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鸡蛋中抗菌体系综述
鸡蛋在自然条件下由产出到孵化的4周内，在缺乏完整免疫机制的生理状态下仍能抵御病原微生物，正常繁衍生命离不开蛋清和蛋黄内抗菌性蛋白质的保护。其中，鸡蛋清由于其特殊的抗菌特性和较大的比例被称为禽蛋抗菌生物感染的第二道屏障。对蛋清内重要抗菌蛋白的重要理化性质、抗菌机理、提取及应用的研究显得尤为重要。本文分析了鸡蛋自成抗菌体系的抗菌机制；蛋清内主要抗菌蛋白的性质；蛋清内抗菌蛋白在医学、食品、新材料等方面的应用。
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人参抗菌蛋白的研究进展
人参是驰名中外的名贵中药材,具有较高的药用和经济价值.人参病害成为人参应用的主要制约因素.现代分子生物学的发展为人参抗病研究提供了新的手段.目前已发现的人参抗菌蛋白有脂质转运蛋白、亲环素、防御素以及PR-4和PR-10等,对人参多种致病菌均有抑制作用,为人参病害防治提供了有价值的参考.
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家蝇幼虫抗菌蛋白诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的探讨
目的观察家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导,探讨其抗肿瘤作用机制.方法流式细胞仪测定家蝇幼虫抗菌蛋白对细胞周期和细胞凋亡的影响;HE染色法观察细胞凋亡形态,并测定细胞凋亡指数(AI).结果在0.10%组A375的G2/M期升高,S期降低.0.50%组G0/G1期、G2/M期和AI/PI(增殖指数)显著增加,S期及PI明显减少.2.50%组S期、PI、AI/PI及细胞凋亡率(Ap)显著增高,G0/G1期大大减少.12.50%组G2/M期、PI、AI/PI及Ap显著增高,G0/G1期和S期明显下降.结论家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞有明显的抑杀作用;家蝇幼虫抗菌物质可能系通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而抑制黑色素瘤A375细胞生长.
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不同诱导源诱导家蝇幼虫抗菌蛋白效果的比较
目的比较5种诱导源所诱导产生家蝇幼虫抗菌蛋白的抗菌活性,观察不同诱导源对家蝇幼虫抗菌蛋白产生的诱导效果.方法用金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、大肠埃希菌脂多糖、紫外线及热诱导家蝇幼虫,在诱导后不同时间提取抗菌蛋白进行抑菌实验,观察不同诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间,并比较各诱导组高峰时间产生抗菌蛋白的抗菌活性.结果各诱导组诱导家蝇幼虫产生抗菌蛋白达大活性时间为诱导后36～48 h(热诱导后家蝇幼虫很快化蛹,未观察抗菌蛋白产生高峰时间);金黄色葡萄球菌诱导后的抗菌蛋白抗菌活性佳,热诱导后的抗菌蛋白抗菌活性也较未诱导组好.结论各诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间不同;细菌诱导的抗菌蛋白抑菌效果好,热诱导也是一种较理想的诱导方法.
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BPI N端优势抗原表位的模拟合成及其人源抗体的筛选
杀菌/渗透增强蛋白(bactericidal/permeability increasing protein,BPI)是存在于人及哺乳动物多形核白细胞中的一种阳离子抗菌蛋白.
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杀菌/通透性增加蛋白23-人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白在CHO细胞中的表达及活性鉴定
杀菌/通透性增加蛋白(BPI)是一种主要存在于中性粒细胞内的阳离子抗菌蛋白,具有杀菌、中和内毒素和抗真菌等作用,并且在发生生物学效应时,对机体不产生任何损害,在革兰阴性菌感染的治疗方面有很好的应用前景[1].研究表明,BPI N端片段BPI23(1～199氨基酸)具有完整BPI杀菌、中和内毒素等活性.人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)具有广泛的生物学活性,能促进伤口愈合,在治疗烧伤、机体缺血损伤、溃疡等方面具有极为广泛的应用前景、特别是在创伤修复方面,haFGF应用甚广,其活性部位主要集中在C端[2,3].
