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萎缩性胃炎病人组织多胺水平的研究
目的:研究萎缩性胃炎粘膜组织多胺含量的变化.方法:通过胃镜取检,对萎缩性胃炎、胃癌及正常胃粘膜组织的多胺含量利用高压液相进行检测.结果:III型肠化的多胺含量与正常胃粘膜相比显著增高(P＜0.05).结论:萎缩性胃炎的肠化类型足影响其多胺水平变化的关键;III型肠化的细胞增生较I、II型肠化更活跃.
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四君子汤多糖对小肠上皮细胞迁移多胺信号通路钙离子调控的影响
目的:观察四君子汤多糖对小肠上皮IEC-6细胞迁移多胺信号通路钙离子调控的影响,探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制.方法:在IEC-6细胞实验中,设正常对照组,阳性对照组,四君子汤多糖低、中、高剂量组(40、80、160mg/L);负荷实验则设模型组(d-二氟甲基鸟氨酸,DFMO),各用药组在加受试药同时加入DFMO;划痕法制造细胞迁移模型;相差倒置显微镜观察细胞迁移情况;HPLC法测定细胞内多胺(精脒和精胺)含量;RT-qPCR和Westem Blot法分别检测瞬时受体电位通道1(TRPCl) mRNA和蛋白表达;Western Blot法检测磷脂酶C-γ1 (PLC-γ l)蛋白表达;酶联免疫法检测三磷酸肌醇(IP3)含量;流式细胞仪检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]cyt);无钙培养条件是以不含钙离子的细胞培养液代替常规的含钙细胞培养液.结果:与正常对照组比较,四君子汤多糖各剂量组可促进细胞迁移、增加细胞内精脒和精胺含量、提高TRPC1 mRNA及蛋白表达、提高PLC-γ/1蛋白表达和IP3含量、增加[Ca2+]cyt(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,四君子汤多糖各剂量组可逆转DFMO所致的细胞迁移抑制、细胞多胺含量降低、TRPC1 mRNA和蛋白表达降低、PLC-γ 1蛋白表达和IP3含量降低、[Ca2+]cyt降低(P＜0.05,P＜0.01);与正常对照组(含钙培养)比较,无钙培养可致细胞迁移抑制(P＜0.01);与正常对照组(无钙培养)比较,各剂量四君子汤多糖可改善无钙培养所致的细胞迁移抑制(P＜0.05,P＜0.01),但不能使细胞迁移恢复正常水平.结论:四君子汤多糖促进细胞迁移与其作用于多胺调控信号通路有关,其中对Ca2+调控是其关键指标.
关键词： 四君子汤多糖 小肠上皮细胞(IEC-6) 细胞迁移 多胺 钙调控 -
白术提取物对IEC-6细胞迁移过程多胺信号通路钙离子调控的影响
目的:考察白术提取物(AMK)对小肠上皮IEC-6细胞迁移过程多胺介导信号通路中钙离子调控的影响,探讨白术促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制.方法:在刀片划痕法细胞迁移模型上观察白术提取物对细胞迁移的影响;流式细胞仪检测细胞质游离钙离子水平([Ca2+]cyt);荧光定量PCR法检测钙通道蛋白瞬时受体电位阳离子通道1 (TRPC1) mRNA表达;Western Blot法检测TRPC1蛋白表达.结果:①白术提取物(100mg/L和200mg/L,下同)能促进IEC-6细胞迁移、增加[Ca2+]cyt、提高TRPC1 mRNA和蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).②白术提取物可逆转多胺合成抑制剂(DFMO)所致的细胞迁移抑制、[Ca2+]cyt降低、TRPC1 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01).③若去除了细胞外的Ca2+(使用无Ca2+培养液),则不但空白对照组出现显著的细胞迁移抑制(P＜0.01),且白术提取物促进细胞迁移的作用程度也明显弱于使用含Ca2+培养液时(P＜0.01).结论:白术提取物促进小肠上皮细胞迁移的作用与影响多胺介导信号通路中钙离子调控有关,主要作用途径可能是通过促进细胞外Ca2+内流而增加[Ca2+]cyt,另一较弱的作用途径可能是增加细胞内钙库释放Ca2+.
