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用遗传操纵防治蚊媒的研究进展
近年,由于蚊媒对杀虫剂的抗药性等多种原因,致使现有蚊媒防治措施的实施受到限制.因而人们把蚊媒病的防治策略转到了遗传操纵上,其目的是减少和替代目标种群,改变其作为疾病媒介的特性.早在30多年前研究者就在遗传防治方面展开了研究,通过改变媒介昆虫的染色体,产生大量绝育雄虫然后将其释放到野外,以控制种群数量,达到防治目的.但是,由于实践操作上的限制而被否定.近年来,随着分子生物学技术的发展,遗传防治被赋予了新的涵义,例如利用转基因技术,对媒介昆虫进行基因转化,定向地改变生物学性状,培育对病原体不易感、自身繁殖能力或传媒能力下降、对杀虫剂敏感性增加等性状的新型转基因昆虫,然后释放至自然界,终达到控制危害的目的[1].
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医学基因组学与临床病理应用学习班简介
随着临床肿瘤个体化诊疗及国际基因组学和转录组学的飞速发展,基因转化医学领域在肿瘤治疗方面显示出明确的疗效并对临床病理学提出了迫切的要求.美、英、法分别于2006年依托临床病理平台启动了癌症基因组(TCGA)计划,美国临床肿瘤学会大会(ASCO)连续两年把基因转化医学作为临床肿瘤治疗的会议主题.
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EB病毒潜伏膜蛋白LMP1有关信号传导通路的研究进展
EB病毒的致癌性与细胞源性基因和潜伏感染基因有关,其中潜伏膜蛋白(latent membrane protein,LMP)家族LMP1、LMP2A、LMP2B可干扰信号传导通路并诱导B细胞转化.在EB病毒潜伏感染期所表达的核蛋白和膜蛋白中,LMP1因为能够诱导啮齿动物纤维母细胞系的癌基因转化而引起人们的广泛兴趣.人们发现LMP1高表达与细胞高活性之间有密切关系,如纤维母细胞系癌基因转化、抗凋亡蛋白上调和细胞表面标志及细胞因子产生、上皮细胞分化抑制等[1].LMP1能使啮齿动物的成纤维细胞永生化,失去接触抑制功能,锚定非依赖性生长并对裸鼠产生致瘤性[2].自1995年以来,关于LMP1信号传导的研究取得了重要进展,然而LMP1是通过何种途径引起这些效应,目前尚未完全明了,其信号传导过程仍然是目前研究的重要课题.
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黑曲霉菌pyrG基因的克隆与黑曲霉菌同源转化系统的建立
黑曲霉菌(Aspergillus niger)是一种不产生黄曲霉毒素的丝状真菌,它有生长迅速、易于培养、可大量产生分泌性蛋白质的特点,因此它除了在生产各种真菌代谢物及酶类的发酵工业上被广泛应用外,在基因工程中作为宿主菌生产蛋白质产物方面也受到很大重视和应用。为了将待表达的基因导入宿主菌,首先需要建立一个稳定有效的基因转化系统。以乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶(pyrG)基因作为标志基因并以该基因的缺陷株真菌作为受体菌的转化系统已被证明是一种十分行之有效的基因转化系统。乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶是尿嘧啶核苷酸合成中一种关键性酶,缺乏该酶的pyrG缺陷株不能在不含尿嘧啶核苷的培养基上生长。通过基因转化,向其导入含pyrG基因的质粒,可使其获得在不含尿嘧啶核苷培养基上生长的能力。如果将要导入的基因连接在该质粒上,此时pyrG可作为基因是否导入的标志。我们首次从黑曲霉菌ATCC 12049野生型菌株的基因文库中克隆获得全长pyrG基因,并在此基础上构建了表达性质粒载体,建立了pyrG基因为标志基因,以同型黑曲霉菌pyrG基因缺陷株为受体菌的同源基因转化系统。
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腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA对肺癌A-549细胞抑制作用的实验研究
鸟氨酸脱羧酶(ODC)是多胺生物合成途径中的关键酶和限速酶.许多肿瘤促进剂、诱导剂在诱发组织癌变的过程中,伴有ODC活性的异常升高,在一些癌基因转化的细胞系及几乎所有的动物肿瘤中,也有ODC基因表达的异常[1].ODC作为多胺生物合成途径中的第一个限速酶,也是活性低的酶,可催化L-鸟氨酸生成腐胺.有报道,ODC的含量在许多肿瘤中增高,并与肿瘤的复发有一定的关系[2].
