线粒体膜电位(△Ψm)变化,Western blotting法检测活性caspase-3蛋白表达水平.结果:STAT3-siRNA+Rapa组细胞凋亡率为60.22％±0.87％,明显高于其他各组(P＜0.05),且细胞△Ψm明显降低(27.28％±1.82％,P＜0.05);Hoechst33258荧光染色检测,见STAT3-siRNA有大量细胞出现细胞核聚集、边缘化和核碎裂等典型细胞凋亡形态;Western blotting检测,STAT3-siRNA+ Rapa组活性caspase-3蛋白表达水平明显高于其他各组(P＜0.05).结论:RNAi沉默BEL-7402肝癌细胞STAT3基因联合rapamycin可促进BEL-7402肝癌细胞的凋亡,二者具有明显的协同作用.
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常染色体显性遗传高IgE综合征患儿外周血循环B淋巴细胞亚群表型分析
研究STA T3突变的常染色体显性遗传高lgE综合征(autosomal dominant hyper-IgE syndrome,AD-HIES)患儿外周循环B淋巴细胞亚群变化,为研究STAT3基因在B淋巴细胞分化中的作用提供理论基础.采用多色荧光流式细胞术检测8例有明确STAT3基因诊断的AD-HIES患儿及10例正常儿童外周循环B淋巴细胞分化及亚群,并利用统计学方法分析两组B淋巴细胞亚群的差异.在骨髓及外周B淋巴细胞分化过程中,与同龄对照组相比,AD-HIES患儿外周循环初始B淋巴细胞显著增高(P=0.008),而记忆性B淋巴细胞显著降低(P＜0.001),其差异均存在统计学意义.在记忆性B淋巴细胞相关亚群中,与同龄正常对照组相比,AD-HIES患儿外周循环未类别转化及类别转化记忆性B淋巴细胞均显著降低(P=0.002;P=0.001),其差异均存在统计学意义.以上结果说明STA T3基因在外周血B淋巴细胞分化中起着正向调控作用.
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STAT3基因多态性与中国汉族人群克罗恩病的相关性研究
目的:探讨STAT3基因rs744166及rs2293152位点多态性与我国汉族人群克罗恩病间的相关性.方法:选取232例我国汉族克罗恩病患者(病例组)和272名汉族正常人(对照组)作为观察对象,采用序列特异引物引导的PCR检测进行基因分型,分析病例组与对照组的基因型频率及等位基因频率.结果:病例组与对照组中2个位点基的因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律.rs744166位点的基因型频率及等位基因频率在病例组与对照组间的分布差异有统计学意义(P＜0.05),而rs2293152位点的基因频率及等位基因频率在病例组与对照组间的分布差异无统计学意义(P＞0.05).结论:STAT3基因rs744166多态性与我国汉族人群克罗恩病易感性相关.
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高IgE综合征诊疗进展
高IgE综合征是一种罕见而复杂的原发性免疫缺陷病,临床以顽固湿疹样皮疹、反复细菌感染引起的皮肤及肺部脓肿,并伴有血清IgE水平显著升高为特征.本病可分为2型,Ⅰ型为常染色体显性遗传,为STAT3基因突变所致;Ⅱ型为常染色体隐性遗传,为TYK-2或DOCK8基因突变所致.两型的发病机制、临床表现、治疗及预后存在差异.文章综述高IgE综合征遗传特点及发病机制、临床表现、诊断及治疗.
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STAT3基因沉默抑制人白血病细胞体外生长的实验研究
目的:构建人STAT3 shRNA(short hairpin RNA)慢病毒载体,研究慢病毒介导的STAT3 SiRNA(small interferenceRNA)对人慢性粒细胞白血病K562细胞体外生长特性的影响.方法:针对STAT3基因RNAi有效靶点构建STAT3 shRNA慢病毒载体,293T细胞内包装产生STAT3 SiRNA慢病毒,感染K562细胞后RT-PCR和Western-blot方法验证STAT3基因的敲减效率;细胞生长曲线和MTT法观察STAT3敲减后K562细胞体外生长和增殖情况;流式细胞术和Annexin V-FITC/PI法检测细胞周期改变和早期凋亡.结果:成功得到STAT3 SiRNA慢病毒.RT-PCR和Western-blot实验证实,针对其中两个靶点的STAT3 SiRNA对STAT3基因的敲减效率均在70%以上(P<0.05).STAT3敲减后,K562细胞生长变慢,细胞增殖活性降低40%(P<0.05):细胞阻滞于G1→S期,并出现早期凋亡.结论:STAT3 SiRNA慢病毒可有效抑制K562细胞内STAT3基因表达,使细胞生长增殖受抑,细胞周期阻滞,细胞出现早期凋亡.
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STAT3基因SiRNA载体的构建及其对小细胞肺癌的影响
目的 构建STAT3基因的SiRNA表达载体,并观察其对小细胞肺癌细胞增殖能力的影响.方法 根据STAT3序列设计SiRNA引物,构建SiRNA表达载体(STAT3-SiRNA-1,STAT3-SiRNA-2,STAT3-SiRNA-N).应用Lipofect2000将STAT3-SiRNA表达载体转染NCI-H446细胞,流式细胞仪检测STAT3基因表达,噻唑兰法检测转染STAT3基因对小细胞肺癌细胞增殖能力的影响.结果 STAT3载体构建成功.转染STAT3-SiRNA-1、STAT3-SiRNA-2后,STAT3基因表达明显下降;转染STAT3-SiRNA-1、STAT3-SiRNA-2的细胞增殖能力明显低于转染STAT3-SiRNA-N和未转染的细胞(P<0.05).结论 成功构建了STAT3-SiRNA表达载体,该载体能有效抑制小细胞肺癌细胞STAT3基因的表达,与小细胞肺癌增殖活性有关.