关键词： 白术 多胺 细胞迁移 细胞质游离钙离子 瞬时受体电位阳离子通道1 -
加味丹参饮对大鼠心肌缺血再灌注损伤SSAT活性的影响
目的 观察加味丹参饮对SD大鼠心肌缺血再灌注损伤(IRI)模型精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)/多胺通路的影响,探讨其抗IRI的机制.方法 结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min再灌注90 min建立大鼠心肌IRI模型.实验大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和加味丹参饮组,每组10只.TTC染色测定大鼠心肌梗死面积,ELISA检测大鼠心肌组织SSAT含量,RT-PCR和Western blot分别检测大鼠心肌组织SSAT mRNA和蛋白表达,HPLC检测大鼠心肌组织多胺(腐胺、精脒、精胺)含量.结果 与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积、SSAT含量增加,SSAT mRNA和蛋白表达升高,多胺含量降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,加味丹参饮组大鼠心肌梗死面积、SSAT含量减少,SSAT mRNA和蛋白表达降低,多胺含量升高(P<0.05,P<0.01).结论 加味丹参饮可能通过调节SSAT/多胺通路,增加心肌细胞多胺含量,从而对大鼠心肌IRI发挥保护作用.
关键词： 加味丹参饮 心肌缺血再灌注损伤 多胺 精脒/精胺乙酰转移酶 大鼠 -
肿瘤患者尿液多胺检测结果分析
恶性肿瘤的发病率与死亡率已在我国疾病中占第二位.多年来,国内外许多学者对恶性肿瘤的早期诊断进行了多方面的探讨,近100多种肿瘤标志物相继应用于临床的诊治.
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鸟氨酸脱羧酶抗酶-1过表达促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡
目的 探讨上调鸟氨酸脱羧酶( ODC)抗酶-1( AZ-1)对非小细胞肺癌细胞系A549多胺代谢酶表达和细胞凋亡的影响.方法 制备靶向提高人源性AZ-1表达的pcDNA3. 1-HOAZ-1质粒,用其与空载质粒pcDNA3. 1(-)分别转染A549细胞,并设立未经任何处理的空白对照组,48 h后分别收集总RNA和蛋白质,通过反转录聚合酶链反应和蛋白质印记分析分别检测AZ-1、ODC和鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂-1( AZIN-1)的表达;同样的处理条件下应用流式细胞计量术检测细胞凋亡.结果 在转染pcDNA3. 1-HOAZ-1质粒后,ODC表达被明显抑制,AZIN-1的表达调节不明显;过表达 AZ-1引起细胞凋亡增加( P<0. 05) .结论 过表达 AZ-1能抑制 ODC表达和促进A549细胞凋亡.
关键词： 鸟氨酸脱羧酶抗酶-1 鸟氨酸脱羧酶 多胺 非小细胞肺癌细胞 -
多胺的合成代谢与肿瘤治疗
多胺合成代谢关键酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)与肿瘤的发生和转移密切相关.现有的ODC和AdoMetDC的抑制剂在临床实验中毒不良反应大或疗效不佳,将抑制剂和其他药物联用或通过计算机与实验相结合的方式开发小分子抑制剂有望为肿瘤治疗提供新的思路.
关键词： 多胺 合成代谢 肿瘤治疗 鸟氨酸脱羧酶 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 -
外源多胺对大鼠再生肝细胞鸟氨酸脱羧酶基因转录的调节
目的 研究天然多胺(腐胺、精脒和精胺)对大鼠再生肝细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因转录的调节,探讨多胺在肝再生中的作用.方法 大鼠部分肝切除术诱导再生肝,采用原位杂交技术分析ODC mRNA的表达量,外源多胺(溶于0.9%NaCl)的处理用皮下注射法.结果 外源多胺处理后,再生肝ODC mRNA水平的变化趋势与对照组相似,但不同种类、剂量的多胺,结果差异明显.在所观察到的整个肝再生期间,高剂量腐胺(20 mg/kg体重)处理组mRNA水平始终低于对照组,特别在部分肝切除后2、4和10 h与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05);低剂量(0.02 mg/kg体重)的腐胺处理组,只在4 h和12 h显著高于对照组.高剂量精脒(0.15 mg/kg体重)处理组的ODC mRNA水平始终低于对照组(在10 h例外);而低剂量(0.03 mg/kg体重)处理组则不同,ODC mRNA水平表现出先抑制(在2 h)后促进(在4 h和6 h)的特点.精胺的作用与精脒相似.结论 不同浓度的多胺(主要是精脒和精胺)对大鼠再生肝细胞ODC基因转录存在着反馈调节作用.
