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慢性 HCV 感染者外周血中 CD56+T 细胞频数、表型和体外细胞毒功能研究
目的探讨慢性HCV感染者外周血中CD56+T细胞的频数、表型和体外细胞毒功能特征。方法采用流式细胞术检测33例慢性HCV感染者及21例健康对照者外周血CD56+T细胞的频数和细胞表面活化性受体NKG2C、CD16、NKp46和抑制性受体CD158a、NKG2A的表达水平;检测体外未刺激及K562细胞刺激作用下CD 56+T细胞毒效应( CD107a)和细胞因子分泌水平( IFN-γ和TNF-α),并分析上述3种CD56+T细胞功能指标之间的关联性。结果与健康对照相比,慢性HCV感染者外周血中CD56+T细胞在淋巴细胞中的比例明显降低( P=00.18)。 CD56+T细胞表面的活化性受体 NKG2C(P=0.015)、CD16(P=0.036)、NKp46(P=0.001)均有不同程度降低,而抑制性受体CD158a、NKG2A未发现有统计学意义的差异(P>0.05)。体外未刺激情况下,慢性HCV感染者CD56+T细胞分泌细胞因子IFN-γ和TNF -α均显著弱于健康对照组(P <0.0001);在K562细胞刺激作用下,慢性HCV感染者 CD56+T细胞CD107 a水平及分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α均呈显著降低趋势( P<0.0001),且3种功能指标表达水平密切关联(r>0.80, P<0.0001)。结论慢性HCV感染者CD56+T 细胞频数降低,细胞毒能力和重要细胞因子分泌能力均明显减弱。该结果提示显著受损的CD56+T细胞功能可能与HCV慢性持续性感染有关。
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利用噬菌体肽库筛选TNF-α表位的相关短肽
目的从噬菌体肽库筛选TNF-α相关短肽,为临床上治疗肿瘤奠定基础. 方法用可溶性TNF受体Ⅰ(sTNFRⅠ)筛选噬菌体随机12肽库,利用细胞毒效应进行生物学效应筛选,再进行单链DNA测序. 结果分别得到若干模拟跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)和模拟分泌型TNF-α(S-TNF-α)细胞毒效应的短肽,选择细胞毒效应好的模拟TM-TNF-α短肽进行人工合成,体外实验显示此肽段对S-TNF-α耐受肿瘤细胞系HL-60具有明显细胞毒效应,且主要引起靶细胞凋亡.另外,利用激光共聚焦显微镜证实该合成肽段不能诱导NF-κB发生核转位.结论获得模拟TM-TNF-α的短肽,为TM-TNF-α用于临床抗瘤治疗提供新线索.
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HIV-1早期感染者外周血中 CD56+T细胞表型和功能特征分析
目的:探讨HIV-1早期感染者外周血中CD56+T细胞表型和功能变化特点,了解该变化与疾病进展状态的相关性。方法采集HIV-1早期感染者样品53例,HIV-1阴性健康对照31例,分离外周血单个核细胞( PBMC )后,流式细胞术检测 CD56+T 细胞数量及细胞表面分子 CD16、CD161、NKB1、NKG2A、NKp46、NKG2D、NKG2C、CD158a表达水平。将PBMC与K562细胞共孵育,检测CD56+T细胞分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α的水平,以及细胞毒效应分子CD107a的水平。结果HIV-1早期感染者外周血中CD56+T细胞数量较健康对照明显减少(P=0.025),且与血浆病毒载量呈负相关(P=0.021,r=-0.316)。 CD56+T细胞表面分子CD16(P=0.003)、CD161(P=0.023)、NKB1(P=0.023)、NKp46(P=0.021)表达较健康对照显著降低,其中NKB1的表达水平与CD4+T细胞数量呈正相关(P=0.007,r=0.364),而与病毒载量呈负相关(P=0.030,r=-0.299)。 HIV-1早期感染者CD56+T细胞自发分泌IFN-γ和TNF-α以及细胞毒效应分子CD107a水平明显低于健康对照( P均<0.001),在靶细胞K562存在情况下,其杀伤能力也显著低于健康对照( IFN-γ和TNF-α:P均<0.001,CD107a:P=0.016)。结论 HIV-1早期感染者CD56+T细胞数量下降,表型发生改变,分泌细胞因子和细胞毒效应分子能力下降,提示在HIV-1感染早期CD56+T细胞即受到损伤,且与疾病进展相关。
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树突状细胞致敏的肿瘤疫苗对胰腺癌细胞的杀伤效应
目的:研究胰腺癌细胞冻融物致敏树突状细胞(DC)诱导的细胞毒性T细胞(CTL)对原代培养的自体胰腺癌细胞的杀伤作用.方法:从6例手术切除的胰腺癌组织中分离胰腺癌细胞,反复冻融获得肿瘤抗原;以该肿瘤抗原致敏外周血DC,诱导T细胞转变为CTL;采用Cr51释放法观察CTL对原代培养的自身胰腺癌细胞的杀伤活性,分别以来源于胰腺癌细胞株Panc1的肿瘤抗原致敏DC和未致敏DC刺激的CTL作为抗原对照和阴性对照.结果:实验组CTL对自身细胞的杀伤活性为69.05%±15.79%→88.05%±15.34%,抗原对照组CTL的杀伤活性为43.08%±6.92%→67.30%±8.91%,两组CTL杀伤率均显著高于阴性对照组(P<0.01);而实验组与抗原对照组相比,前者的杀伤活性显著高于后者(P<0.05).结论:胰腺癌细胞冻融物致敏的DC疫苗可以诱导T细胞产生高效的针对自体癌细胞的细胞毒效应;新鲜肿瘤组织来源的胰腺癌细胞比传代的Panc1细胞具有更好的抗原性.
