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虫草多糖对皮肤成纤维细胞抗氧化能力的影响
目的:探讨虫草多糖(Cordyceps Polysaccharides,CP)对小鼠皮肤成纤维细胞抗氧化能力的影响.方法:用8-甲氧补骨脂素联合紫外线(8-MOP/UVA)制备皮肤成纤维细胞氧化模型,通过检测细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px含量反映细胞内自由基含量及清除能力,并测定线粒体跨膜电位的破坏情况判断细胞线粒体功能.结果:模型组细胞的自由基含量较对照组增多,自由基清除酶系统活力下降,虫草多糖保护组的自由基含量较模型组低,自由基清除能力也有所改善;线粒体跨膜电位的破坏程度也有所改善.结论:虫草多糖能增加皮肤成纤维细胞的抗氧化能力.
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白藜芦醇对Aβ1-42刺激HUVECs后凋亡因子Bcl-2/Bax及线粒体跨膜电位的影响
目的 探讨白藜芦醇对Aβ1-42刺激HUVECs后凋亡因子Bcl-2/Bax及线粒体跨膜电位和核因子-κB转运的影响.方法 5×101μmol/L Aβ1-42刺激HUVECs 24 h,白藜芦醇干预,干预质量浓度分别为160、80、40和20 μg/L,CCK-8法检测细胞活力,荧光显微镜下观察核因子-KB转运情况,罗丹明染色后观察细胞线粒体跨膜电位,Western blot检测胞质和胞核核因子-κB表达以及Bcl-2/Bax蛋白表达.结果 与Aβ1-42组比较,白藜芦醇各组均提高Aβ1-42诱导的HUVECs活力,提高细胞线粒体跨膜电位,抑制NF-κB转运,减少胞NF-κB表达,减少Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达,增加Bcl-2/Bax比值(P＜0.05).结论 白藜芦醇对Aβ1-42致HUVECs损伤有保护效应,可能与抑制NF-κB转运,提高细胞线粒体跨膜电位,增加Bcl-2/Bax比值有关.
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线粒体途径在慢性髓系白血病信号转导中的作用
本研究旨在探讨线粒体途径在慢性髓系白血病(CML)信号转导中的作用.用脂质体转染法将bcr3/abl2反义寡核苷酸(ASO)导入CML细胞系K562细胞中;用MTT法检测bcr3/abl2 ASO对K562细胞活力的影响;流式细胞术(FCM)分析测定细胞凋亡率;荧光染料罗丹明123染色分析细胞线粒体跨膜电位(△ψm)的变化;Westernblot检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白细胞色素C(CytC)的表达.结果表明,2 μmol/L bcr3/abl2 ASO与K562细胞作用24小时后,可明显抑制K562细胞活力,其抑制率为65.7%;可诱导细胞凋亡,凋亡率为16.9%;可下调K562细胞线粒体△ψm,有38.33%的细胞出现线粒体△ψm下降;可增强Cyt C的表达,激光光度扫描仪测得其表达光密度值由2.33±0.3升高到4.78±0.1.结论:线粒体途径通过介导凋亡信号而在CML信号转导中发挥重要作用.
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藤黄酸对K562细胞的凋亡诱导及其作用机制研究
本研究探讨蘑黄酸(gambogic acid,GA)对K562细胞的抑制作用及机制.以不同浓度的藤黄酸处理K562和K562/A02细胞;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测GA对细胞增殖的影响;碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期;AnnexinV/PI双染法检测细胞的凋亡;JC-1染色法检测线粒体跨膜电位水平;流式细胞仪检测荧光素激活的caspase-3、caspase-8、caspase-9阳性细胞水平.结果显示:藤黄酸呈时间和浓度依赖性抑制K562细胞增殖.K562/A02细胞(GA＞2 μg/ml)比K562细胞(CA＞0.5 μg/nd)需要更高的蘼黄酸浓度才显示增殖抑制作用.蘑黄酸呈浓度依赖性诱导K562细胞凋亡.藤黄酸0、0.5、1.0、2.0 μg/ml浓度对K562细胞周期未显示明显影响.藤黄酸作用后的K562细胞的线粒体跨膜电位明显降低.藤黄酸2μg/ml作用24小时激活的caspase 3、caspase 8、caspase 9阳性细胞比例与对照相比分别上升2.19%、-1.95%、34.01%;作用48小时分别上升60.4%、71.3%、77.7%.结论:藤黄酸对K562细胞株有显著的抑制作用,该作用是通过诱导细胞凋亡实现的.藤黄酸不影响K562细胞的细胞周期.藤黄酸通过线粒体跨膜电位途径和胞浆激活途径诱导K526细胞的凋亡.
