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染料木质素对人乳腺癌细胞BCaP-37凋亡的诱导作用
采用荧光显微镜观察了染料木质素诱导体外培养的人体乳腺髓样癌细胞株BCaP-37凋亡的形态学特征,并用流式细胞仪检测了染料木质素对乳腺癌细胞株细胞周期、凋亡率和bcl-2基因表达的影响.结果显示经丫啶橙染色后,荧光显微镜下可见到乳腺癌细胞出现细胞凋亡的特征性形态学改变;染料木质素能阻断细胞由G1期向S期移行,使G0-G1期细胞数目明显增多,并能诱导细胞发生凋亡,呈现剂量-效应关系;bcl-2基因表达量与染料木质素浓度呈负相关.故染料木质素可通过抑制bcl-2蛋白表达诱导细胞凋亡.
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丝裂霉素C处理代替γ-辐射在疫苗制备中的应用研究
在自体肿瘤疫苗制备过程中为防止接种部位发生人工种植,需对肿瘤细胞进行灭能处理。常用方法为γ-照射[1],但所需Gammacell辐射仪价格昂贵,不适于常规应用。为此我们探索用丝裂霉素C(MMC)进行化学处理代替γ-辐射的可行性。材料与方法 一、材料 1. 主要试剂:人肺腺癌细胞系A549人乳腺癌细胞系MCF7购自美国组织细胞库(ATCC),结肠癌细胞来自手术切除新鲜肿瘤组织。〔3H〕-胸腺嘧啶核苷、〔3H〕-尿嘧啶核苷、〔3H〕-混合氨基酸购自中国原子能研究所。MMC为日本KYOWA公司产品。 2. 动物:5周龄雌性裸鼠(购自中国预防医学科学院动物中心),共6只,实验组对照组各3只。 3. 仪器:1209 RACKBETA液闪仪为瑞士Pharmacia 公司产品。Gammacell-40辐射仪为加拿大MDS Nordion公司产品。 二、方法 1.〔3H〕-掺入:收集5×105细胞,不同剂量MMC处理60min,Hanks液洗涤去除MMC,或60μg/ml MMC处理60min、Hanks液洗涤去除MMC之后加正常培养基,MMC处理后分别于0、1、3、6、12、24h取细胞,加入标记核苷或氨基酸,每孔37k Bq,37℃ 5%的CO2孵育3h,细胞收集器收集细胞于whatman滤纸,分别用双蒸水洗涤2次、5%三氯醋酸固定、75%、100%的酒精脱水、烘干,加液闪液上机检测。 2.γ-照射:收集一定数量的细胞,将细胞置冰浴中,Gammacell辐射仪200Gy照射,照射后分别于0、1、3、6、12、24h取细胞进行〔3H〕-掺入实验。 3.裸鼠荷瘤:收集1×107乳腺癌细胞MCF7,MMC 60μg/ml处理1h,洗涤、离心后于实验组裸鼠腋下接种,对照组未经处理直接接种,2周后观察成瘤情况
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三氧化二砷对乳腺癌细胞凋亡及线粒体跨膜电位的影响
乳腺癌细胞具有高侵袭性和耐药性,临床上缺乏疗效佳的化疗药物.自我国首次采用三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)治疗急性早幼粒细胞性白血病获得成功以来[1],As2O3的抗癌疗效日益受到临床重视,目前该药已用于消化道肿瘤、肝癌等疾病的临床治疗[2-4].但As2O3在乳腺肿瘤治疗方面在国内外尚在起步阶段,相关报道相对较少.本实验通过观察As2O3对体外人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长状态的影响,探讨As2O3对乳腺癌细胞的作用机制,旨在为今后临床应用As2O3治疗乳腺癌奠定理论和实验基础.
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RNA干扰P13 Kp85α表达对乳腺癌MCF-7细胞放射增敏作用体外研究
磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)参与多种信号通路,调节细胞功能,其异常表达与肿瘤细胞放射抵抗有关 [1].笔者通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术敲低人乳腺癌细胞系MCF-7中PI3Kp85的表达,探讨肿瘤细胞放射敏感性变化.