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人慢性粒细胞白血病干细胞被确认
据2004年12月16日<中国医学论坛报>报道,中国医学科学院组织工程中心赵春华教授领导的863课题组成功地找到了人慢性粒细胞白血病(慢粒)干细胞,并证实了慢粒癌基因突变发生在比造血干细胞更为原始的干细胞水平.这一发现加深了人们对慢粒发病机制的理解,明确了白血病治疗上的一个直接、有效的靶点,有助于清除可导致白血病复发的微小残留病变,并可能成为根治白血病的突破口.随着干细胞生物学研究的日趋成熟,肿瘤学家提出肿瘤可能源于恶性增殖的母细胞,即"肿瘤干细胞".通常人们认为慢粒是造血干细胞水平发生的克隆性疾病,而"慢粒肿瘤干细胞"却源于慢粒患者骨髓中分离出的表型为血液血管干细胞群体,它已表达BCR/ABL肿瘤基因.在单细胞水平上证实该细胞群体具有成血管内皮细胞和造血的潜能,且可以在健康小鼠体内复制出慢性粒细胞白血病.慢粒肿瘤干细胞群体的分离确认,证实了慢粒的基因转化发生在比造血干细胞更为原始的血液血管干细胞水平上.
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Bax α高表达PC12细胞系的建立及(-)黄皮酰胺抗细胞凋亡作用机制的研究
目的用Bax α高表达的PC12细胞研究了(-)黄皮酰胺的抗细胞凋亡作用.方法先将Bax α cDNA从原核载体pBluescript SK克隆到真核载体pcDNA3.用脂质体转染的方法将pcDNA3-Bax α导入PC12细胞.以6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导Bax α高表达PC12细胞的凋亡.结果 (-)黄皮酰胺(0.1~10 μmol·L-1)可使细胞凋亡率显著降低.结论 (-)黄皮酰胺可以抑制细胞凋亡,对神经退行性病变有一定应用前景.
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神经节苷脂与脑缺血性疾患
神经节苷脂(gangliosides,Ggs)是一类含唾液酸的糖鞘脂,参与细胞膜上细菌毒素、病毒等受体的组成,并在细胞分化、黏附、癌基因转化、抑制肿瘤生长[1]、调节免疫反应、脊神经突触传递及细胞凋亡[2]等方面起作用.近来发现Ggs亦参与介导HIV-1入侵的细胞表面多分子复合体的组成[3].外源性Ggs可诱导体外神经分化和体内神经修复,因此对于多发性神经疾病(polyneuropathy)具有潜在治疗价值.
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临床各种体液标本中神经节苷脂变化意义的研究进展
神经节苷脂(gangliosides,Ggs)是一类含唾液酸的糖鞘脂,广泛分布于哺乳动物神经组织及以外的器官,参与细胞膜细菌毒素、病毒和糖蛋白受体结构的组成,在细胞分化、黏附、癌基因转化、调节免疫反应、脊神经突触传递以及细胞凋亡等方面均起作用[1,2].许多疾病Ggs的含量和组成均有明显变化,可为疾病发病机制、预后及诊断提供依据.
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超声在心血管疾病基因治疗中的应用
心血管疾病仍是目前发病率和死亡率较高的疾病之一.近年来,随着疾病的分子生物学机制研究的进展,已经发现许多疾病与基因有关,基因治疗为心血管疾病提供了一个新的治疗方向,将治疗基因有效地转染到靶细胞仍是目前研究的重点.然而,目前实验中常用的病毒、脂质体等介导的基因转化的安全性、有效性及靶向性仍不尽人意,直接插管至局部又势必造成机体创伤,成为基因治疗应用于临床中的障碍.随着对超声的生物学效应的研究及声学造影剂的应用,超声在基因治疗中的应用显示了良好的前景.
