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流感病毒的反向遗传学研究进展
反向遗传学是指对病原微生物的cDNA进行目的性修饰,以对其进行功能和表型的分析[1].它是相对于经典遗传学而言的,后者是从生物的性状、表型到遗传物质来研究生命的发生与发展规律.反向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上,通过对靶基因进行必要的加工和修饰,如定点突变、基因插入/缺失、基因置换等,再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组,让其装配出具有生命活性的个体,研究生物体基因组的结构与功能,以及这些修饰可能对生物体的表型、性状有何种影响等方面的内容.与之相关的研究技术称为反向遗传学技术.在病毒学研究中,反向遗传学常利用经修饰的克隆化cDNA用来获得有感染性的病毒,从而可研究这些修饰对表型产生哪些影响.早报道的是正链RNA病毒的反向遗传学系统.将来自正链RNA的病毒全基因组RNA转染真核细胞,可使RNA充任mRNA(s),从而可翻译出病毒蛋白;反过来,这些蛋白又有助于完整病毒的包装.
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全人源肝癌噬菌体单链抗体库的鉴定及筛选
目的:对全人源肝癌噬菌体单链抗体库进行鉴定,筛选肝癌抗体,同时对抗体的活性进行鉴定.方法:PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率.先以人成纤维细胞黏附后再以肝癌细胞SMMC-7721为抗原对所建抗体库进行3轮"黏附-洗脱-扩增"的亲和筛选.将筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定;通过ELISA法鉴定其与人肝癌细胞的结合活性.结果:ScFv基因插入率为70%.在亲和筛选过程中,肝癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第3轮为第1轮的214倍.筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定后,均可检测到目的基因.得到3株特异性肝癌单链抗体.结论:利用噬菌体抗体库技术结合减数筛选得到了肝癌噬菌体单链抗体及其基因,且筛选后的抗体片段与人肝癌细胞有特异性的结合活性.
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幽门螺杆菌vacA毒性片段与hpaA融合基因的原核表达
目的:构建幽门螺杆菌vacA毒性片段(v)与hpaA融合基因的原核表达载体,并诱导表达,为制备具有治疗与预防作用的疫苗奠定基础.方法:通过设计带有编码IL-3N端12个氨基酸引物,用PCR技术从pQE30-V质粒扩增出有接头的v基因,克隆至质粒pTrc99A-HpaA中与hpaA融合.将融合基因插入原核表达载体pQE30,再将pQE30-V-HpaA转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果,Western blotting鉴定其抗原性.结果:融合蛋白的相对分子量约为65 000,能与幽门螺杆菌感染的人阳性血清发生抗原抗体反应.结论:重组表达质粒pQE30-V-HpaA表达成功,为进一步研究其免疫学活性及制备疫苗提供了材料.
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血管紧张素转换酶基因插入/缺失多态性与冠心病患者预后的关系
研究发现血管紧张素转换酶(ACE)基因插A/缺失(I/D)多态性与冠心病密切相关,与预后是否有关,国内少见报道.1对象与方法对2001-04至2005-11在我院心内科住院的198例行基因检测的汉族冠心病患者进行随访,失访43例,随访155例患者均符合1979年世界卫生组织和2001年中华医学会心血管病分会<急性心肌梗死诊断和治疗指南>关于缺血性心脏病的命名和诊断标准,其中男113例,女42例,年龄63.74±9.87(32~82)岁,104例行冠状动脉造影;急性心肌梗死42例,不稳定性心绞痛90例,稳定性心绞痛13例,合并高血压72例,合并糖尿病35例.
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血管紧张素转换酶基因插入/缺失多态性与高血压病药物治疗的相关研究
本研究旨在从分子水平阐述血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)降压疗效差异的可能机制,探寻ACEI疗效欠佳人群适宜的治疗方法.
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血管紧张素转化酶和血管紧张素Ⅱ1型受体基因多态性与妊娠高血压综合征发病的关系
流行病学调查表明,妊娠高血压综合征(妊高征)有明显的遗传倾向,编码血管紧张素转化酶(ACE)及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的基因是妊高征遗传学研究中的候选基因.目前关于ACE基因插入(I)/缺失(D)多态和AT1R基因A1166C多态与妊高征关系的研究结果颇不一致.本研究对ACE 及AT1R的基因在妊高征发生发展中的协同作用进行探讨,现将结果报道如下.