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家蝇幼虫抗菌蛋白的诱导及抗菌特性
目的用不同诱导源诱导家蝇幼虫,观察抗菌蛋白产生的规律及其抑菌特性,为进一步研究家蝇幼虫抗菌蛋白的产生及应用提供实验依据.方法用4种诱导源诱导后不同时间的组织匀浆提取抗菌蛋白进行抑菌实验,观察不同诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间及各诱导组抗菌蛋白的抑菌特性.结果各诱导组抗菌蛋白的抑菌活性明显高于对照组,各诱导组抗菌蛋白的产生在诱导后36～48h达高峰;各诱导组产生的抗菌蛋白均能抑制几种革兰阴性菌、一种革兰阳性菌和耐药菌株,但对不同细菌的抑菌活性有差别.结论不同诱导源诱导家蝇幼虫后抗菌蛋白产生的高峰时间不同、产生的抗菌蛋白抗菌谱广.
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诱导家蝇幼虫抗菌蛋白的提取及动力学研究
目的比较两种方法提取家蝇幼虫抗菌蛋白抑菌活性,并观察两种诱导源所诱导家蝇幼虫血淋巴中抗菌蛋白产生的动力学变化.方法用金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌诱导家蝇幼虫,在诱导后12,24,36,48,60 h收集家蝇幼虫,80℃热水处死,分别用血淋巴、组织匀浆提取抗菌蛋白后进行抗菌活性的测定.结果用组织匀浆提取的抗菌蛋白抑菌效果明显好于血淋巴;金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌诱导家蝇幼虫产生抗菌物质达大活性时间分别为诱导后48,36 h.结论用组织匀浆提取家蝇幼虫抗菌蛋白是一种较好的方法;诱导后36～48 h的抗菌蛋白活性大.
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家蝇幼虫抗菌蛋白对子宫内膜癌细胞生长影响
目的 探讨家蝇幼虫抗菌蛋白对子宫内膜癌细胞(JEC)的影响.方法 细胞计数法、四甲基偶氨噻唑蓝(MTT)法测定家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC细胞生长的影响;MTT法测定家蝇幼虫抗菌蛋白对正常人牙周膜细胞生长的影响;苏木素-伊红(HE)染色法观察细胞凋亡,并计算细胞凋亡指数(AI).结果 高浓度组JEC细胞数及吸光度 (A)值明显降低,细胞增殖抑制率随浓度的增加而增大;各浓度组正常人牙周膜细胞的A值和细胞增殖抑制率与对照组比较差异均无统计学意义;HE染色见细胞凋亡,各浓度组AI均明显高于对照组.结论 家蝇幼虫抗菌蛋白可能是通过诱导细胞凋亡来抑制JEC细胞生长.
关键词： 家蝇幼虫 抗菌蛋白 子宫内膜癌细胞(JEC) -
中性粒细胞胞外诱捕网研究新进展
中性粒细胞是机体的免疫防御系统中的一条非常重要的防线,它参与机体的免疫反应主要是在病原体感染时,通过吞噬、脱颗粒来抵抗侵袭,形成吞噬体后,在内部通过 NADPH[1]形成具有高浓度的活性氧(reactive ox-ygen species,ROS)和抗菌蛋白可以用来杀灭病原微生物,而在 2004 年,Brink-mann等[2]首次研究证明,当受到病原体刺激后,中性粒细胞可以将颗粒蛋白和去致密化染色质排除细胞外,从而捕获并杀死病原微生物,并将这一免疫过程称为中性粒细胞胞外诱捕.
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细胞因子介导的抗菌蛋白表达调控机制
抗菌蛋白是机体先天性防御系统的构成成分,在防御病原入侵方面起十分重要作用.虽然一些抗菌蛋白成分的表达是组成性的,但新研究表明,许多抗菌蛋白的表达受到相关细胞因子的调控,尤其是T细胞系来源的细胞因子所发挥的作用为显著.了解细胞因子介导的抗菌蛋白表达调控机制及IL-17和IL-22如何通过调节局部的相关抗菌蛋白表达来保持皮肤和粘膜免疫稳态性的很重要.