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补骨脂素联合长波紫外线A诱导HL-60细胞凋亡作用的研究
本研究探讨中药补骨脂素(psoralen,PSO)加长波紫外线A(ultraviolet A,UVA)(PUVA)诱导人白血病细胞HL-60凋亡的作用及其可能的作用机制.采用MTT法观察PUVA对HL-60细胞增殖的影响;采用电子显微镜技术观察细胞超微结构改变;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率、线粒体跨膜电位水平以及细胞Fas、FasL蛋白的表达;荧光定量PCR技术检测细胞Fas、FazL mRNA的表达;免疫细胞化学法(immunocytochemistry,ICC)检测caspase8、caspase 3蛋白的表达.结果表明,PUVA可抑制HL-60细胞的增殖,使凋亡率增加,作用呈时间、浓度依赖性;UVA照射时间15分钟和PSO浓度为80μg/ml 时,HL-60细胞增殖的抑制率、凋亡率达峰值;PUVA作用后HL-60细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变,细胞线粒体跨膜电位水平下降;PUVA作用4小时Fas mRNA的表达升高,FasL mRNA的表达下降;PUVA作用24小时Fas、FasL在蛋白水平的表达亦呈现相同规律;PUVA可使HL-60细胞caspase 8、caspase 3蛋白的表达增强,在作用后8小时强度达峰值.结论:PUVA能够抑制HL-60细胞的增殖.并诱导其凋亡,可能的机制是PUVA作用于Fas/FasL 系统,使Fas基因表达升高、FasL基因表达下降,激活下游caspase 8、caspase 3的表达,线粒体膜电位水平降低亦可能参与了这个过程.
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二磷酸氯喹对K562细胞增殖与凋亡的影响
本研究探讨二磷酸氯喹时K562细胞增殖与凋亡的影响及其可能的作用机制.用细胞增殖试验(MTT法)检测不同浓度二磷酸氯喹对K562细胞的增殖抑制作用;应用细胞形态学检查、流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳观察和检测细胞凋亡;以罗丹明123(Rhodamine 123)为细胞染色剂,采用流式细胞术检测不同浓度二磷酸氯喹处理后K562细胞线粒体膜电位(△Ψm)的变化.结果表明:用不同浓度二磷酸氯喹(1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50、100 μmoL/L)分别作用于K562细胞24、48和72小时后,细胞生长活力明显降低,具有剂量依赖性;典型的细胞形态学改变、亚G1峰的测出、梯形条带的显现共同证实了二磷酸氯喹能诱导K562白血病细胞凋亡;Rhodamine 123染色显示二磷酸氯喹处理的K562细胞线粒体膜电位强度下降.结论:二磷酸氯喹对K562细胞有生长抑制、诱导凋亡作用,其作用可能与细胞线粒体膜电位(AΨm)下降有关.
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中药胃肠舒对胃肠平滑肌细胞ATP生成的影响
目的:研究胃肠舒对胃肠平滑肌细胞动能的影响.方法:胃肠平滑肌细胞离体培养,分为5组:空白对照组、西沙必利组(0.51 g/L)、胃肠舒Ⅰ组(25 g/L)、胃肠舒Ⅱ组(50 g/L)、胃肠舒Ⅲ组(75 g/L),采用Celltiter-GloTM法和Rhodamine fluorescence法分别检测胃肠舒对胃肠平滑肌细胞ATP和线粒体跨膜电位的的影响.结果:胃肠舒作用24h后与对照组和西沙必利组相比能显著增高平滑肌细胞ATP的含量.随着胃肠舒用药浓度的增加改变ATP的含量也加大(P＜0.05).流式细胞仪结果表明,胃肠舒明显加大了胃肠平滑肌细胞的线粒体跨膜电位,并且随着胃肠舒用药浓度的增加,跨膜电位的增加也越大.结论:胃肠舒可能通过改变胃肠平滑肌细胞的动能促进胃肠运动.
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蜂毒素调节人胃癌细胞线粒体相关蛋白表达
目的:观察蜂毒素(melittin)诱导人胃腺癌细胞凋亡及其对线粒体相关蛋白表达的影响.方法:4 μg/mL melittin诱导SGC-7901细胞不同时间(0、1、2、4 h),观察细胞的形态学改变；免疫荧光法观察活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位(Jc-1)表达；IHC 观察胃癌细胞线粒体释放蛋白细胞凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)、Smac/Diablo、细胞色素C(cytochrome C)、EndoG的表达情况.结果:melittin能明显诱导SGC-7901细胞凋亡;ROS实验显示,melittin组与对照组比较,细胞胞浆出现很强的绿色荧光；MPT实验显示,melittin组显示绿色荧光的细胞数占多数(P＜0.05),而阴性对照组,均表现为红色荧光细胞,线粒体相关蛋白检测结果显示,melittin组AIF、cytochrome C、EndoG、Smac/Diablo表达率分别为15.99％±1.66％、42.73％±3.48％、62.34％±2.71％、28.58％±2.09％(P＜0.05).结论:melittin可诱导SGC-7901细胞凋亡,线粒体凋亡相关蛋白可能参与并发挥了重要作用.