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应用MTT法分析青蒿素对人癌细胞系Hella细胞的体外细胞毒作用
MTT法是一种快速、简便的能够半自动化定量分析细胞增殖及药物细胞毒作用的方法.青蒿素是从天然植物青蒿中提取的有效成分,有关文献曾报道了青蒿素的一些生物活性[1].为了探讨青蒿素的抗癌活性,我们通过体外MTT法分析检测了青蒿素对体外培养的人癌细胞系Hella细胞的细胞毒效应,现报告如下.
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慢性粒细胞白血病树突状细胞的体外无血清培养及杀瘤效应研究
目的拟建立慢性粒细胞白血病(CML)树突状细胞(DCs)体外无血清培养体系,以期将来用于CML的过继性免疫治疗.方法小牛血清(FCS)、无血清(SFM)及自体血清分别培养CML病人外周血/骨髓CD34+细胞或单个核细胞,以SCF、GM-CSF、TNF-α和IL-4(A)与GM-CSF、TNF-α和IL-4(B)两组不同的细胞因子作对照.间接免疫荧光法及流式细胞术鉴定CML-DCs表型,甲基四噻唑蓝(MTT)法测定CML-DCs刺激同种异体T细胞反应能力,G显带技术检测培养DCs携带Ph染色体比例,MTT法评价CML-DCs刺激自身T细胞杀伤自体白血病细胞效应.结果 8例CML慢性期病例,SFM条件下A组培养体系在总细胞扩增倍数及DCs比例两方面均明显优于B组,SFM同FCS体系相比无显著差异,但自体血清培养结果低于以上两种体系.CML-DCs MHC-Ⅱ类分子呈高表达(>50%),但CD83和CD86表达比例不高(10%-50%),且刺激同种异体T细胞反应能力不强.3例患者检测了培养CML-DCs Ph染色体比例,分别为100%、98% 及60%,与培养前比例基本吻合;同时以CML-DCs同自身T细胞、自体白血病细胞共孵育,测其杀伤率为38.5%±6.5%(效靶比为40∶1).结论①建立了稳定的无血清培养CML-DCs体系;②CML-DCs MHC-Ⅱ类分子显著表达,CD83和CD86表达比例不高,刺激同种异体T细胞反应能力不强;③证实此DCs携带Ph染色体,能刺激自体T细胞杀伤自身白血病细胞.
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从慢性乙型肝炎免疫和病原学特点探讨临床治疗策略
乙型肝炎病毒(HBV)严重威胁人类健康.目前全球约有4亿慢性H BV携带者,每年约有100万人死于HBV感染相关性肝脏疾病.HBV是嗜肝的非细胞毒性DNA病毒,无细胞毒效应,其导致肝损害的机制是免疫介导,即机体免疫系统活化产生病毒特异性细胞毒T细胞,并释放细胞因子等,在清除病毒感染肝细胞的同时导致局部炎症反应,损伤肝细胞.
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MHC Ⅰ类链相关基因及其产物在急性白血病中的表达及意义
人类主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因(MHCclass Ⅰ chain-related gene,MIC)属于非经典MHC Ⅰ类基因,正常情况下不表达或低表达,肿瘤恶变时表达上调,被认为是一种肿瘤相关性抗原[1].NKG2D是MIC的受体,可表达于自然杀伤(NK)细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CTL),MIC与NKG2D结合能直接启动NK细胞的杀伤活性,并作为协同刺激分子扩大CTL的细胞毒效应.