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RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α对人乳腺癌细胞功能的影响
目的 研究靶向针对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的短发夹RNA(shRNA)对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞功能的影响.方法 氯化钴模拟低氧环境.采用RNA干扰技术,构建针对HIF-1α的shRNA真核表达载体,转染MCF-7细胞.RT-PCR检测RNA干扰后MCF-7中血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化.实时定量PCR和Western blot技术分别检测HIF-1α mRNA和蛋白质水平.Sub-G1测定、AnnexinV荧光标记和DNA ladder检测细胞凋亡.流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 缺氧后,MCF-7中的HIF-1α表达增加(P<0.01),而凋亡率较常氧降低(P<0.05).shRNA转染MCF-7后,HIF-1α的表达下调91.63%(P<0.01).阿糖胞苷诱导或无凋亡诱导剂时,干扰组凋亡率比未转染组分别增高1.75倍(P<0.01)和61.31倍(P<0.01).与未转染组相比,干扰组中的VEGF下调66.8%(P<0.05).干扰组细胞周期进程也较未转染组减缓.结论 HIF-1α在MCF-7中发挥抗细胞凋亡的作用.本室构建的针对HIF-1α的shRNA能够促进MCF-7凋亡,下调VEGF表达,推迟细胞周期.
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二羟异黄酮对人乳腺癌细胞系MCF-7生长影响
大豆异黄酮是豆科植物的重要成分.近年来研究显示,其具有抗肿瘤作用,尤其对人类乳腺癌细胞株及前列腺癌细胞株均具有明显的体外抗肿瘤作用[1].文献表明,二羟异黄酮可以抑制细胞增殖及阻滞细胞周期[2].本实验初步探讨二羟异黄酮的抗肿瘤作用.
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鲨鱼软骨制剂对人不同细胞生长抑制作用及其机制的探讨
目的研究鲨鱼软骨制剂(SCP)对人胃癌细胞(MGC80-3)、红白血病细胞(K562)、人结肠高分化腺癌细胞(THC-8908)、人乳腺癌细胞(MCF-7)和人脐静脉血管内皮细胞(VEC340)的生长抑制作用,探讨其作用机制.方法采用盐酸胍抽提,丙酮分级沉淀,烘干,微孔滤膜过滤等步骤从鲨鱼软骨粉中提取鲨鱼软骨制剂(SCP);MTY法检测不同浓度的SCP对体外培养的MGC80-3细胞系、K562细胞系、THC-8908细胞系、MCF-7细胞系和VEC340细胞系的生长抑制作用;Hoechst33342/PI荧光双染法检测细胞凋亡.结果SCP明显抑制MGC80-3、K562、THC-8908、MCF-7和VEC340五种细胞系的生长,其IC50值分别为0.5 mg/ml、0.7 mg/ml、1 mg/ml、1.5 mg/ml和2 mg/ml.凋亡细胞比例在用药后48 h分别达79.9%、44.6%、78.9%、63.3%和44.8%.结论SCP能直接抑制不同肿瘤细胞生长,又能抑制血管内皮细胞的生长,其作用机制与细胞凋亡有关.
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鲨鱼软骨制剂对三种细胞系增殖抑制作用的比较
目的比较鲨鱼软骨制剂(SCP)对人结肠高分化腺癌细胞(THC-8908)、人红白血病细胞(K562)和人乳腺癌细胞(MCF-7)的生长抑制作用,探讨其抗癌作用机制.方法采用MTT法检测不同浓度SCP对体外培养的THC-8908细胞、K562细胞和MCF-7细胞的细胞毒作用.Hoechst33342/PI荧光双染色方法检测细胞凋亡.结果SCP明显抑制THC-8908、K562和MCF-7三种细胞系的生长,其IC50值分别为1mg/m1、0.7mg/ml和1.5mg/ml.凋亡细胞比例在用药后48h分别达78.85%、44.55%和63.32%.结论SCP能直接抑制肿瘤细胞生长.
