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金水宝的药用价值及临床应用
冬虫夏草因受自然条件的限制及暖冬气候的影响,产量已减少近1/3,无法满足日益增长的市场需求,价格十分昂贵.因此,国内外近年来十分重视研究虫草的医疗作用和人工培养技术.目前,国内已成功地进行了菌种分离和发酵培养.如江西国药厂生产的金水宝胶囊(虫草菌丝粉),其化学成分和药理作用均与天然虫草相似,而且氨基酸、腺苷、尿嘧啶核苷等成分的含量均高于天然虫草,其VB1、VB2、VE以及微量元素锌(Zn)、硒(Se)等含量也具有不容忽视的地位和药用价值.
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黑曲霉菌pyrG基因的克隆与黑曲霉菌同源转化系统的建立
黑曲霉菌(Aspergillus niger)是一种不产生黄曲霉毒素的丝状真菌,它有生长迅速、易于培养、可大量产生分泌性蛋白质的特点,因此它除了在生产各种真菌代谢物及酶类的发酵工业上被广泛应用外,在基因工程中作为宿主菌生产蛋白质产物方面也受到很大重视和应用。为了将待表达的基因导入宿主菌,首先需要建立一个稳定有效的基因转化系统。以乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶(pyrG)基因作为标志基因并以该基因的缺陷株真菌作为受体菌的转化系统已被证明是一种十分行之有效的基因转化系统。乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶是尿嘧啶核苷酸合成中一种关键性酶,缺乏该酶的pyrG缺陷株不能在不含尿嘧啶核苷的培养基上生长。通过基因转化,向其导入含pyrG基因的质粒,可使其获得在不含尿嘧啶核苷培养基上生长的能力。如果将要导入的基因连接在该质粒上,此时pyrG可作为基因是否导入的标志。我们首次从黑曲霉菌ATCC 12049野生型菌株的基因文库中克隆获得全长pyrG基因,并在此基础上构建了表达性质粒载体,建立了pyrG基因为标志基因,以同型黑曲霉菌pyrG基因缺陷株为受体菌的同源基因转化系统。
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丝裂霉素C处理代替γ-辐射在疫苗制备中的应用研究
在自体肿瘤疫苗制备过程中为防止接种部位发生人工种植,需对肿瘤细胞进行灭能处理。常用方法为γ-照射[1],但所需Gammacell辐射仪价格昂贵,不适于常规应用。为此我们探索用丝裂霉素C(MMC)进行化学处理代替γ-辐射的可行性。材料与方法 一、材料 1. 主要试剂:人肺腺癌细胞系A549人乳腺癌细胞系MCF7购自美国组织细胞库(ATCC),结肠癌细胞来自手术切除新鲜肿瘤组织。〔3H〕-胸腺嘧啶核苷、〔3H〕-尿嘧啶核苷、〔3H〕-混合氨基酸购自中国原子能研究所。MMC为日本KYOWA公司产品。 2. 动物:5周龄雌性裸鼠(购自中国预防医学科学院动物中心),共6只,实验组对照组各3只。 3. 仪器:1209 RACKBETA液闪仪为瑞士Pharmacia 公司产品。Gammacell-40辐射仪为加拿大MDS Nordion公司产品。 二、方法 1.〔3H〕-掺入:收集5×105细胞,不同剂量MMC处理60min,Hanks液洗涤去除MMC,或60μg/ml MMC处理60min、Hanks液洗涤去除MMC之后加正常培养基,MMC处理后分别于0、1、3、6、12、24h取细胞,加入标记核苷或氨基酸,每孔37k Bq,37℃ 5%的CO2孵育3h,细胞收集器收集细胞于whatman滤纸,分别用双蒸水洗涤2次、5%三氯醋酸固定、75%、100%的酒精脱水、烘干,加液闪液上机检测。 2.γ-照射:收集一定数量的细胞,将细胞置冰浴中,Gammacell辐射仪200Gy照射,照射后分别于0、1、3、6、12、24h取细胞进行〔3H〕-掺入实验。 3.裸鼠荷瘤:收集1×107乳腺癌细胞MCF7,MMC 60μg/ml处理1h,洗涤、离心后于实验组裸鼠腋下接种,对照组未经处理直接接种,2周后观察成瘤情况
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金水宝的临床应用
金水宝为发酵虫草菌粉经加工制成的片剂,临床上具有秘精益气、补肾保肺之功效.按照其成分来看,金水宝实为冬虫夏草的一种.冬虫夏草为子囊菌门麦角菌科虫草属药用真菌,生产于西藏、青海、四川等地.近年来,冬虫夏草由于自然条件的影响,产量已经大幅度下降,无法满足当今医药市场的需要,所以,国内十分重视该药的开发.江西济民堂医药有限公司生产的金水宝胶囊就是其中的一种,其化学成分和临床作用均与冬虫夏草相似,而且氨基酸、腺苷、尿嘧啶核苷等含量的成分均高于冬虫夏草[1].
