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家族性房颤有个"捣蛋族长"
在有关家族性房颤的致病基因研究中,科研人员在华北找到了一个有16个房颤病人的四代大家系.通过对该家系的遗传性连锁分析,研究人员首先把致病基因定位在¨号染色体短臂末端.然后通过对该区域多个候选基因的仔细筛查,后在心肌钾离子通道基因KCNQ1中发现了"捣蛋鬼"--一个改变氨基酸编码的点突变.这个突变将KCNQ1基因的第418位腺嘌呤核苷酸变为鸟嘌呤核苷酸,编码的第140位氨基酸由丝氨酸变为甘氨酸.
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TA克隆的快速鉴定
TA克隆技术原理是Taq酶参与的PCR反应中,产物双链核酸中的3′端各多连接一个脱氧腺嘌呤核苷酸(A),与商业开发的5′端各多一个脱氧胸腺嘧啶核苷酸(T)的质粒载体,在DNA连接酶作用下,按碱基配对形成环状的完整质粒,转化细菌,质粒扩增形成克隆.由于存在载体自连的现象,TA克隆的鉴定十分必要,本文利用快速质粒提取和载体中现有的成对限制性内切酶位点,使TA克隆技术更方便实用.
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超声心动图诊断遗传性出血性毛细血管扩张症伴肺动静脉畸形一例
患者女，24岁。因活动后心悸、气促3个月就诊。胸部正侧位平片示：胸廓对称，胸廓骨骼发育正常，双肺纹理增多，双肺门大小、位置未见异常，于右肺中叶外带可见一边界不规则高密度团块影，大小约5 cm ×5 cm，边界光滑，密度均匀；心脏增大，双室为主。胸片诊断：右肺中叶占位，心室增大。体检：血压109／76 mm Hg，心率98次／min，贫血貌，口唇发绀明显，杵状指（趾）。叩诊：心脏相对浊音界向两边扩大。听诊：心前区未闻及病理性杂音，于胸骨右缘第5～7肋间可闻及连续性粗糙的杂音，收缩期明显。实验室检查：Hb 127 g／L。超声心动图检查：应用Phil-ips iE33彩色多普勒超声仪，成人心脏探头（型号S5-1，频率2.5 MHz）检查心脏示：左心房内径33 mm，左心室内径54 mm，右心室内径27 mm，超声提示：全心偏大，二尖瓣反流，未见确切心内分流，SaO2（动脉氧饱和度）51％。结合胸部正侧位X线片，彩色多普勒超声示先天性肺动静脉畸形可能。行右心声学造影：于左侧肘静脉注入声学对比剂后，见右心房室显影，约3个心动周期后见左心房、室序贯显影，房、室水平未见造影剂在左右心间交通（图1）。提示诊断：全心偏大，二尖瓣反流，肺动静脉畸形。胸部64排血管三维重建增强扫描：右肺中叶外基底段肺动脉远端分支扩张，迂曲，形成大截面约4.9 cm ×4.5 cm边界不规则分叶状团块影，增强后团块大部分明显强化，部分未见强化，与肺动脉同步强化，并可见增粗静脉引流至左心房（图2）。患者行介入弹簧圈栓塞治疗肺动静脉畸形，术后造影示栓塞部位肺动脉血流量减少，畸形引流静脉显影消失，外周SaO2从67％提高到94％。术后2 d 复查右心室声学造影示：右心室内径40 mm，三尖瓣探及少量反流，Vmax＝3.2 cm／s，PG＝42 mm Hg；房间隔中分薄弱，卵圆孔未闭。因患者与两个妹妹有长期鼻衄史，母亲中年时因“脑溢血”死亡，考虑为遗传性出血性毛细血管扩张症（HHT）患者，对其三姐妹行外周静脉血ENG、ACVRL1和SMAD4基因筛查。发现在ENG基因cDNA第207位的鸟嘌呤核苷酸突变为腺嘌呤核苷酸（c．207G＞A），但第69位的氨基酸仍为亮氨酸（p．69L＞L），为同义突变；第1004位腺嘌呤核苷酸突变为胸腺嘧啶核苷酸（c．1004A＞T），第335位谷氨酰变为亮氨酸（p．335Q＞L）（图3）。 ACVRL1基因cDNA第817位胞嘧啶核苷酸突变为胸腺嘧啶核苷酸，但第273位氨基酸未发生改变，仍为亮氨酸。 SMAD4基因序列上没有发现异常。确诊为HHT家族患者。
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腺苷的心肌保护作用机制及临床应用
腺苷(adenosine)是腺嘌呤核苷酸的代谢产物,在体内发挥着重要的生理生化效应,可由心肌细胞、血管内皮细胞及中性粒细胞等分泌释放,是组织缺血时所释放的一种内源性因子.自1985年Ely等[1]研究发现腺苷对心肌细胞有直接保护作用以来,针对腺苷心肌保护作用的研究不断深入,并在近年取得了重要的进展.笔者就腺苷的心肌保护作用及其临床应用进展作一综述.