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单克隆抗体治疗高龄老年难治性淋巴瘤的护理
单克隆抗体对骨髓的抑制和对其他细胞的杀伤作用不明显,较放疗、化疗对机体的毒性小,治疗难治性恶性淋巴瘤有效率可达40%~50%[1].我科应用鼠人嵌合型抗人CD20单克隆抗体Rituximab(购自美国IDEC制药有限公司),是针对正常及恶性B淋巴细胞表面CD20抗原的一种单克隆抗体,它能特异性地与CD20抗原结合,介导补体及抗体依赖性细胞毒效应,具有直接的抗恶性B细胞增殖的作用[2],对复发的低度恶性或滤泡性淋巴瘤有较好疗效[3,4].现就单克隆抗体治疗高龄病人的护理体会报道如下.
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P2受体激动药及其作用机制的研究
早在1985年Burnstock和Kennedy曾将P2受体分为P2X和P2Y两种亚型.P2X嘌呤受体被稳定同类物α,β-meATP和β,γ-meATP强烈激活;而2-meSATP 是P2Y受体的强激动剂,α,β-meATP和β,γ-meATP活性低或无活性.此外P2X嘌呤受体被α,β-meATP选择性脱敏并被ANAPP3拮抗.P2X嘌呤受体分布在输精管、膀胱和血管平滑肌介导收缩反应;P2Y嘌呤受体则分布于豚鼠结肠带及血管内皮细胞介导舒张反应.目前,P2受体已从平滑肌和内皮细胞克隆成功,通过药理实验分析,所谓的P2X和P2Y嘌呤受体接近克隆的P2X1和P2Y1受体[1,2].采用经典的药理学分析法,继P2X和P2Y受体之后,又曾命名了P2U受体(ATP、UTP有同等效力,广泛分布)、P2T受体(血小板ADP受体,介导聚集)和P2Z受体(分布于肥大细胞和淋巴细胞,介导细胞毒效应和脱颗粒反应).P2S受体、P2R受体、P2D受体、尿嘧啶核苷酸受体、P3和P4受体也分别被报道[1,2].在这些受体中,P2U、P2Z和尿嘧啶核苷酸受体已被克隆.
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盐酸克林霉素对脂多糖抑制人牙周膜细胞生长的影响
牙周炎是感染性疾病,可以导致牙槽骨、牙骨质、牙周膜等组织成分的破坏,是成人牙齿丧失的主要原因之一.牙周膜细胞是构成牙周组织的主要细胞, 在牙周支持组织的发育、功能和再生中发挥重要作用,牙周优势菌的内毒素或称脂多糖(LPS)不仅是公认的炎症启动因子,而且对牙周组织的细胞也具有直接的细胞毒效应[1],可以抑制成纤维细胞的生长增殖及其在根面的定向移动和附着.
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肿瘤患者实施体腔热灌注并结合体外调频治疗36例的护理干预与体会
靶向微创综合治疗是提高肿瘤疗效的主要途径 ,也是维持患者生命并能有效提高生命质量的方法之一.体腔热灌注治疗方法 ,是根据肿瘤热疗原理将加热的治疗液体循环灌注于胸腔或腹腔 ,在一定时间内 ,使液体温度保持在41~45 ℃的范围 ,通过温热对癌细胞有效杀伤并遏制癌性积液和体腔内转移癌的方法.同时采用体外高频照射部位50~90 min ,对癌细胞产生直接的细胞毒效应 ,在43 ℃以上高温时对癌细胞有显著杀伤作用 ,加温可使热灌注的药物所产生的细胞毒性增强 ,使肿瘤局部血流量增多 ,从而使瘤体内的药物摄取增加 , 达到增敏增效的作用.我科2011 年11 月至2012 年11月对36 例实施体腔热灌注并结合体外高频热疗的肿瘤患者实施了微创治疗.并采用了相应的护理干预 ,提高了治疗效果 ,减轻患者的痛苦 ,现将护理干预报告如下.
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进展期胃癌围手术期磁性化疗
陈道达教授:围手术期化疗作为恶性肿瘤综合治疗措施的一部分,是20世纪80年代发展起来的一种新辅助性化疗方法.它是通过两种途径发挥治疗效果的,一是化疗药物加快癌细胞凋亡,二是高浓度化疗药物直接作用于肿瘤细胞产生细胞毒效应而起杀伤作用.其目的是缩小原发病灶,降低肿瘤的临床分期,提高手术治疗效果.自1986年起我们研制纳米(nm)级四氧化三铁磁性载体,载附抗癌药物,于1995年对进展期胃癌病人进行围手术期化疗.
