首页 > 文献资料
-
构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞增殖及其细胞周期的影响
目的:研究构树叶总黄酮(total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP)对人肝癌细胞HepG-2的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制.方法:取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,药物组用3,6,9,12 g·L-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细胞24,48,72 h后,采用MTT法检测细胞生长抑制率;Hoechst 33342荧光染色法荧光显微镜观察细胞的形态变化并用流式细胞仪检测细胞的周期及细胞凋亡率.结果:MTT结果显示,各质量浓度3,6,9,12 g·L-1的TFBP对HepG-2有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系,3,6,9,12 g·L-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细48 h后,细胞增殖抑制率分别为20.2％,29.44％,39.21％,43.96％;9 g·L-1的TFBP作用HepG-2细胞72 h后,细胞增殖抑制率可达52.46％,与对照组具有显著性差异(P ＜0.05);Hoechst 33342荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等典型细胞凋亡特征及凋亡小体;流式细胞仪结果显示,随着TFBP作用浓度的增加,加药组细胞凋亡率加药组凋亡率与对照组相,有显著差异(P＜0.01),G0/G1期细胞逐渐减少,G2/M期细胞数逐渐增多,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05),细胞周期被阻滞在G2/M期.结论:TFBP在体外对肝癌细胞HepG-2有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用,其抑制机制可能和诱导细胞凋亡与阻滞细胞周期有关.
-
kinectin抗体免疫荧光检测方法的建立与应用
目的探讨kinectin蛋白在真核细胞的定位,并建立kinectin抗体免疫荧光检测方法(IFA).方法从人喉癌上皮细胞(HepG2)抽提RNA,用逆转录聚合酶链反应扩增kinectin编码区序列,并连接到真核表达载体pEGFP-C2中;将构建的pEGFP-kinectin载体导入HepG2细胞中,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的荧光及其细胞定位.然后,用此转染细胞制成的底片,建立检测kinectin抗体的IFA.同时用IFA对51名正常人及46例白塞病(BD)患者血清进行初步检测.结果经EcoRI单酶切和测序证实,成功地构建了表达kinectin的真核表达载体; pEGFP-kinectin载体转染的细胞经3次克隆筛选后,100%的细胞胞浆内发出特征性荧光.用kinectin抗体阳性血清染色,也得到类似特征的荧光.IFA检测显示,BD患者kinectin抗体的阳性率为32.7%(15/46),正常人均为阴性.结论构建kinectin表达的载体可在HepG2细胞中进行表达,并成功地用pEGFP-kinectin转染的HepG2细胞建立了检测kinectin抗体的IFA.