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不同强度运动时大鼠骨骼肌能量代谢产物的变化
本研究旨在观察不同强度运动时,与能量代谢有关的骨骼肌腺嘌呤核苷酸(ATP)、磷酸肌酸(CP)、乳酸(LA)和呼吸链氧化还原的变化特点,以进一步阐明训练中运动强度这一重要因素的生理意义.雄性SD大鼠先经5周耐力训练筛选,再进行3周递增速度训练.正式实验时,随机分成6个强度组(0 m/min、18 m/min、30 m/min、42 m/min、54 m/min、66 m/min),6只/组,每组以6 m/min的增幅进行3分钟准备活动(0 m/min组为安静时处死),然后以预定强度跑3分钟后立即处死,取右腿用液氮固定,凿取腓肠肌,经冷冻干燥后制备肌肉提取液.用高效液相法测定肌肉ATP、ADP、AMP、CP、NADH和NAD+,用紫外分光法检测肌乳酸.结果表明,随着运动强度的增加,运动后即刻大鼠腓肠肌能量代谢产物的变化如下:(1)ATP浓度在18～42 m/min范围内呈下降趋势,超过42 m/min出现上升趋势,其中,42 m/min组比安静组降低(P < 0.01),54 m/min组较42 m/min组升高(P < 0.05);ADP和AMP的变化表现为波动性上升的趋势;CP浓度、能荷(EC)以及ATP/ADP的比值呈波动性下降趋势;同时,随着ATP/ADP比值的下降,AMP的生成增加,CP逐渐降解.(2)肌乳酸、NADH和NADH/NAD+比值呈波动性上升趋势,当强度大于42 m/min时NADH/NAD+明显上升,而NAD+则是上下波动,其中,54m/min组的乳酸,NADH和NADH/NAD+比42 m/min和0 m/min组显著升高(P < 0.01).(3)随ATP/ADP比值下降,NADH/NAD+比值增加,肌乳酸生成增加;肌乳酸含量随NADH/NAD+比值的升高而升高.结论:ATP、NADH、NADH/NAD+比值、肌乳酸都在42 m/min强度出现大幅度增加,提示:在30～42 m/min强度存在一个转折点,乳酸阈可能在此范围内.NADH含量和NADH/NAD+比值变化对乳酸阈的形成是重要的调节因素,而这种调节作用的根源在于机体能量状态(ATP/ADP)的变化.
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脱氧核苷酸钠含量测定方法的探讨
脱氧核苷酸钠系由鱼精蛋白或小牛胸腺中提取的脱氧核糖核酸经酶解制成,含有脱氧核糖胞嘧啶核苷酸钠(简称C)、脱氧核糖腺嘌呤核苷酸钠(简称A)、脱氧核糖胸腺嘧啶核苷酸钠(简称T)、脱氧核糖鸟嘌呤核苷酸钠(简称G).具有增强机体代谢,促进造血功能、升高白细胞作用,主要用于治疗急性白细胞减少症,对慢性白细胞减少症、再生障碍性贫血等也有一定疗效.收载于国家药品标准第九册[1],标准号为WS-10001-(HD-0884)-2002.