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去甲肾上腺素预处理早时相心肌细胞能量代谢变化
去甲肾上腺素(noradrenaline, NA)在心肌缺血缺氧预适应过程中的作用已经被公认[1～4],但是其具体的作用机制,尤其对细胞的能量代谢变化的分子水平研究不足,而线粒体能量代谢是一个非常重要的环节[5,6].据此,特设计此实验用微量NA对培养心肌细胞进行预处理,研究NA预处理后早时相心肌细胞在缺血缺氧损伤中线粒体跨膜电位和培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)浓度的变化,为临床治疗提供新的思考和药物选择.
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高功率微波对人T淋巴细胞的影响机制和干预措施
目的:观察高功率微波辐照后人T淋巴细胞活性氧和线粒体跨膜电位的变化,并探索某些干预措施对其损伤后的影响.方法:采用DCFH-DA分子探针和荧光染料罗丹明-123结合流式细胞仪分别检测人T细胞经0、10、30、50mW/cm2 微波辐照及给予某些干预措施后细胞内活性氧和线粒体跨膜电位的变化.结果:(1)经10mW辐照后即可见T细胞内活性氧水平的升高,于30mW辐照后达到峰值;而10mW辐照后T细胞线粒体跨膜电位出现明显降低,于30mW辐照后降至低.(2)于照前给予活性氧抑制剂能有效抑制T细胞内活性氧水平的升高;T细胞转入bcl-XL基因后也能明显抑制细胞内活性氧水平的升高和线粒体跨膜电位的下降,高剂量组更为明显.结论:一定强度的高功率微波能引起T细胞活性氧和线粒体跨膜电位变化等早期凋亡事件的发生,活性氧抑制剂和bcl-XL基因过表达能有效抑制这些早期事件的发生.
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三氧化二砷诱导肝癌Bel-7402细胞凋亡与线粒体跨膜电位关系的研究
目的 研究三氧化二砷(As2O3)诱导人肝癌细胞系Bel-7402细胞凋亡及与线粒体跨膜电位的关系.方法 应用不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞后,观察As2O3对肝癌细胞生长状态的影响;通过噻唑蓝(MTT)比色法观察其对Bel 7402细胞增殖的影响;利用共聚焦显微镜及流式细胞术观察经Annexin V-FITC/PI双染后的细胞早期凋亡;通过共聚焦显微镜及流式细胞仪检测线粒体跨膜电位(MMP)的改变情况;并通过底物染色法反映Caspase-3的活性.结果 不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞后有明显的时间和剂量依赖性;经Annexin V-FITC/PI双染后,可观察到Bel-7402细胞的早期凋亡现象,2 μmol/LAs2O3作用24 h细胞凋亡率为9.89%,作用48h细胞凋亡率为48.53%,而4μmol/L As2O3作用24 h细胞凋亡率为18.27%,作用48h细胞凋亡率为67.52%;经As2O3药物作用后,细胞线粒体膜电位水平下降,且与药物作用时间和药物浓度有关(P＜O.05);同时Caspase-3活性被激活.结论 As2O3可明显抑制肝癌细胞Bel-7402的生长,并使细胞线粒体膜电位下降,诱导肝癌细胞凋亡.
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三氧化二砷对乳腺癌细胞凋亡及线粒体跨膜电位的影响
乳腺癌细胞具有高侵袭性和耐药性,临床上缺乏疗效佳的化疗药物.自我国首次采用三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)治疗急性早幼粒细胞性白血病获得成功以来[1],As2O3的抗癌疗效日益受到临床重视,目前该药已用于消化道肿瘤、肝癌等疾病的临床治疗[2-4].但As2O3在乳腺肿瘤治疗方面在国内外尚在起步阶段,相关报道相对较少.本实验通过观察As2O3对体外人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长状态的影响,探讨As2O3对乳腺癌细胞的作用机制,旨在为今后临床应用As2O3治疗乳腺癌奠定理论和实验基础.