关键词: 鲨鱼软骨制剂 人结肠高分化腺癌细胞系 人红白血病细胞系 人乳腺癌细胞系 细胞增殖 -
HIF1α和HIF2α调控低氧诱导的MCF-7和HepG2细胞PAI-1表达
目的 研究低氧下HIF1α和HIF2α在MCF-7和HepG2细胞中调控表达PAI-1的作用机制.方法 低氧和常氧处理人肝癌细胞HepG2和人乳腺癌细胞MCF-7,用小干扰RNA(siRNA)敲低HIF1α和HIF2α,用实时定量PCR测定PAI-1 mRNA,ELISA和免疫印迹等方法检测PAI-1含量、HIF1α和HIF2α蛋白表达.结果 在HepG2和MCF-7两种细胞系中,PAI-1 mRNA在低氧下表达量明显升高,而且PAI-1蛋白也明显升高.低氧下用siRNA分别敲低HIF1α和HIF2α,在MCF-7细胞系中敲低HIF1α降低了PAI-1的mRNA水平及其含量,在HepG2细胞系中敲低HIF2α降低了PAI-1的mRNA水平及其含量.结论 HIF1α和HIF2α分别调控MCF7和HepG2细胞中低氧诱导的PAI-1表达,提示在肝癌和乳腺癌中PAI-1的表达升高的调控机制可能是不同的.
关键词: 低氧诱导因子 纤溶酶原激活物抑制剂 HepG2细胞系 人乳腺癌细胞系 -
泌乳素诱导蛋白基因及其在肿瘤中作用的研究进展
泌乳素诱导蛋白(prolactin inducible protein,PIP)是存在于人精液中17 kD的多肽[1].因其在不同部位被发现而有多种名称,在受泌乳素和雌激素调控的人乳腺癌细胞系T47D中被发现,而被称作PIP[1- 2];在乳腺囊液、人乳和唾液中被发现而被称为gross cystic disease fluid protein 15(GCDFP-15)[3];作为17 kD类肌动蛋白结合蛋白在人精液中被发现,而被命名为分泌性肌动蛋白结合蛋白(secretory actin binding protein,SABP),也称作gp17[4];因其来源于下颌下腺和舌下腺的唾液而被称作腮腺外糖蛋白(extraparotid glycoprotein,EP-GP)[5].目前,GCDFP-15、PIP、SABP、gp17、EP-GP在基因术语中被统一称作PIP,人PIP基因位于7号染色体[6].PIP虽是一种小蛋白,但却在抗菌、受精、免疫调节、细胞凋亡及肿瘤进程中发挥着重要的生物学作用.本文着重对PIP基因及其在肿瘤中作用的相关研究进展进行综述.
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缺氧诱导因子-1在人乳腺癌细胞系MCF-7中的抗凋亡作用
目的 研究缺氧诱导因子-1在人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中对凋亡的作用.方法 氯化钴(COCl2)模拟低氧环境.采用RNA干扰技术.构建针对HIF-1α的shRNA真核表达栽体,转染MCF-7细胞.Real-time PCR和Western-blot技术分别检测HIF-1αmRNA和蛋白质水平.Sub-G1测定,AnnexinV荧光标记和DNA ladder检测细胞凋亡.结果 缺氧后MCF-7细胞HIF-1α的蛋白质水平表达增加,但缺氧后细胞的凋亡率比正常氧水平时低.实时定量PCR和Western blot结果证实转染短发夹RNA后,MCF-7细胞中HIF-1α基因表达被成功抑制.阿糖胞苷诱导或无凋亡诱导剂时,干扰组凋亡率比未转染组明显增高.结论 这项研究证明HIF-1在MCF-7中发挥抗细胞凋亡的作用.为针对HIF-1α的shRNA有效地用于乳腺癌的治疗提供新的思路.