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胸腺嘧啶核苷磷酸化酶在肿瘤研究中的意义
胸腺嘧啶核苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP或dThdPase)具有促血管增生的活性并在肿瘤进展中起重要作用,在恶性肿瘤中的活性明显高于癌旁的正常组织.血小板源性内皮细胞生长因子(platelet derived-endothelial cell growth factor,PD-ECGF)与TP为同一物质.近年来,关于PD-ECGF/TP的研究日益增多,并发现PD-ECGF/TP与一些肿瘤的临床病理特征、预后及微血管密度(density of microvessel,MVD)有关[1~6].关于TP的抑制剂、TP在化疗中作用的研究也日益增多,所以TP有可能成为一种新的肿瘤标记物,研究TP在肿瘤中的表达对指导今后的化疗,评价及改善患者的预后有重要作用.1 生物特性TP由两个相同的亚单位组成,其分子量均为5 500.TP催化胸腺嘧啶核苷、尿嘧啶核苷及其类似物的可逆的磷酸化反应,形成相应的碱基及2-脱氧核糖-1-磷酸(2-deoxyribose-1-phosphate).实际上,胸腺嘧啶的降解产物在体外具有促内皮细胞生长和化学趋化性,在体内具有促血管增生作用[6,7].TP在细胞浆或细胞核中表达,仅在细胞核中表达的很少见.其在正常组织、细胞中也表达如:肝脏、肺、淋巴结、外周淋巴细胞中也可以检测到TP活性,但TP在恶性肿瘤中的活性高于癌旁非肿瘤组织中的活性[1,8].
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海燕化学成分研究
海洋生物具有广泛的生物多样性.为了从我国丰富的海洋生物资源中寻找到具有新颖结构和显著生理活性的次生代谢产物,探讨我国北部海域海洋生物中次生代谢产物的化学结构特征,我们对产自青岛海域的海燕进行了化学成分研究.海燕Asterina pectinifera是棘皮动物门海星纲海燕科动物,是我国北部海域常见的海星品种[1].我们从其95%乙醇提取物的正丁醇部位中分离鉴定12 个化合物,分别为asterosaponin P1(Ⅰ),pectinioside A (Ⅱ),L-色氨酸(Ⅲ),L-苯丙氨酸(Ⅳ),对羟基苯甲酸(Ⅴ),对羟基苯乙酸(Ⅵ),对羟基苯乙胺(Ⅶ),尿嘧啶核苷(Ⅷ),尿嘧啶(Ⅸ),胸腺嘧啶脱氧核苷(Ⅹ),胸腺嘧啶(Ⅺ),次黄嘌呤核苷(ⅩⅡ).以上化合物除Ⅰ、Ⅱ外均为首次报道从海燕中分离得到.
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HPLC法从瘤果紫玉盘叶中分离制备紫玉盘醇和大花紫玉盘醇G
瘤果紫玉盘为番荔枝科紫玉盘属植物.该属植物主要分布于我国的西南地区,在民间广泛应用于癌症、贫血和炎症的治疗[1,2].紫玉盘属植物中主要含有多氧取代环己烯、番荔枝内酯、黄酮、生物碱等类成分[3].本课题组研究表明多氧取代环己烯类化合物具有较强的抗肿瘤活性,如能抑制核苷的转移,对胸腺嘧啶脱氧核苷和尿嘧啶核苷抑制作用强,能显著抑制人结肠癌细胞、乳腺癌、肝癌细胞等的增殖,同时对多药耐药瘤株同样有效[4].