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重组人活化蛋白C对大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用
目的 探讨重组人活化蛋白C(rhAPC)对急性胃黏膜损伤的保护机制.方法 SD大鼠24只,随机分为四组:A组为正常组,B组为模型组,C组为rhAPC预处理组,D组为生理盐水对照组.采用浸水束缚应激(WRS)的方法制备大鼠急性胃黏膜损伤的模型,C组在WRS开始前半小时通过鼠尾静脉注入rhAPC(100 μg/kg),D组在同一时间点注入同等量的生理盐水.计数各组大鼠胃黏膜溃疡指数(UI).分离胃黏膜上皮细胞,并制成细胞浓度为1×106/ml的单细胞悬液,加入荧光染料DiOC6,上流式细胞仪检测胃黏膜线粒体跨膜电位.采用ELISA法检测各组血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6的浓度.结果 B组胃黏膜UI,血清TNF-α、IL-6的浓度均较A组明显升高(P＜0.001),胃黏膜线粒体跨膜电位较A组明显下降(P＜0.001).C组胃黏膜UI,血清TNF-α、IL-6的浓度均较B组显著下降(P＜0.001),胃黏膜线粒体跨膜电位较B组显著升高(P＜0.001).结论 rhAPC可抑制TNF-α、IL-6的释放,抑制线粒体跨膜电位降低,从而对胃黏膜急性损伤起保护作用.
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叠氮甲基蒽醌衍生物诱导KB细胞及其耐药株细胞的凋亡
目的研究大黄素的蒽醌衍生物6-叠氮甲基-1-羟基-3,8-二甲氧基-9,10-蒽醌(AMAD-10)抑制KB细胞及其耐药株KBv200的生长和诱导细胞凋亡的作用.方法细胞毒用MTT法测定;细胞内活性氧(ROS)和线粒体跨膜电位(△ψm)分别用DCFH-DA和DiOC6荧光探针标记,流式细胞仪检测;Annexin V染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测AMAD诱导凋亡作用.结果AMAD浓度依赖性抑制KB和KBv200细胞的生长和引起活性氧明显增加,并能引起两种细胞△ψm时间依赖性的降低,AMAD可浓度依赖性地诱导两种细胞凋亡.结论AMAD体外显著抑制KB及其耐药株KBv200的生长,这可能与其引起细胞内ROS增加、使△ψm降低,从而诱导细胞凋亡有关.
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大花紫玉盘素诱导肿瘤多药抗药性细胞凋亡及其机制
目的比较研究番荔枝内酯大花紫玉盘素(uvarigrin)诱导多药抗药性KBv200细胞及其亲本KB细胞凋亡及其机制.方法以MTT法进行细胞毒测定;用Annexin V FITC染色及流式细胞仪检测细胞凋亡.活性氧(ROS)测定以DCFH-DA标记,细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)测定用DiOC6标记,均以流式细胞仪检测.Caspase-9激活的测定用Western blotting法.结果大花紫玉盘素对KBv200细胞及其亲本KB细胞的生长均有明显的抑制作用;大花紫玉盘素不仅能介导KB细胞凋亡,而且也能介导KBv200细胞凋亡;大花紫玉盘素作用于KBv200细胞及其亲本KB细胞12,24和48 h,均引起ROS升高以及△Ψm降低,而且呈时间依赖性.Western blotting方法分析显示Caspase-9被激活.结论大花紫玉盘素可能通过线粒体通路诱导细胞凋亡.
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维泰醇对小鼠淋巴白血病细胞促进凋亡的作用及其机制
维泰醇(alternol)是利用红豆杉树皮中一种微生物菌诱变株,经过发酵、纯化等工艺分离出的新型单体化合物.本研究探讨维泰醇对小鼠淋巴白血病(L1210细胞)的作用及其机制.采用MTT法检测维泰醇对细胞活力的影响,用形态学方法、 DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡,以Western blotting法检测与凋亡相关蛋白的表达.维泰醇对L1210细胞的增殖有明显抑制作用;处理后的细胞表现出凋亡特有形态学改变,细胞凋亡比率的增加有时间依赖性;维泰醇能降低细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm),增加细胞内活性氧(ROS)的水平,并引起细胞DNA发生片段化,形成典型的梯状条带;维泰醇能下调Bcl-2/Bax表达比率,并且上调caspase-3和caspase-9的表达,但是对caspase-8的表达没有明显的影响.维泰醇可能通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导L1210细胞凋亡.