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血管紧张素转化酶基因插入或缺失多态性与新生儿疾病
血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)基因插入或缺失(insertion/deletion,I/D)多态性引起的肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)活性差异,与成人疾病关系的研究已经进行了十余年,发现ACE基因I/D多态性与多种疾病相关,提示了RAS、ACE基因I/D多态性与人类健康和疾病存在广泛联系,现对ACE基因插入或缺失多态性与儿科尤其是新生儿疾病关系的研究进展作一综述.
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头颈肿瘤的基因治疗
基因治疗是将有功能的一个或一群基因导入细胞以纠正有基因缺陷的疾病的方法.将正常或遗传改变后的基因插入细胞,通常用于替代缺陷基因,特别适用于遗传所致疾病,是一种分子水平上的治疗手段.
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造血细胞集落刺激因子在临床上的应用
1985正Welte.K成功地从人膀胱癌细胞株5637的培养上清液中纯化并精制出人粒细胞集落刺激因子G-CSF(hG-CSF),然后Welte.K与美国的AMGEN公司Souza.L.M又进一步确定这种hG-CSF的N段氨基酸排列顺序,将来源于5637细胞株的hG-CSF基因克隆化,采用基因工程技术将该基因插入大肠杆菌成功地表达出hG-CSF,从而开发出重组人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF).
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脑梗塞患者血管紧张素转换酶基因缺失多态性分析
血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)在血管紧张素Ⅱ的产生和缓激肽的降解中起着关键的作用,而后两种多肽在血管张力的调节和血管平滑肌细胞的增生中起作用[1].近年来,对ACE基因插入/缺失多态性与脑血管疾病之间关系的探讨,多倾向认为,ACE通过不同的遗传机制在心脑血管疾病的发生发展中发挥作用,认为是研究各类心脑血管疾病遗传易感性的主要候选基因.本研究通过测定脑梗塞患者ACE基因类型和血浆中ACE浓度,探讨ACE基因插入/缺失多态性与脑梗塞的关系,旨在从分子生物学水平上发现高危人群,为临床用药提供依据,提高脑梗塞防治水平.
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转基因植物在疫苗等药物生产中的应用
植物基因转化是利用分子生物学和基因工程技术,将外源基因插入到受体植物的基因组,并使其在后代植物中得以表达的过程.随着分子生物学技术的高速发展、植物基因表达调控的深入研究和植物细胞培养及再生方法的完善,人类在成功改变植物遗传性状的同时,利用转基因植物作为人类所需昂贵药品的廉价的"生产工厂".近的研究表明,将细菌性和病毒性病原体抗原的编码基因,导入植物细胞,能够表达出较好保留天然免疫原性的抗原,这些研究结果为转基因植物作为疫苗等药品的生产系统提供了良好的基础[1].
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001 ACE基因插入/缺失多态性影响心脏重量
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噬菌体展示技术及其在弓形虫研究中的应用
将病原体的免疫原与λ噬菌体或其他病毒的衣壳蛋白融合后一起展示于病毒表面,这样形成的新的病毒颗粒可用作疫苗.Smith[1]通过基因工程手段将外源基因插入到丝状噬菌体的PⅢ蛋白基因中,成功地使外源多肽展示在噬菌体的表面,而且用抗体检测发现该外源多肽具有同天然产物相同的生物活性.这标志着噬菌体展示技术的诞生.而Geysen等[2]认为含有关键残基的短肽能够模拟蛋白质上的功能位点,而且多数情况下,几个关键残基与其受体所形成的非共价键构成了全部结合的主要部分.这就为噬菌体展示技术奠定了理论基础.
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噬菌体随机肽库技术的进展与应用
正由于Smith 率先在1985年将外源基因插入丝状噬菌体f1的外壳蛋白基因Ⅲ区,才使目的基因编码的多肽呈现在噬菌体表面,从而建立了噬菌体表面呈现状技术[1].
