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过氧基异丙苯对细胞生长状态的影响
正常生物体内的自由基产生和清除是处于平衡状态的,另一方面,外界环境中存在着多种形式的自由基,其性质活泼,易与体内多种物质发生化学反应,与内源性自由基一起影响着细胞的生长、分化及死亡过程.细胞生物学研究表明,肿瘤的各个发展阶段及其治疗等多方面都与自由基反应密切相关[1,2].研究自由基与细胞生长状态的剂量-反应关系具有重要的意义.
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去甲斑蝥素对12类主要人类癌症细胞株生长状态的影响
目的:确定去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对12类,72种人类癌症细胞的半数抑制浓度(half maximalinhibitory concentration,IC50),并以此作为生长抑制效应的指标.方法:采用长时间细胞观察及功能分析系统(IncuCyteTM ZOOM),用不同浓度NCTD分别与癌细胞株共同孵育72 h,实时监测和观察细胞增殖情况,分析NCTD对12种人类癌症细胞的细胞毒性.此外,长时间细胞观察及功能分析系统的成像系统在每个时点进行拍照存档,展示了各细胞生长及存活的状态,并且进行实时观察.结果:NCTD对72株癌细胞系的生长抑制效应存在广泛的差异[IC502~66 μmol· L-,平均(24.63± 12.97)μmol·L-1].NTCD对不同细胞生长抑制的影响差异明显,体现在不同癌种之间以及同种癌种内不同个体之间.这充分反映了NTCD临床疗效个体化的特征,并提示了未来个体化治疗的可能性.肝细胞癌、胃癌、前列腺癌、白血病、中枢神经系统癌、肾癌、胆管癌细胞的细胞系IC50平均值均低于总平均值,且前列腺癌、白血病、中枢神经系统癌、肾癌、胆管癌细胞NCTDIC50平均值与肝癌细胞系和胃癌细胞系IC50平均值相近.结论:NTCD可能对前列腺癌、白血病、中枢神经系统癌、肾癌、胆管癌这几类癌症可产生显著疗效.
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新生鼠心脏成纤维细胞原代培养及脂质体转染条件优化的实验研究
目的:探讨新生大鼠心脏成纤维细胞(CFs)的原代培养方法及脂质体转染条件的优化。
方法:酶消化法原代培养CFs,倒置显微镜下观察细胞生长状态,免疫细胞化学染色鉴定CFs,并采用脂质体转染原代CFs,流式细胞术检测转染率。 -
γ干扰素对培养的人甲状腺细胞HLA-DR抗原基因表达的影响
MHC Ⅱ类抗原HLA-DR在致自身免疫性甲状腺病(AITD)中起着非常重要的作用,γ干扰素(IFNγ)在调控自身免疫性甲状腺病中的作用日益受到重视,同时它对细胞的生长起一定的作用,其作用机制未明.本研究运用Northern blot杂交技术、3H-TdR掺入法及cAMP测定法,从细胞学角度分别研究IFNγ对人甲状腺细胞HLA-DR的表达和细胞生长状态的影响,以及IFNγ对细胞cAMP的影响,为阐明IFNγ在Graves病中的作用提供理论依据.一、材料与方法1.细胞培养:(1)标本来源: Graves病甲状腺组织取自我院外科6例甲状腺次全切除术患者,正常甲状腺组织取自甲状腺腺瘤周边正常的甲状腺组织(8例).试验分组为正常甲状腺细胞组和Graves病甲状腺细胞组,各组再分对照组和IFNγ组.
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重组诱导型一氧化氮合酶在V79细胞中的表达及其对血管平滑肌细胞增殖的影响
目的探讨成纤维细胞基因转染后产生的一氧化氮对血管平滑肌细胞增殖的影响.方法将诱导型一氧化氮合酶基因通过真核表达载体转入V79成纤维细胞中,用Griess法测定转染细胞生成的一氧化氮的量.将含有一氧化氮的细胞转染上清液加到培养的血管平滑肌细胞中,观察对平滑肌细胞生长状态的影响,用流式细胞仪分析细胞周期的变化.
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重组人诱导型一氧化氮合酶转染平滑肌细胞及对其增殖的影响
目的探讨血管平滑肌细胞基因转染后对血管平滑肌细胞增殖的影响.方法将诱导型一氧化氮合酶基因通过真核表达载体转入血管平滑肌细胞中,用Griess法测定转染细胞生成的一氧化氮的量;观察对平滑肌细胞生长状态的影响,用流式细胞仪分析细胞周期的变化.
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三氧化二砷对乳腺癌细胞凋亡及线粒体跨膜电位的影响
乳腺癌细胞具有高侵袭性和耐药性,临床上缺乏疗效佳的化疗药物.自我国首次采用三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)治疗急性早幼粒细胞性白血病获得成功以来[1],As2O3的抗癌疗效日益受到临床重视,目前该药已用于消化道肿瘤、肝癌等疾病的临床治疗[2-4].但As2O3在乳腺肿瘤治疗方面在国内外尚在起步阶段,相关报道相对较少.本实验通过观察As2O3对体外人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长状态的影响,探讨As2O3对乳腺癌细胞的作用机制,旨在为今后临床应用As2O3治疗乳腺癌奠定理论和实验基础.
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均匀设计与正交设计联用筛选复方银杏的佳配比
正交设计是在中药复方筛选试验中使用多的一种设计方法,均匀设计由于其试验次数少,优化效率高的优点也开始用于中药复方的筛选[1].本实验采用均匀设计联用正交设计的方法,以内皮细胞为作用对象,以细胞释放的一氧化氮和细胞生长状态作为观察指标,对以葛根素、银杏提取物和精氨酸为主效药的复方银杏进行佳配比的筛选,为以后的深入研究奠定基础.