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外源多胺对大鼠早期再生肝鸟氨酸脱羧酶蛋白水平的调节
目的 研究多胺(腐胺、精脒和精胺)对大鼠再生肝鸟氨酸脱羧酶(ODC)蛋白水平的调节,分析多胺在肝再生中的作用.方法 外源多胺(溶于0.9%NaCl)皮下注射雄性SD大鼠(180～220 g),部分肝切除(PH)诱导的大鼠再生肝中ODC蛋白水平的分析采用免疫印迹(Western blotting)方法.结果 高剂量的腐胺(20 ms/kg体重)、精脒(0.15 mg/kg体重)和精胺(6 mg/kg体重)处理后,ODC蛋白水平在PH后12 h内均低于对照组,且各组间变化趋势相近;而低剂量腐胺(0.02 mg/kg体重)、精脒(0.03 mg/kg体重)及精胺(0.06 ms/kg体重)处理组在PH后4h ODC水平迅速升高,分别比对照组高15.1%、29.5%和30.3%.结论 一定剂量的多胺对大鼠早期再生肝ODC蛋白水平有反馈调节作用,其中精脒、精胺的作用较强,腐胺较弱.
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抗酶的研究进展
抗酶(antizyme)是当细胞内多胺水平升高时刺激机体合成的一种小分子量调节蛋白,能特异性地与鸟氨酸脱羧酶 (ornithine decarboxylase, ODC) 结合,经泛素非依赖途径被26S蛋白酶体降解,从而使多胺合成减少;抗酶还可以调节多胺转运,以稳定细胞内多胺水平.近年来随着生物技术的不断发展,对抗酶的认识也逐步深入,本文综述了抗酶家族、合成、作用及定位等方面的研究进展.
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百草枯中毒与多胺摄取系统
百草枯是广泛使用的除草剂.百草枯中毒事件屡见不鲜,死亡率较高,且目前临床缺乏有效解毒药物.百草枯中毒机制可能为循环氧化还原反应产生的氧化应激所致.百草枯主要蓄积于肺.百草枯选择性人肺主要通过多胺摄取系统,定位细胞主要为Ⅰ、Ⅱ型肺泡细胞及细支气管细胞.目前仍没有完全揭示人和动物多胺摄取系统的相关报道.本综述主要回顾百草枯多胺摄取系统的研究历史.
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鸟氨酸脱羧酶的生理病理特点及其药物研究概况
鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)是多胺代谢中的关键酶,广泛存在于人体和动物各组织细胞内,其中对肠细胞的增生、移行和分化起重要作用.机体调节因素比较复杂.在黏膜损伤性疾病及某些癌前病变等细胞大量增生的病理情况下ODC的表达发生改变,可以作为这些疾病分期、预后及药物作用靶点或疗效的指标.寻找对ODC有作用的药物对于治疗其相关疾病是非常有意义的.
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二氟甲基鸟氨酸对人膀胱癌EJ细胞生长及凋亡的影响
鸟氨酸脱羧酶(ODC)是多胺生物合成途径的关键酶.ODC异常高表达及细胞内多胺高水平与肿瘤发生发展密切相关[1].我们采用体外实验方法对ODC 抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)阻断人膀胱癌EJ细胞多胺生物合成途径对细胞生长及凋亡的影响进行观察.
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腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA对肺癌A-549细胞抑制作用的实验研究
鸟氨酸脱羧酶(ODC)是多胺生物合成途径中的关键酶和限速酶.许多肿瘤促进剂、诱导剂在诱发组织癌变的过程中,伴有ODC活性的异常升高,在一些癌基因转化的细胞系及几乎所有的动物肿瘤中,也有ODC基因表达的异常[1].ODC作为多胺生物合成途径中的第一个限速酶,也是活性低的酶,可催化L-鸟氨酸生成腐胺.有报道,ODC的含量在许多肿瘤中增高,并与肿瘤的复发有一定的关系[2].
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抑制多胺生物合成对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨二氟甲基鸟氨酸 (difluoromethylornithine, DFMO)抑制多胺生物合成对人子宫内膜癌细胞系HEC-1B细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法:HEC-1B细胞经不同浓度DFMO作用不同时间后,绘制生长曲线,观察DFMO对细胞生长的抑制作用,MTT检测细胞抑制率,用流式细胞仪(FCM)分析细胞周期变化;Giemsa染色显微照相观察凋亡细胞形态,DNA Ladder检测凋亡细胞DNA是否出现凋亡特征性梯形条带,FCM检测凋亡细胞百分率.结果:DFMO对人子宫内膜癌细胞HEC-1B有明显的生长抑制作用,呈剂量和时间依赖关系,2.5 mmol/L DFMO即可抑制HEC-1B细胞增殖,DFMO作用时间为5 d时,细胞增殖抑制率为60%.细胞周期分析示,DFMO使HEC-1B细胞阻滞于G1期,5 mmol/L DFMO作用2 d可使G1期细胞由68.3%增加到85.5%;5 mmol/L DFMO可诱导HEC-1B细胞凋亡,作用5 d时细胞凋亡率为63.8%,Giemsa染色可见凋亡小体,DNA Ladder显示典型的细胞凋亡梯形条带,加入40 μmol/L外源性腐胺可阻止DFMO的作用.结论:抑制多胺生物合成可抑制子宫内膜癌细胞HEC-1B细胞增殖,诱导细胞凋亡.