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高免疫球蛋白E综合征
高免疫球蛋白E综合征(HIES)是一个多系统疾病,以湿疹、皮肤脓肿、皮肤和肺部复发性葡萄球菌感染、肺大疱形成、念珠菌病、嗜酸性粒细胞增多和血清IgE水平升高为特征.辅助性T淋巴细胞17数量减少或缺如,STAT3基因显性负性杂合突变有助于疾病诊断.使用必要的抗生素,是预防化脓性肺炎、防止肺囊腔形成和支气管扩张的必需措施.
关键词： 高免疫球蛋白E综合征 STAT3基因 突变 -
高IgE综合征STAT3基因突变1例并文献复习
目的：报告1例 STAT3基因突变相关性高 IgE 综合征（HIES）的临床诊断过程，复习文献，了解STAT3基因突变与 HIES 的关系。方法总结、分析病例的临床、胸部影像学及基因检测资料并进行相关文献复习。结果本例患儿存在特殊面容，颜面及躯干可见皮疹，皮肤及呼吸道感染，总 IgE 明显增高，胸部 CT 可见肺囊性病变，STAT3基因 R382W 突变，抗感染、呼吸道管理后临床好转。结论STAT3基因突变与 HIES 发病密切相关，对于临床早期出现新生儿皮疹、反复湿疹、皮肤及肺部反复脓肿的患儿可行总 IgE 检测，IgE ＞1000 Ku／L 时，应怀疑 HIES，进一步行 STAT3基因检测以明确诊断，尽早干预。
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STAT3基因与儿童急性淋巴细胞白血病的相关性
目的 探讨STAT3基因单核苷酸多态性(SNP)位点rs1053005和rs744166的多态性以及该基因的表达量与我国湖北地区儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)危险度的相关性.方法 采用病例对照研究的方法,分别选取184例ALL及377例健康儿童(健康对照组)作为研究对象.利用限制性片段长度多态性方法检测SNP的多态性分布,利用实时荧光定量PCR方法检测STAT3基因的表达量;利用SPSS 16.0软件进行统计分析.结果 1.STAT3基因rs1053005位点的3种基因型GG、AG和AA频率在ALL组及健康对照组间差异有统计学意义(X2=6.737,P=0.034);且等位基因A频率差异存在统计学意义(X2=5.853,P=0.016),A等位基因为风险因子.而rs744166位点的3种基因型在2组之间的频率分布差异无统计学意义(x2=1.866,P=0.393).2.ALL患儿分为高危、中危和标危3组,分析发现rs1053005位点的3种基因型在不同的危险度分层之间的频率分布差异无统计学意义(x2=0.335,P=0.987).3.rs1053005位点AA基因型患儿STAT3基因的表达水平低于GG基因型的患儿,差异有统计学意义(t=4.758,P=0.009);并且ALL中,高危患儿该基因的表达量低于标危的ALL患儿,差异有统计学意义(t=5.284,P =0.007).结论 STAT3基因SNP rs1053005位点基因的多态性与儿童ALL相关,并且该基因的表达水平可能与ALL患儿的危险度相关.
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信号转导与转录激活子3及黏蛋白1基因在肺腺癌淋巴结转移中的作用
肺癌是目前常见的恶性肿瘤之一,其死亡率居于整个恶性肿瘤死亡率的首位.其中非小细胞肺癌又占到了肺癌的85％.患者被确诊为肺癌时,往往多数已经处于中晚期[1].尽管人们在非小细胞肺癌( NSCLC)的早期诊断中付出了巨大努力,但是非小细胞肺癌的整体5年生存率也仅有15％[2].肺腺癌在非小细胞肺癌中占到大约30％,并且有易转移等特点,是肺癌治疗及研究中的重点.信号转导与转录激活子3( STAT3)及黏蛋白1( MUC1)基因一直以来被认为与肺癌的发生发展及转移等密切相关,MUC1基因也刚刚被证实是STAT3基因的下游靶基因[3].我们通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测70例肺腺癌组织及50例正常肺组织中STAT3及MUC1基因,探讨其与肺腺癌淋巴结转移的关系.
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信号传导与转录活化因子3在肝细胞癌组织中的表达及意义
目的 研究信号传导与转录活化因子3(STAT3)在肝细胞癌组织中的表达及其意义.方法 分别应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测肝癌组织、癌旁组织和良性病变肝组织中STAT3 mRNA和蛋白的表达,应用免疫组织化学法检测Bcl-xL的蛋白表达情况.结果 肝癌组织、癌旁组织中STAT3 mRNA的相对表达量和蛋白阳性率均高于良性病变肝组织(P均<0.01或0.05).肝癌组织及癌旁组织中Bcl-xL蛋白表达率明显高于良性病变肝组织(P<0.05).肝癌组织中STAT3蛋白与Bcl-xL蛋白表达有密切关系(P<0.01).结论 STAT3高表达可能是肝癌发病机制中的早期事件;在癌旁肝组织中,那些STAT3蛋白阳性的肝细胞可能是潜在的癌前细胞.STAT3基因可能通过直接或间接促进Bcl-xL的表达,抑制细胞的凋亡,从而在肿瘤的发生发展过程中发生重要作用.