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兽用DNA疫苗的研究进展
DNA疫苗即DNA免疫接种,是指将编码抗原的外源基因插入一表达载体中,直接接种到动物体内,于体内表达后,诱导产生特异性的细胞免疫和/或体液免疫的过程.由于DNA疫苗既拥有亚单位疫苗和灭活疫苗的安全性,又兼备只有减毒疫苗或重组疫苗才有的诱导保护性免疫应答的特点,因而受到越来越多的研究者青睐.在兽医领域,DNA疫苗已在家禽、家畜和小动物上进行了研究,研究的首选目标是传染性病原,如:病毒、细菌和寄生虫等,针对的疾病包括呼吸道、胃肠道、繁殖及全身性疾病等,自身免疫性疾病和肿瘤等的DNA疫苗则主要在一些伴侣动物上进行了研究,现将这方面的进展介绍如下.
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血管紧张素转换酶基因插入/缺失多态性检测方法的研究
目的:血管紧张素转换酶(ACE)是肾素-血管紧张素系统(RAS)中的一个关键酶.ACE基因I/D多态性与高血压靶器官损伤有密切关系.检测ACE基因多态性.
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ACE与AT1R基因多态性及其相互作用对心衰预后的影响
本文旨在探讨血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme, ACE)基因插入/缺失(I/D)多态性与血管紧张素II 1型受体(angiotensin II type 1 receptor , AT1R)基因多态性及其相互作用对未行心脏移植心衰患者预后的影响.
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抗菌蛋白葛栳纱在乳酸乳球菌中的表达研究
目的:观察人工设计的葛栳素的cDNA在乳酸乳球菌中的表达及其表达产物的抗菌作用.方法:采用统计学方法,统计同种族蛋白质Attacin A cDNA序列各种遗传密码子的出现频率 ,并以此为基础根据已知的葛栳素蛋白质序列设计其cDNA序列.采用PCR重叠延伸法合成葛栳素的cDNA序列,在测序完全正确后将葛栳素基因插入适合乳酸乳球菌MG1363表达的表达载体pNZ8048中,采用电穿孔法转化MG1363,转化的MG1363在电转化后涂布于恢复培养基SGM17 MC(含氯霉素)后放入厌氧培养箱中培养72小时后,挑单个菌落于SGM17培养液(无抗生素), 厌氧振荡培养72小时后收集细胞上清并进行杀菌活性的检测.结论:转化的MG1363细胞上清对大肠杆菌J5具有杀菌活性.结论:人工设计葛栳素的cDNA序列在乳酸乳球菌中得到表达,其表达产物具有抗菌作用.
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血管紧张素转换酶抑制剂治疗患者的血管转换酶基因多态性与左室肥厚逆转的联系
荟萃分析(Meta-analysis)证实,在减轻高血压患者左室重量方面,血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂较其他的一线降压药物更有效.在ACE基因插入/缺失(ID)多态性中,纯合子DD基因型者其血浆ACE水平较高,左室肥厚及心肌梗死的危险性较大,高血压病患者中DD基因型是左室肥厚的危险因子之一.高血压病伴左室肥厚者中,血浆脑利钠肽(BNP)浓度升高,因此BNP是长期应用ACE抑制剂时评价左室肥厚的有用指标.本文旨在确定II、ID及DD基因型的高血压患者应用ACE抑制剂长期有效控制血压时左室肥厚逆转程度及血浆BNP浓度下降程度是否相同.
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增强核酸疫苗免疫应答的策略及方法
核酸疫苗又称DNA疫苗,是指将编码某种目的抗原蛋白的外源基因插入真核细胞表达质粒,直接导入动物体细胞内,并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,从而达到预防和治疗疾病的目的.核酸疫苗不仅能刺激机体产生特异性的体液免疫,还能诱导产生特异性的具有细胞毒杀伤性功能的CTL效应(细胞免疫),并可直接清除带有目的抗原的靶细胞,因此对病毒、细胞内寄生的细菌和寄生虫所引起的传染病具有广阔的治疗前景[1-6].