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咬合干扰致大鼠咬肌能量代谢产物含量变化
目的:观察咬合干扰后不同时间大鼠咬肌能量代谢产物腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)、腺嘌呤核苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)、次黄嘌呤核苷酸(inosine monophosphate,IMP)、磷酸肌酸、肌酸、乳酸及pH水平的变化,分析咬合干扰对咀嚼肌能量代谢的影响.方法:选用雄性Sprague-Dawley大鼠(220～250 g)50只,随机分为实验组(40只)和对照组(10只),实验组于右上第一磨牙粘固0.4 mm厚金属冠建立咬合干扰,并分别维持3、7、10、14 d(每个时间点各10只),对照组不施加咬合干扰.各组大鼠全麻下取双侧咬肌组织,其中5只大鼠样本加入0.4 mol/L高氯酸(10 mL/g)充分匀浆,离心、过滤后采用高效液相色谱分析ATP、ADP、IMP、磷酸肌酸、肌酸及乳酸含量,另外5只大鼠样本加入含5 mmol/L碘醋酸钠的匀浆液(10 mL/g),充分匀浆后在37 ℃恒温水浴环境中利用pH计测试pH值.结果:与对照组相比,大鼠双侧咬肌ATP含量在咬合干扰3d[右侧:(5.36±0.13) μmol/g,左侧:(5.77±0.25) μmol/g]升高(P＜0.05),7、10和14 d没有显著改变;大鼠双侧咬肌IMP[右侧:(0.21±0.03) μmol/g,左侧:(0.19±0.03) μmol/g]、肌酸[右侧:(24.76±2.94) μmol/g,左侧:(27.75 ±2.23) μmol/g]含量在咬合干扰7d升高(P＜0.05),3、10和14 d没有显著改变;大鼠双侧咬肌磷酸肌酸含量在咬合干扰7、10和14 d降低[右侧分别为:(10.70±0.71) μmol/g、(11.57±0.52) μmol/g、(10.74±1.39) μmol/g,左侧分别为:(10.05±0.57) μmol/g、(10.75±1.12) μmol/g、(10.61±1.15) μmol/g,P＜0.05],3d没有显著改变;大鼠双侧咬肌ADP、乳酸含量及pH水平在咬合干扰后各时间点均没有显著改变(P＞0.05).结论:咬合干扰导致大鼠咀嚼肌能量代谢产物含量改变,可能与咬合干扰诱发咀嚼肌疼痛、功能紊乱、肌纤维构筑改变等病理过程相关.
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TNFβ的基因多态性在汉族SLE病人中的分布特点及与其他不同种族人群的比较
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种较为常见的自身免疫性疾病,包括遗传因素在内的多种因素与SLE的发病相关.TNFβ的基因定位于MHCⅢ类基因座位内,它的第一内含子中含有单碱基点突变造成的基因多态性.由于转录起始位点下游第252位点的鸟嘌呤核苷酸G被腺嘌呤核苷酸A替代,使限制性内切酶NcoⅠ的识别序列发生变化,致使被腺嘌呤核苷酸A所替代的序列不能被NcoⅠ识别并切断.鸟嘌呤核苷酸G存在的基因称为TNFβ*1,腺嘌呤核苷酸A存在的基因称为TNFβ*2[1].由于TNFβ的重要生物学作用及其基因的特殊位置,TNFβ的基因多态性与SLE的发病之间的关系受到普遍的重视.
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大黄素对豚鼠结肠带细胞内腺嘌呤核苷酸的影响
大黄素(Emodin)是中药大黄(Rhubarb)有效成分蒽醌类衍生物之一。我们已报道，大黄素通过促进豚鼠结肠带平滑肌细胞膜电位去极化，增强细胞的电兴奋性和收缩活动；大黄素作用受KATP通道特异激动剂cromakalim的抑制，提示其作用与抑制KATP通道活性相关。本文进一步研究了大黄素对豚鼠结肠带细胞内ATP、ADP和AMP的影响。
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危重病人氧动力学紊乱特征和处理
缺氧是生命垂危的重要标志.只有时刻维持充分氧供和有效的氧利用,组织细胞才能完成生物氧化过程,合成ATP,为机体的生物学活动提供足够的能量.由于氧不同于糖、脂肪和蛋白质,不能象这些营养物质那样可被储存,一旦氧供或氧利用障碍,ATP合成立即受阻,机体的供能很快就会发生危机,从而导致细胞膜磷脂降解、细胞内酸中毒、氧自由基合成增加及细胞内腺嘌呤核苷酸丢失引起细胞生物能源衰竭,轻则器官功能不全,重则导致死亡.因此缺氧是生命垂危重要的标志.氧被吸入机体到氧被细胞利用、赖以动脉血的氧合、组织细胞对氧的摄取和利用,任何环节发生障碍均可导致组织氧合功能紊乱.