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家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC和A375肿瘤细胞的抑制作用
目的 研究家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC和A375肿瘤细胞的抑制作用. 方法 在体外培养的JEC和A375肿瘤细胞中分别加入0.02%、0.1%、0.5%、2.5%和12.5%浓度的抗菌蛋白,用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡,计算细胞凋亡指数;HE及AO染色法观察凋亡细胞形态.对照组采用不含抗菌蛋白的等量培养基. 结果 JEC细胞的凋亡指数/增殖指数(AI/PI)随浓度的增加而递增,2.5%抗菌蛋白组和12.5%抗菌蛋白组PI及凋亡率明显升高, G0/G1期下降.对A375细胞,12.5%抗菌蛋白组的G2/M期、S期、G0/G1期、G2/M期、AI/PI及PI与对照组的差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论 家蝇幼虫抗菌蛋白可能通过诱导细胞凋亡来抑制JEC细胞生长;其对A375细胞的抑制可能是通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而发挥作用.
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唾液抗菌蛋白与口腔常见疾病关系的研究进展
唾液在维持口腔健康中起着重要作用,抗菌蛋白是唾液中一组重要的蛋白质,与龋病、黏膜病和肿瘤等密切相关.该文就几种主要的抗菌蛋白与常见口腔疾病的关系作简要综述.
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牡蛎软体中抗菌蛋白对白色念珠菌超微结构的影响
目的 观察牡蛎软体中提取的抗菌蛋白对分离的致病性念珠菌超微结构的影响.方法 取临床分离的白色念珠菌,暴露于抗菌蛋白中24 h,应用透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果 经4 h抗菌蛋白(3.5×103U·mL-1)作用,白色念珠菌菌体变为椭圆形,细胞壁松弛,细胞质固缩;16 h后,菌体呈圆球形,细胞壁边缘呈毛状,残缺并且明显肿胀,胞浆内容变空,细胞器几乎消失,胞核不清;24 h后,菌体呈不规则形,细胞壁缺失,细胞质解体出现空腔.结论 抗菌蛋白对白色念珠菌有较强的抗菌作用.
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家蝇幼虫抗菌蛋白在体外诱导JEC凋亡的探讨
目的:探讨家蝇幼虫抗菌蛋白对子宫内膜癌细胞(JEC)的抑制作用.方法:流式细胞仪测定家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC细胞周期及凋亡的影响;HE染色法观察细胞凋亡,并计算AI.结果:家蝇幼虫抗菌蛋白作用后的JEC AI/PI升高,家蝇幼虫抗菌蛋白高浓度组JEC PI及Apoptosis%明显升高;各浓度组JEC AI均明显高于对照组(P＜0.01).结论:家蝇幼虫抗菌蛋白可能通过诱导细胞凋亡来抑制JEC生长.
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灵长生物抗菌蛋白ⅡA型磷脂酶A2氨基酸取代与分子进化的关系
目的:了解灵长生物的抗菌蛋白ⅡA型磷脂酶A2氨基酸取代的特点及其与分子进化的关系.方法:对人、猩猩和猴3种哺乳类灵长生物的抗菌蛋白ⅡA型磷脂酶A2的氨基酸顺序进行两两比较,分析它们之间相互取代的位点、频率和性质.结果:①人和猩猩、人和猴、猩猩和猴之间分别有4,12,12个氨基酸残基发生取代,且主要发生在带电荷的氨基酸;而在发生的氨基酸取代中,又以带正电荷的氨基酸(碱性氨基酸)为主;②氨基酸取代主要集中在有限的4个区域,且为功能重要的区域.结论:哺乳类灵长生物抗菌蛋白ⅡA型磷脂酶A2的蛋白质分子进化较快,与其所具有的较强的杀菌活性相适应.