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重组乳酸杆菌中A组轮状病毒VP7基因表达
目的 扩增A组轮状病毒VP7基因,构建pEDM27/5-VP7重组质粒,转化乳酸杆菌并分析VP7蛋白的表达及活性.方法 通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得目的 基因VP7,纯化后与pEDM27/5载体进行连接,转化乳酸杆菌,乳糖进行诱导表达,分别于4,8,12 h后,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹技术(Western blot)对产物进行分析测定.结果 A组轮状病毒经RT-PCR扩增后,1%琼脂糖电泳检测可见一条约1.0 kb的特异性条带,与预期目的 基因(VP7基因)大小相符;SDS-PAGE和Western-blot杂交分析发现,经乳糖诱导4,8,12 h后分别可见一条分子量约为28 kD蛋白带表达,经扫描分析,诱导后表达蛋白分别约占菌体总蛋白的2.30%,5.12%,5.38%,且随着时间变化而持续表达增加,并能与抗A组轮状病毒VP7蛋白特异结合.结论 重组乳酸杆菌持续表达免疫活性A组轮状病毒VP7蛋白,为进一步研究乳酸杆菌作为轮状病毒基因工程疫苗的表达载体提供了基础依据.
关键词: A组轮状病毒 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 乳酸杆菌 基因转化 -
转基因轮状病毒疫苗植物表达载体的构建及GUS基因表达
目的选用植物细胞表达轮状病毒结构蛋白,拟构建有效植物细胞表达系统.方法利用PT-PCR扩增A组轮状病毒外壳蛋白VP4基因片段,经双酶切后与植物表达载体连接,转化感受态细菌TG1.利用地高辛标记探针进行斑点杂交检测,筛选出阳性克隆,拟用该克隆转化马铃薯细胞,研制新型轮状病毒疫苗.本研究还利用β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因转化马铃薯细胞.结果 A组轮状病毒SA11株VP4基因产物大小与设计相同,为960bp.在被检测的未知载体中,有四个显紫色斑,可判定其为带有VP4 cDNA的转化载体.用肉眼或显微镜可观察到马铃薯组织细胞中的蓝色物质.结论在转基因植物组织器官中观察到GUS的活性,获得外源基因转化的条件.拟用本研究构建的表达载体转化马铃薯细胞,研制新型轮状病毒疫苗.
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转基因植物在疫苗等药物生产中的应用
植物基因转化是利用分子生物学和基因工程技术,将外源基因插入到受体植物的基因组,并使其在后代植物中得以表达的过程.随着分子生物学技术的高速发展、植物基因表达调控的深入研究和植物细胞培养及再生方法的完善,人类在成功改变植物遗传性状的同时,利用转基因植物作为人类所需昂贵药品的廉价的"生产工厂".近的研究表明,将细菌性和病毒性病原体抗原的编码基因,导入植物细胞,能够表达出较好保留天然免疫原性的抗原,这些研究结果为转基因植物作为疫苗等药品的生产系统提供了良好的基础[1].
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表达乙肝病毒表面抗原人参细胞系统的建立
目的建立乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人参细胞表达系统.方法构建含有HBsAg基因的植物细胞表达载体质粒pBIBSb.采用农杆菌感染人参细胞的方法,经农杆菌培养、农杆菌与受体细胞共培养、受体细胞的脱菌培养以及转化体细胞的选择培养后,筛选在G418抗生素培养基上正常生长的细胞株.应用ELISA方法检测抗性细胞株的HBsAg表达;提取基因组DNA进行PCR扩增反应.结果质粒pBIBSb的酶切结果正确.经G418抗生素筛选得到8株正常生长的细胞株,其中5株能够表达HBsAg,提取基因组DNA进行PCR扩增反应,得到大小约700bp的扩增片段.结论获得了整合HBsAg基因,并能够稳定表达HBsAg的人参细胞表达系统.