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改善微囊化人视网膜色素上皮细胞生长状态的研究
目的 观察上皮细胞培养液中添加果糖、成纤维细胞生长因子和牛磺酸后对人视网膜色素上皮(hRPE)细胞海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化后的细胞总数、存活率及活细胞数的影响.方法 将hRPE细胞微囊化后将其分为4组,一组作为空白对照组(空白组)只加入上皮细胞培养液、另外3组在培养液中分别加入果糖(果糖组)、成纤维细胞生长因子(成纤维细胞生长因子组)、牛磺酸(牛磺酸组)后培养7 d,在0、1、3、7 d测定微囊内细胞的细胞总数、存活率及活细胞数.结果 4组细胞微囊化后的hRPE细胞至培养7 d,细胞存活率低为(75.00±3.00)%,但各组间差异无统计学意义(P均>0.05);而微囊内细胞总数牛磺酸组(7.20±0.36)×104、成纤维细胞生长因子组(8.00±0.46)×104,比空白对照组(6.10±0.56)×104明显增多(t值分别为-2.872、-4.564,P均<0.05),果糖组(6.00±0.46)×104与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 细胞生长因子、牛磺酸可促进海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊内的hRPE细胞的增殖.
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大鼠胎脑神经细胞与几丁质多孔体联合培养及移植治疗脑损伤的实验研究
目的评价几丁质多孔体的细胞相容性;研究几丁质与神经细胞复合体脑内移植对脑损伤的修复作用,为脑组织工程的研究做探索工作.方法将大鼠胎脑神经细胞与几丁质多孔体联合体外培养,进行光镜、电镜观察.并将体外联合培养4天的几丁质-神经细胞复合体移植到大脑皮质损伤模型的大鼠脑损伤部位,于术后3、6、10及15天观察脑组织对移植物的反应、移植细胞生长状态及载体在体内的降解情况等.结果胎脑神经细胞能伸出突起附着在几丁质多孔体内.几丁质对神经细胞生长无不良影响;脑组织对移植物无明显的免疫排斥反应;载体与周围脑组织整合好,载体内有大量存活神经细胞,神经细胞之间有突起相连,形态接近正常脑组织细胞.结论几丁质具有良好的细胞相容性和组织相容性,是神经组织工程的一种较为理想的生物载体材料,但其降解周期较长,还需进一步观察长期疗效;将胎脑神经细胞或神经于细胞与几丁质多孔体联合培养、移植来治疗中枢神经系统损伤是一个很有前景的新方法.
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人骨肉瘤OS-732血管生成活性及血管内皮生长因子抗体对骨肉瘤血管生成的抑制作用
我们应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察人骨肉瘤OS-732细胞血管生成特性,并给予血管内皮生长因子(VEGF)抗体,研究其对骨肉瘤血管生成及瘤细胞生长状态的影响,一、材料与方法1.CAM制备及瘤细胞接种:人骨肉瘤细胞株OS-732,购自北京积水潭医院骨科实验室.选取孵育至9 d的胚蛋参考付生法[1]的方法制备CAM,瘤细胞接种每只5×107个/ml,共接种10只.另10只设为空白对照组.于接种第2~9天在解剖显微镜下观察接种区5 mm范围内血管变化.
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包被抗人CD3单克隆抗体对CIK细胞生长影响的研究
目的 通过对比包被和未包被抗人CD3单克隆抗体培养瓶中的杀伤细胞(CIK细胞)生长状态及培养一段时间后收集的细胞数,研究在临床常用培养CIK细胞的方法上,后续增加对培养瓶进行包被抗人CD3单克隆抗体的预处理后,对CIK细胞生长的影响.方法 提取健康者的外周血单个核细胞(PBMC),无血清培养液调整好细胞浓度,在75 cm2密封盖培养瓶中等量加入包被和未包被抗人CD3抗体,以及IFN-γ.培养24 h后加入CIK混合刺激因子,以后每天观察细胞的生长情况,根据细胞的生长情况进行传代扩增(扩增至未包被的培养瓶中),第12天收集细胞进行比较.结果 包被抗人CD3抗体的75 cm2密封盖培养瓶培养的CIK细胞,在培养第3天即可进行传代扩增,以后每天都可进行扩增;用未包被抗人CD3抗体75 cm2密封盖培养瓶培养的CIK细胞在第5天才可进行传代扩增,以后每隔1 d可以进行扩增,第12天收集的细胞总数未包被的为1.2×109,包被的为3.3×109.结论 包被细胞因子抗人CD3单克隆抗体对正常条件培养的CIK细胞生长状态和较短时间内收获的CIK细胞总量有很好的正影响.
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用组织块法培养成年、老年鼠神经干细胞
体外组织块培养成年、老年哺乳动物室管膜下区(SVZ)神经干细胞的研究甚少.本研究的目的是探索体外培养神经干细胞的实用方法及扩充神经干细胞作为移植或基因转移的供体细胞来源.取8、14及 24月龄SD大鼠(雌雄不拘)SVZ组织块作体外培养,在DMEM/F12+B27培养液中加入bFGF(20ng/ml),促进其组织块形成神经小球,刺激神经干细胞增殖 ,并用Nestin免疫组化鉴定.结果显示,培养7~10d产生的神经小球数量多,细胞生长状态佳,绝大多数细胞为Nestin阳性的神经干细胞,此期的神经干细胞较适宜于作细胞移植或基因转移.此法尚有取材方便、组织细胞损伤小、细胞易存活及经济等优点 ,不失为一种具有实用价值的通过体外培养扩增神经干细胞的方法.