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P2受体激动药及其作用机制的研究
早在1985年Burnstock和Kennedy曾将P2受体分为P2X和P2Y两种亚型.P2X嘌呤受体被稳定同类物α,β-meATP和β,γ-meATP强烈激活;而2-meSATP 是P2Y受体的强激动剂,α,β-meATP和β,γ-meATP活性低或无活性.此外P2X嘌呤受体被α,β-meATP选择性脱敏并被ANAPP3拮抗.P2X嘌呤受体分布在输精管、膀胱和血管平滑肌介导收缩反应;P2Y嘌呤受体则分布于豚鼠结肠带及血管内皮细胞介导舒张反应.目前,P2受体已从平滑肌和内皮细胞克隆成功,通过药理实验分析,所谓的P2X和P2Y嘌呤受体接近克隆的P2X1和P2Y1受体[1,2].采用经典的药理学分析法,继P2X和P2Y受体之后,又曾命名了P2U受体(ATP、UTP有同等效力,广泛分布)、P2T受体(血小板ADP受体,介导聚集)和P2Z受体(分布于肥大细胞和淋巴细胞,介导细胞毒效应和脱颗粒反应).P2S受体、P2R受体、P2D受体、尿嘧啶核苷酸受体、P3和P4受体也分别被报道[1,2].在这些受体中,P2U、P2Z和尿嘧啶核苷酸受体已被克隆.
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牵牛全草的化学成分研究(Ⅱ)
目的:研究牵牛全草Pharbitis nil(L.)Choisy的化学成分.方法:用无水乙醇浸泡后浓缩得到的浸膏分别用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取,萃取物使用柱层析、HPLC制备、重结晶等方法对牵牛全草乙醇提取物进行分离纯化,依据理化性质和光谱分析鉴定各单体化合物结构.结果:从牵牛全草乙醇提取物的醋酸乙酯和正丁醇部分分离得到10个化合物,分别为:2-甲氧基对苯二酚-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1),红景天苷(2),(6S,9R)-roseoside(3),ampelopsisionoside(4),尿嘧啶(5),尿嘧啶核苷(6),顺式阿魏酸酰对羟基苯乙胺(7),对羟基桂皮酸酰对羟基苯乙胺(8),阿魏酸酰对羟基苯乙胺(9),胡萝卜苷(10).结论:化合物1-4,6为首次从该植物中分离得到.
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血浆尿嘧啶核苷测定及胞磷胆碱钠片和胶囊人体生物等效性研究
目的 建立人血浆尿嘧啶核苷高效液相色谱测定法,进行胞磷胆碱钠健康志愿者生物等效性研究.方法 24例健康志愿者口服胞磷胆碱片或胶囊600mg,以阿莫西林为内标,采用高效液相色谱法测定尿嘧啶核苷经时血浓度,DAS软件计算尿嘧啶核苷主要药代动力学参数,评价两制剂的生物等效性.结果 尿嘧啶核苷回归方程为y=2.10x+0.57(r=0.9928),方法低检测限为0.05μg/mL,回收率95.57%~102.09%,日内、日间RSD均小于15%.血浆尿嘧啶核苷药后3.5 h达峰值,约为3.0μg/mL,然后逐渐降低,约8 h至基础值.AUC0-t、AUC0~∞和Cmax90%置信区间分别为85.3%~97.5%、85.3%~102.9%和89.5%~102.1%.结论 所建立方法特异性强,灵敏度高,测定结果可靠,可用于人血浆嘧啶核苷测定.胞磷胆碱钠片和胶囊符合生物等效的假设,为生物等效制剂.
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高效离子色谱法测定骨瓜提取物注射液中核苷及核苷酸有关物质的含量
目的:建立高效离子色谱法测定骨瓜提取物注射液中3种核苷及4种核苷酸有关物质的含量.方法:使用ThermoFisher色谱柱(Dionex IonPac AS16,250 mm ×4 mm),保护柱(Dionex IonPac AG16,50 mm ×4 mm);流动相为水-250 mmol·L-氢氧化钠溶液,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,柱温为35℃,紫外检测器(PDA),检测波长260 nm,进样体积为50 μL.结果:该方法可以在35 min内,同时定量测定尿嘧啶核苷、腺嘌呤核苷、次黄嘌呤核苷、胞嘧啶核苷酸、腺嘌呤核苷酸、尿嘧啶核苷酸、次黄嘌呤核苷酸;各待测物质量浓度在1.0 ~ 50.0 μg·mL-范围内线性关系良好,回归方程的线性相关系数均大于0.999 7;平均回收率(n=9)分别为尿嘧啶核苷105.7%、腺嘌呤核苷96.0%、次黄嘌呤核苷99.4%、腺嘌呤核苷酸100.1%、尿嘧啶核苷酸97.9%、次黄嘌呤核苷酸98.0%,回收率RSD分别为1.5%、0.8%、5.1%、1.3%、2.2%、2.7%.结论:该方法简单、快速、准确,可用于骨瓜提取物注射液中核苷及核苷酸的测定.