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亚低温对脓毒症大鼠肝肺组织的保护作用
目的 测定亚低温(MHT)情况下脓毒症大鼠肝组织能量代谢和肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的变化, 并结合肝细胞和肺组织超微结构的改变,初步探讨MHT能否减轻脓毒症大鼠组织损伤的程度.方法 24只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组) 、内毒素组(LPS组) 和MHT组 ,应用高效液相色谱法及生化法分别测定各组肝组织腺嘌呤核苷酸及乳酸水平,应用RT-PCR方法分别测定各组肺组织TNF-α mRNA表达变化,并在透射电镜下观察肝细胞、肺组织超微结构的变化.结果 LPS组大鼠肝组织(湿重)腺苷酸水平为ATP (4.093±0.424) μmol·g-1 ,ADP (1.331±0.136)μmol·g-1 ,AMP (1.331±0.312)μmol·g-1;MHT组大鼠肝组织(湿重)腺苷酸水平为ATP( 4.519±0.028)μmol·g-1 ,ADP(1.483±0.108)μmol·g-1,AMP(1.544±0.301)μmol·g-1;LPS组和MHT组均较NC组腺苷酸水平ATP (4.990±0.455)μmol·g-1, ADP(1.632±0.181)μmol·g-1,AMP (1.737±0.407)μmol·g-1降低, 尤以LPS组明显.MHT组肝组织腺苷酸水平较LPS组明显升高;MHT组肝乳酸含量为每克蛋白(1.424±0.213)mmol,明显低于LPS组的每克蛋白(1.676±0.267)mmol(P《0.05),而与NC组差异无统计学意义[vs 每克蛋白(1.379±0.314) mmol,P》0.05].LPS组大鼠肺组织TNF-α mRNA 1、2和3 h表达分别为(1.029±0.055)、(1.132±0.068)和(1.107±0.044);MHT组大鼠肺组织相应时点TNF-α mRNA表达分别为(0.835±0.041)、(1.056±0.037)和(1.056±0.032),均较NC组肺组织相应各时点TNF-α mRNA 表达(0.625±0.009,0.631±0.007,0.612±0.011)明显增加(P《0.05),尤以LPS组明显.MHT组肺组织TNF-α mRNA较LPS组表达明显减少(P《0.05).透射电镜下可见MHT组肝细胞及肺组织超微结构损伤明显轻于LPS组.结论 MHT可减缓脓毒症大鼠肝组织能量的消耗,减轻肝组织损伤,还可减少脓毒症大鼠肺组织TNF-α mRNA的表达,减轻肺组织炎性损伤,MHT可作为防治脓毒症的一种新方法.
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保存时间和温度对血清腺苷脱氨酶活性测定的影响
腺苷脱氨酶(ADA)是腺嘌呤核苷酸代谢的关键酶,能特异性催化腺嘌呤核苷生成次黄嘌呤,终氧化成尿酸排出体外,是一种与免疫有关的酶,广泛分布于人体组织中,以淋巴样组织含量高,它与机体的免疫功能有重要关系.2008年5～6月,为确保结果的真实性,我们就全血标本的保存时间和温度对ADA活性检测结果的影响进行探讨.现报告如下.
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亚低温对脓毒症大鼠肝组织能量代谢影响的研究
目的通过测定亚低温情况下脓毒症(sepsis)大鼠肝组织腺苷酸及乳酸含量改变,并结合肝细胞超微结构的变化,初步探讨亚低温能否减轻脓毒症大鼠组织损伤的程度.方法24只Wistar大鼠均分为正常对照组(NC组)、内毒素组(LPS组)、亚低温组(MHT组),应用高效液相色谱法及生化法分别测定各组肝组织腺嘌呤核苷酸及乳酸水平,并在透射电镜下观察肝细胞超微结构的变化.结果内毒素组大鼠肝组织腺苷酸水平[ATP(4.093±0.424),ADp(1.331±0.136),AMP(1.331±0.312)μmol/g·wet]和亚低温组大鼠肝组织腺苷酸水平[ATP(4519±0.028),ADP(1.483±0.108),AMP(1.544±0.301)μmol/g·wet]均较正常对照组腺苷酸水平[ATP 4.990±0.455,ADP 1.632±0.181,AMP 1.737±0.407 mol/g·wet]降低,尤以内毒素组明显.亚低温组肝组织腺苷酸水平较内毒素组明显升高;亚低温组肝乳酸含量为[(1.424±0.213)mmol/g·prot,明显低于内毒素组(1.676±0.267)mmol/g·prot,P＜0.05],而与对照组比较差异无显著性[(1.379±0.314)mmol/g·prot,P＞0.05];电镜下可见亚低温组肝细胞超微结构损伤明显轻于内毒素组.结论亚低温可减缓脓毒症大鼠肝组织能量的消耗,减轻肝组织损伤,可考虑作为防治脓毒症的一种新方法.