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膜糖脂与恶性肿瘤
膜糖脂是存在于细胞质膜和内膜的糖脂,并以鞘糖脂类的神经节苷脂(Ganglioside,Gls)为主。近年来的研究表明,不论是化学致癌物诱导的、还是病毒癌基因转化的肿瘤细胞,其膜糖脂的组成、数量以及在膜上的分布均发生特异性的改变。现将膜糖脂与恶性肿瘤的关系作一简要综述。1 恶性肿瘤中膜糖脂的异常表达1.1 膜糖脂合成受阻 Gls合成受阻的原因是某一种糖基转移酶的活性由于致癌转化而降低或丧失。结果是正常细胞中应有的Gls减少或丧失,同时还有前体物质的堆积[1]。在早期的研究中,比较了培养的正常成纤维细胞与病毒转化的成纤维细胞的鞘糖脂组成,结果发现转化细胞的糖脂谱较为简单,这是由于一个或几个糖基转移酶受阻,不能(或不能完全)合成较高级糖脂的缘故。典型的例子包括仓鼠BHK-21细胞中GM3合成受阻(唾液酶转移酶I被阻断)。小鼠成纤维细胞中较高级Gls的合成受阻(GalNAc转移酶被阻断)。
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婴幼儿轮状病毒VP7基因表达产物生物学活性研究
.结论 重组乳酸杆菌表达的VP7蛋白具有良好的生物学活性;可用于研制开发轮状病毒基因工程疫苗.
关键词: 婴幼儿轮状病毒 pEDM27/5载体 乳酸杆菌 基因转化 -
药物治疗后乙型肝炎病毒基因类型转化分析
目的 探讨乙型肝炎病毒药物治疗后基因类型转化情况.方法 对2004年我院肝病门诊103例已作过乙型肝炎病毒基因分型的患者,分别进行拉米夫定和干扰素治疗,治疗停药一年后,复检乙型肝炎病毒基因类型.结果 103例病人中,65例用拉米夫定治疗,29例用干扰素治疗,9例用其它核苷类药物治疗,停药后复查患者基因类型,除5例未分析出结果外,98例患者通过药物治疗基因类型均未改变.结论 乙型肝炎病毒不管是否经过药物治疗,其基因类型在一定时期内是不会发生基因类型改变的.
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椎间盘退行性变基因治疗的研究进展
基因治疗即通过人工方法将一段特定的遗传信息物质DNA导入人体细胞以预防和治疗人体疾病.自20世纪70年代开展基因治疗的研究以来,已取得累累硕果.在肌肉骨骼系统,亦有滑膜细胞、软骨细胞、肌腱、韧带、半月板、肌肉骨组织基因转化成功的报道.种种情况表明:基因治疗在肌肉骨骼系统有巨大的应用潜能.
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逆转录病毒载体介导HPV16E7对人关节软骨细胞的转化及其生长特性
目的研究HPV16E7(human papillomavirus 16 E7) 基因片段对人关节软骨细胞的转化作用以及转化细胞的生长特性.方法利用含HPV16E7基因的逆转录病毒载体pLXSN转染人关节软骨细胞,检测HPV16E7基因的整合与表达,并用生长曲线、血清依赖试验,电镜及流式细胞仪细胞周期时相观察,了解转化细胞与正常软骨细胞的生长特性.结果挑选出了能够在体外长期培养的经HPV16E7转化的细胞克隆,已传代50代,PCR及RT-PCR证实HPV16E7已与宿主细胞基因组成功整合及转录,转化细胞的生长速度要高于正常软骨细胞,二者都对血清有较大程度的依赖,转化细胞的核质比大,核仁明显,S期细胞数显著高于正常软骨细胞.结论经HPV16E7基因转化的人关节软骨细胞增殖能力强,可连续传代达50代.
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农杆菌介导鼠源轮状病毒vp4基因转化马铃薯条件优化研究
目的获得马铃薯再生和农杆菌介导的遗传转化体系.方法以马铃薯品种"台湾红"为受体材料,对其再生和农杆菌介导的遗传转化体系进行了研究.结果诱愈培养基为MS+0.1 mg/L 2,4-D+1 mg/L BA, 出芽培养基为MS+1 mg/L ZT+ 5.0mg/L GA3,卡那霉素浓度为50 mg/L,农杆菌液浓度为A600=0.5.通过该体系将一鼠源轮状病毒外壳蛋白基因vp4导入马铃薯中,获得了具卡那霉素抗性的转化植株.经PCR验证,外源基因已导入马铃薯基因组中.结论获得相对高效的马铃薯遗传转化体系,并成功地将外源基因转入马铃薯中.