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地龙肽对小鼠免疫功能的影响
目的:探讨地龙肽(LP)对小鼠特异性和非特异性免疫功能的影响.方法:LP不同剂量给正常或免疫抑制小鼠灌胃7 d,观察LP对小鼠淋巴细胞增殖反应,巨噬细胞细胞毒效应以及巨噬细胞和脾细胞产生NO的影响.结果:LP 0.1,0.5 mg/ml组明显提高淋巴细胞增殖率,增强巨噬细胞细胞毒效应,提高巨噬细胞和脾细胞分泌NO的水平(P<0.01),0.5 mg/ml明显提高免疫抑制小鼠的免疫功能(P<0.01).结论:在一定剂量下,LP具有调节免疫功能、拮抗环磷酰胺引起的免疫抑制的作用.
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氢醌对造血干细胞毒效应的研究进展
氢醌(hydroquinone,HQ),又名对苯二酚[C6H4(OH)2],是一种用途广泛的化学物质,在工业上用于抗氧化剂、显影剂及阻聚剂等.在农业上,氢醌是国内外普遍应用的土壤脲酶抑制剂,可提高尿素氮的利用率,近年来用作动物饲料脲酶抑制剂的报道逐渐增多.职业接触可见于生产氢醌、抗氧化剂、照相显影剂、油漆等生产工人及照相显影操作工、塑料稳定剂操作工、橡胶涂料工等.氢醌在自然环境中同样广泛存在,许多动植物体内均含有,在香烟的主流烟雾中含量也很高,在日常生活中可通过食品、吸烟、某些化妆品及皮肤科用药接触.
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转Wee1基因靶细胞抗CTL介导的细胞毒效应
目的:研究Wee1转基因细胞抗CTL介导的细胞毒效应及抗穿孔素抗体对抗细胞毒效应的影响.方法:体外混合NIT及淋巴细胞培养获得CTL,并测定淋巴细胞增殖指数(MTT法);采用脂质体将重组体Wee1Hu/GFP导入哺乳动物细胞NIT;以转染重组体前后的NIT为靶细胞,检测CTL介导的胞毒效应(LDH法),同时测定抗穿孔素抗体对此效应的影响.结果:混合细胞培养可诱导CTL的增殖;转染Wee1基因及加入抗穿孔素抗体NIT组发生的细胞溶解的数量少.结论:转Wee1基因靶细胞在一定程度上可抵抗CTL介导的细胞毒作用,穿孔素抗体可协同增强此抗胞毒作用.
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系统性红斑狼疮患者血清IL-18和sFas/sFasL的变化及相关性研究
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是典型的自身免疫性疾病,免疫学特 征为体内大量自身抗体的产生。近越来越 多的研究表明这些自身抗体的产生与SLE病人体内淋巴细胞凋亡紊乱有关。Fas和FasL作为凋 亡的抑制因子和诱导因子,IL -18则可直接增强FasL介导的Th1细胞毒效应,参与T淋巴细胞的凋亡发生。本研究采用ELIS A检测了45例SLE患者血清中IL-18和sFas及sFasL水平,以探讨IL-18和Fas/FasL在SLE发病 中的作用机制及IL-18和Fas/FasL相关性。
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NK细胞系细胞毒效应MTT比色法优化条件探讨
自然杀伤细胞(NK)以其独特的抗病毒、抗肿瘤活性而成为机体的第一道防线.由于NK细胞数量少,且无特异性表面标志,难以获取高纯度的NK细胞,一度成为深入研究NK细胞的障碍.
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抗人B159单抗-表阿霉素与125Ⅰ-标志物对人B淋巴瘤的体内外效应研究
本文应用抗人B细胞单克隆抗体(抗人B159单抗)与表阿霉素(EPI)和125Ⅰ示踪核素分别交联成抗人B159-表阿霉素导向药物和125Ⅰ-抗人B159单抗核素结合物,并用这两种结合物对Raji细胞的亲和力和细胞毒效应,及125抗人B159单抗标志物在荷瘤裸鼠体内的SPECT示踪扫描显像和浓集部位进行了研究,现报道如下:
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一氧化氮与血吸虫感染的研究进展
一氧化氮(NO)作为机体产生的功能多样的小分子自由基气体,在感染性疾病中既可作为一种有效的细胞毒效应分子对病原体发挥杀灭作用,同时也是一种炎症反应因子.本文综述了NO在血吸虫感染过程中的作用及与疫苗保护性免疫的关系.