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羧基-D-氨基葡萄糖衍生物对人食管癌Eca-109细胞线粒体膜电位的影响
目的 研究2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)诱导Eca-109细胞凋亡的机制.方法 将COPADG作用于人食管癌Eca-109细胞24 h,检测Eca-109细胞的抑制率、凋亡率、线粒体跨膜电位.结果 随COPADG浓度的升高,Eca-109细胞的抑制率增加,Eca-109细胞凋亡率与COPADG浓度呈正相关,(γ=1.0,P＜0.01);Eca-109细胞线粒体膜电位水平与Eca-109细胞凋亡率相关(γ=1.0,P＜0.01).结论 COPADG可促进Eca-109细胞凋亡并降低线粒体膜电位,从而启动细胞凋亡通路,促使Eca-109细胞凋亡.
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三氧化二砷抗肿瘤作用机制及临床应用研究进展
一、三氧二砷的抗肿瘤作用机制1.通过线粒体依赖性通路诱导细胞凋亡:凋亡细胞在被诱导产生特征性形态学改变和DNA降解之前,一个普遍的变化是线粒体膜功能的改变即线粒体的通透性改变(permeability transition,PT),这是调节凋亡的中心环节.砷剂与巯基结合后,导致线粒体膜通透性转运孔的开放,反应性氧类增加,进而导致线粒体跨膜电位(△ψm)下降.巯基是As2O3诱导线粒体膜电位下降和细胞凋亡的重要化学感受器,二硫键还原剂二硫苏糖醇(DTT)明显阻止As2O3诱导的细胞线粒体膜电位下降和细胞凋亡,因此,其机制可能与巯基氧化尤其是二硫键的形成有关.MPT是细胞凋亡的调节物,可能作为细胞死亡的开关一但打开,线粒体膜电位下降,细胞不可逆地进行凋亡[1-3].当线粒体膜电位降低时,促凋亡因子,如细胞色素C(Cyto-C)和凋亡诱导因子(AIF)自线粒体释放入胞质,激活一些凋亡效应分子,如半胱氨酸蛋白酶家族成员caspase-9,进一步激活aspase-3,从而诱导细胞凋亡.Caspase即半胱氨酸蛋白酶家族.在NB4(一种APL细胞系),U937及SH-SY5Y成神经细胞瘤等细胞系中均可见As2O3等砷剂诱导的凋亡相关的caspase激活[4,5].根据其在细胞凋亡中的作用可分为始动(上游)caspase(caspase2、8、9、10)和效应(下游)caspase(caspase3、6、7)两大类.前者在凋亡诱导信号作用下结合特异辅因子而活化,并进一步活化后者.因而caspase的活化级联形式是砷剂诱导凋亡的重要通路.综上所述,砷剂引起的MPT开放和△ψm破坏是决定细胞生存与否的关键,而caspase是砷剂诱导凋亡的下游效应物,其活化可诱导细胞凋亡.
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线粒体途径介导血小板凋亡的研究进展
血小板凋亡是血小板自主有序的死亡,其不是病理状态下自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境而主动采取的一种死亡过程.血小板凋亡是井然有序的过程,大量的分子及途径参与其中.线粒体在调节血小板凋亡过程中发挥关键作用.在血小板凋亡过程中,线粒体通透性转换孔过度开放,引起线粒体跨膜电位降低,并导致多种线粒体蛋白,其中,线粒体内的Bcl-2家族对血小板凋亡具有双向调节作用.研究线粒体在血小板凋亡中的作用机制,对于研究血小板凋亡的调控机制具有重要意义.
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肝细胞的体外培养及乙醛对肝细胞的形态影响
目的 通过将肝实质细胞分离、纯化、体外培养,全面分析原代肝细胞的生长状态,研究乙醛诱发大鼠肝细胞毒性和胞内游离Ca2+变化及Ca2+螯合剂的干预效应,探讨乙醛致肝细胞损伤机制及Ca2+螯合剂的保护作用.方法 分离培养大鼠原代肝细胞,以含300 mmol/L乙醛的培养基培养肝细胞24、48 h,相差倒置显微镜下观察肝细胞的形态变化.结果 相差倒置显微镜下,新分离的大鼠肝细胞折光性强,有立体感,乙醛处理肝细胞24 h后肝细胞体积肿胀,颜色变深,颗粒粗糙,部分细胞脱壁,少量细胞出现细胞壁缺失,呈放星状;乙醛处理48 h后,可见到肝细胞质变稀疏,细胞核固缩,表面出现胞膜疱,细胞膜破碎;相当一部分细胞破碎脱落可见到一些核已消失的肝细胞浆或残屑.结论 ①乙醇可导致严重的肝细胞极性紊乱,导致细胞损伤,形成不同程度的病理状态,从而在细胞及分子水平对导致肝病形成的机理进行了探讨;②乙醛诱发肝细胞毒性和损伤可能与肝细胞[Ca2+]i升高有关.