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新型多胺缀合物NNAMB诱导K562细胞凋亡及其机制
目的 探讨新型多胺缀合物NNAMB诱导K562细胞凋亡及其分子机制.方法 采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法、台盼监拒染法检测细胞活力;Hoechst33258染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞周期变化、凋亡率、线粒体膜电位的变化;Western blot检测caspase-3、caspase-8、caspase-9和cytochrome c的表达.结果 NNAMB抑制K562细胞的生长,并呈现剂量及时间依赖性.随着NNAMB浓度的增加和作用时间的延跃,Sub-G1期细胞明显增加,线粒体膜电位下降.经NNAMB处理后的K562细胞中,可见到明显的凋亡细胞.蛋白印迹检测表明,NNAMB可诱导caspase-3、easpase-9的活化及线粒体cytochrome c释放到胞浆中,但caspase-8的表达无明显变化.结论 NNAMB能显著抑制K562细胞增殖,并可通过内源性线粒体途径诱导细胞凋亡.
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精氨酸代谢机制及其在运动中的补充效应
精氨酸(Arg)是细胞中具有多重作用的氨基酸之一,它不仅是合成蛋白质的前体,而且是合成一氧化氮(NO)、多胺和嘧啶的前体.Arg能影响激素的释放,并由Arg/Urea、Arg/NO两条主要代谢途径调节机体氮平衡、免疫、心血管等系统功能.运动中Arg可通过对机体免疫功能、心血管功能、iNOS活性的调控以影响运动能力.
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多胺与肿瘤发生发展及其在临床上的应用
多胺是广泛存在于机体中的有机物质,肿瘤和增殖旺盛的组织细胞内多胺的浓度要高于正常细胞.通过影响细胞增殖、分化的信号转导通路,多胺促进正常细胞的恶性转化;通过促进核酸、蛋白质等生物大分子的合成及肿瘤组织的血管生成,促进肿瘤增生.在肿瘤临床上,检测体内多胺浓度具有一定的诊断价值;采用药物阻断多胺的代谢和作用途径,有可能对肿瘤增殖产生明确的防治作用.
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多胺衍生物NNIspm诱导肝癌细胞HepG2衰老及其分子机制
探讨多胺衍生物NNIspm诱导肝癌细胞HepG2衰老及其分子机制.采用β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老；应用高内涵活细胞成像系统检测细胞内NNIspm含量,细胞周期分布以及细胞内活性氧水平;Western blotting检测蛋白的表达水平；应用高效液相色谱法检测细胞内多胺含量的变化.结果表明:NNIspm可明显诱导HepG2细胞发生衰老,这与其降低细胞内多胺含量,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期、增加细胞内活性氧有关.此外,检测到衰老标志蛋白p21的表达明显增加；相反,Cyclin E和CDK2的表达明显减弱.本研究结果表明:NNIspm引起的细胞衰老是其产生抗肿瘤作用的机制之一.
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乙酰水杨酸增强多胺衍生物ANISpm抗肝癌作用及其机制研究
探讨乙酰水杨酸增强多胺衍生物ANISpm抗肝癌作用及其作用机制.采用MTT法检测细胞毒性;应用高内涵活细胞成像系统检测细胞内ANISpm含量的变化及对细胞凋亡和线粒体膜电位的影响;采用Western blotting方法检测细胞色素c,精脒/精胺乙酰转移酶,Caspase-3、-8、-9等蛋白表达的变化;应用高效液相色谱法检测细胞内多胺含量的变化.应用H22肿瘤移植模型评价对实体瘤生长的影响.实验结果显示,乙酰水杨酸体内外均具有增强ANISpm抗肝癌的作用,其机制为乙酰水杨酸通过上调肝癌细胞内精脒/精胺乙酰转移酶的活性,降低细胞内多胺含量从而增加了ANISpm的摄取,并通过ANISpm诱导肝癌细胞凋亡.该凋亡作用与ANISpm诱导细胞线粒体膜电位降低,促进细胞色素c释放以及活化Caspase-3、-8、-9等有关.