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BPI-LL37抗菌融合蛋白质表达载体的构建与功能鉴定
目的 构建杀菌/通透性增加蛋白和LL37抗菌蛋白的融合蛋白(BPI-LL37)表达载体,获得针对脓毒症治疗的多效抗菌融合蛋白,为脓毒症治疗提供新的措施.方法 通过PCR方法从杀菌/通透性增加蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)和LL37基因的cNA中扩增并修饰获得需要的rBPI21和LL37活性片断,构建rBPI21-LL37/LL37-rBPI21融合蛋白的表达载体,构建的表达载体(pLVX-Tight-Puro)上的BPI和LL37基因之间通过柔性片段(GGSGG)连接.之后使用PolyJetTM体外DNA转染试剂转染人肺腺癌细胞A549.通过Western blot检测真核细胞A549表达融合蛋白的水平,通过抑菌试验验证此融合蛋白的分泌与抗菌能力.结果 经限制内酶切酶切、DNA电泳和DNA测序证明融合蛋白表达载体(pLVX-Tight-Puro-BPI-LL-37)构建成功;Western blot检测结果表明融合蛋白rBPI21-LL37/LL37-rBPI21能被真核细胞A549细胞表达,融合蛋白大小介于25～30×103;抑菌试验进一步验证此融合蛋白具有抑制细菌生长的生物学效应.结论 构建的两种rBPI21-LL37/LL37-rBPI21表达载体能够成功转染入人的体细胞,并表达和分泌具有抗菌活性的融合蛋白,该融合蛋白有潜力成为治疗脓毒症的新药.
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人宫颈粘液抗菌机制:抗菌多肽的分离鉴定
目的:从人的子宫颈粘液分离鉴定抗菌多肽,探讨子宫颈粘液抗菌机制.方法:用5%乙酸提取人子宫颈粘液可溶物,应用电泳凝胶抗菌蛋白分析法(gel overlay assay)分析其抗菌蛋白,制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳(AU-PAGE)及反相高效液相色谱(HPLC)分离纯化抗菌多肽.凝胶琼脂糖弥散法抗菌检测抗菌活性.纯化的抗菌多肽进行氮端氨基酸序列测定,根据其序列设计简并引物,利用3'-RACE-PCR技术扩增其全长cDNA.
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抗菌蛋白葛栳纱在乳酸乳球菌中的表达研究
目的:观察人工设计的葛栳素的cDNA在乳酸乳球菌中的表达及其表达产物的抗菌作用.方法:采用统计学方法,统计同种族蛋白质Attacin A cDNA序列各种遗传密码子的出现频率 ,并以此为基础根据已知的葛栳素蛋白质序列设计其cDNA序列.采用PCR重叠延伸法合成葛栳素的cDNA序列,在测序完全正确后将葛栳素基因插入适合乳酸乳球菌MG1363表达的表达载体pNZ8048中,采用电穿孔法转化MG1363,转化的MG1363在电转化后涂布于恢复培养基SGM17 MC(含氯霉素)后放入厌氧培养箱中培养72小时后,挑单个菌落于SGM17培养液(无抗生素), 厌氧振荡培养72小时后收集细胞上清并进行杀菌活性的检测.结论:转化的MG1363细胞上清对大肠杆菌J5具有杀菌活性.结论:人工设计葛栳素的cDNA序列在乳酸乳球菌中得到表达,其表达产物具有抗菌作用.
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分枝杆菌噬菌体在抗结核研究中的作用
分子杆菌噬菌体是其宿主分枝杆菌的病毒,前者对于结核病控制及临床结核菌诊断有良好的应用前景.目前已有超过1000株分枝杆菌噬菌体进行了全基因组测序,结果显示分枝杆菌噬菌体基因组具有丰富的多样性和镶嵌结构,且都编码有噬菌体裂解酶.裂解酶是噬菌体在感染宿主末期表达的蛋白,其能水解细胞壁以释放子代噬菌体.除裂解酶外,分枝杆菌噬菌体还编码其它有抗结核活性的多肽及蛋白.分枝杆菌噬菌体在临床耐药结核菌的检测中也发挥了巨大作用.本文综述了来源于分枝杆菌噬菌体的多肽与蛋白的抗结核活性,并系统阐述了分枝杆菌噬菌体在临床结核菌耐药性检测中的应用,并展望了工程噬菌体在杀死耐药病原菌研究中的应用前景.