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犬单侧膈神经离断后对通气功能及呼吸肌蛋白质、腺嘌呤核苷酸含量的影响
目的:探讨实验犬单侧膈神经离断后通气功能与呼吸肌蛋白质、腺嘌吟核苷酸含量变化之间的关系.方法:建立离断单侧膈神经的实验犬模型,测量膈神经离断前、后及离断后1,2个月犬的通气功能及呼吸肌中蛋白质及腺嘌呤核苷酸含量.结果:通气功能在离断后有明显下降,于1个月后基本恢复;犬的膈肌蛋白质、总腺苷酸含量在神经离断后下降,肋间肌蛋白质含量呈上升.结论:犬单侧膈神经离断后通气功能的代偿与呼吸肌中蛋白质、腺苷酸含量变化一致.
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犬膈肌起搏后疲劳膈肌腺嘌呤核苷酸、SOD、MDA含量及线粒体改变
目的探讨膈肌起搏后膈肌疲劳的发生机制.方法电刺激犬膈神经复制膈肌疲劳模型,测定疲劳前后膈肌ATP、ADP、AMP、AXP、SOD、MDA含量,同时观察膈肌线粒体的形态变化.结果疲劳后ATP、ADP、AXP、SOD含量低于疲劳前,MDA含量高于疲劳前,AMP水平无显著差异.疲劳膈肌线粒体出现肿胀、嵴模糊、少数线粒体空泡变性等可逆性变化.结论膈肌细胞ATP过度消耗及合成障碍,直接供能物质减少以及氧自由基对亚细胞结构损伤可能是膈肌起搏后膈肌疲劳发生的原因.
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肾脏缺血再灌注损伤的分子机制
肾脏维持正常的重吸收功能依赖于充足的血供，肾脏缺血、肾毒性药物等均可引起缺血性肾损伤。肾脏缺血后，即刻出现细胞代谢和功能变化，并随着时间的推移呈进行性加重。缺血早期的损伤是可逆的，再灌注后机体会自行修复损伤。随着缺血时间的延长，近端小管细胞和血管内皮细胞的结构和功能发生不可逆的损伤：细胞骨架改变、腺嘌呤核苷酸代谢障碍、细胞内钙离子稳态的改变、细胞与细胞间或细胞与基质间的联系丢失、活性氧自由基的形成等，终会引起肾小管上皮细胞坏死脱落阻塞肾小管。再灌注虽然对肾功能恢复而言是必须的，然而由于肾脏缺乏侧支循环，突然恢复血供却会引发一系列不良反应，对肾脏造成远期损害。这些不良反应是多因素的，目前大多研究认为，内质网应激、过多的活性氧分子产生以及炎症因子是主要原因。
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高效离子色谱法测定骨瓜提取物注射液中核苷及核苷酸有关物质的含量
目的:建立高效离子色谱法测定骨瓜提取物注射液中3种核苷及4种核苷酸有关物质的含量.方法:使用ThermoFisher色谱柱(Dionex IonPac AS16,250 mm ×4 mm),保护柱(Dionex IonPac AG16,50 mm ×4 mm);流动相为水-250 mmol·L-氢氧化钠溶液,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,柱温为35℃,紫外检测器(PDA),检测波长260 nm,进样体积为50 μL.结果:该方法可以在35 min内,同时定量测定尿嘧啶核苷、腺嘌呤核苷、次黄嘌呤核苷、胞嘧啶核苷酸、腺嘌呤核苷酸、尿嘧啶核苷酸、次黄嘌呤核苷酸;各待测物质量浓度在1.0 ～ 50.0 μg·mL-范围内线性关系良好,回归方程的线性相关系数均大于0.999 7;平均回收率(n=9)分别为尿嘧啶核苷105.7％、腺嘌呤核苷96.0％、次黄嘌呤核苷99.4％、腺嘌呤核苷酸100.1％、尿嘧啶核苷酸97.9％、次黄嘌呤核苷酸98.0％,回收率RSD分别为1.5％、0.8％、5.1％、1.3％、2.2％、2.7％.结论:该方法简单、快速、准确,可用于骨瓜提取物注射液中核苷及核苷酸的测定.
