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不同纯度高良姜素对A375-HaCaT共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响
目的：研究不同纯度高良姜素对人黑色素瘤细胞-人永生化角质形成细胞(A375-HaCaT)共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响。方法利用Transwell技术建立A375-HaCaT共培养体系,以0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良姜素作用于共培养模型。采用MTT比色法检测细胞增殖,NaOH裂解法测定黑素含量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,ELISA法检测HaCaT细胞因子干细胞生长因子(SCF)、内皮素(ET)-1的表达。结果 A375-HaCaT共培养模型中的A375细胞生长良好,0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良姜素对共培养体系中的A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成均具有上调作用。各纯度高良姜素浓度≥0.5μg/mL时,能够提高HaCaT细胞中的ET-1和SCF等细胞因子的表达水平,且纯度70%的高良姜素作用强度优于90%的高良姜素。结论高良姜素能显著促进A375-HaCaT共培养模型中A375的细胞增殖及黑素合成,其作用机制可能与高良姜素上调HaCaT细胞中的ET-1和SCF等细胞因子的表达水平有关。
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稳定表达组织因子的黑色素瘤细胞中血管内皮细胞生长因子的诱导
研究黑色素瘤细胞中多种信号传导途径的特异抑制剂与组织因子诱导血管内皮生长因子的关系,发现只有P44/42 MAPK激酶特异的抑制剂PD98059 对VEGF的表达有抑制效应.MAPK激酶的Western blot 检测表明PD98059完全抑制了组织因子稳定表达细胞的磷酸化的P44/42 MAPK激酶的表达,说明黑色素瘤细胞中组织因子通过P44/42 MAPK激酶途径诱导VEGF的表达.通过对VEGF的启动子区的不同片段对报告基因表达的研究表明,稳定表达组织因子的黑色素瘤细胞中VEGF启动子的活性可能部分依赖于转录因子AP-1的结合位点.
关键词： 黑色素瘤细胞 组织因子 血管内皮细胞生长因子 MAPK激酶 AP-1 -
IMP3在区分淋巴结转移性黑色素瘤和良性痣中的诊断价值
基于原发性黑色素瘤的 Breslow 深度,前哨淋巴活检被认为是皮肤黑色素瘤的分期标准,而且是重要的预后因素之一.但是当淋巴结内良性痣细胞与转移黑色素瘤细胞相似时,对标本的组织学分析就很困难.胰岛素样生长因子Ⅱ信使 RNA 结合蛋白3(IMP3),又名K同源决定域蛋白,在癌和 523S 细胞中呈过表达, IMP 家庭中的成员,而且已经发现它在区分皮肤黑色素瘤和良性痣方面具有诊断价值.
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家蝇幼虫抗菌蛋白诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的探讨
目的观察家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导,探讨其抗肿瘤作用机制.方法流式细胞仪测定家蝇幼虫抗菌蛋白对细胞周期和细胞凋亡的影响;HE染色法观察细胞凋亡形态,并测定细胞凋亡指数(AI).结果在0.10%组A375的G2/M期升高,S期降低.0.50%组G0/G1期、G2/M期和AI/PI(增殖指数)显著增加,S期及PI明显减少.2.50%组S期、PI、AI/PI及细胞凋亡率(Ap)显著增高,G0/G1期大大减少.12.50%组G2/M期、PI、AI/PI及Ap显著增高,G0/G1期和S期明显下降.结论家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞有明显的抑杀作用;家蝇幼虫抗菌物质可能系通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而抑制黑色素瘤A375细胞生长.
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维生素D及类似物与肝细胞癌相关性研究进展
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC,简称肝癌)是世界第五大常见肿瘤,位列世界第3位的癌症死亡原因[1].近年来研究发现维生素D对多种肿瘤细胞的增殖有抑制作用,这个发现可能为肝痛的系统治疗提供新途径.1979年Eisman等[2]第一次观察到人乳腺痈细胞与维生素D之间有一定的关系.1981年Colston等[3]第一次证实维生素D抑制黑色素瘤细胞的生长.同年Abe等[4]首次研究发现维生素D在大鼠的髓样白血病中具有抑制肿瘤生长的作用.国内外学者也对维生素D及类似物与肝癌的相关性做了大量研究.
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白藜芦醇对黑色素瘤细胞增殖的抑制作用
目的:探讨白藜芦醇对黑色素瘤细胞WM239增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法:MTT法检测白藜芦醇对WM239细胞增殖的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对WM239细胞周期及凋亡的影响.结果:12.5～200 μmol/L的白藜芦醇作用于WM239细胞48 h和72 h后,对其增殖具有一定的抑制作用,作用72 h时,浓度＞50 μmol/L其抑制率＞50％,且抑制程度与药物浓度呈正相关.其中0、25、50和100 μmol/L药物与WM239细胞作用48 h后,凋亡率分别为0.1％、9.7％、8.9％和19.3％,处理组与未处理组相比细胞凋亡明显增加,G0/G1期细胞分别为71.9％、77.3％、81.0％和83.7％,S期分别为21.5％、17.9％、16.0％和14.6％,G2/M期为6.5％、4.8％、2.9％和1.8％,细胞周期阻滞于G1期,S期和G2期细胞比例下降,剂量依赖关系明显.结论:白藜芦醇可以抑制WM239细胞的增殖,引起细胞周期改变,凋亡细胞明显增加.
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2种粒径PLGA纳米粒细胞摄取动力学的比较
目的:比较包载有荧光香豆素-6(coumarin-6,C6)的2种粒径聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plylactic acid-glycolic acid copolymer,PLGA)纳米粒,经肿瘤细胞的摄取动力学的差异.方法:以生物可降解材料PLGA为载体,采用乳化溶剂挥发法制备2种不同粒径的载有C6的PLGA纳米粒,以黑色素肿瘤细胞(B16)和脑胶质瘤细胞(U87)为细胞模型,分别与2种粒径的纳米粒孵育0.5,1,4,6和17 h,用荧光光度计检测细胞裂解液中C6的荧光值,计算得出2种细胞摄入的载药PLGA纳米粒的量(以C6的量表示),绘制入胞动力学曲线.应用GraphPad Prism程序处理2种细胞得出的数据,并应用T检验法分析各组数据之间的差异.结果:孵育0.5h后,2种粒径纳米粒在2种细胞中的摄取量均表现出显著差异;且随着时间延长,该差异加大.细胞摄取时间在6 ～17h时,粒径约为150 nm的PLGA纳米粒的入胞速率明显变缓.结论:在相同的给药浓度下,小粒径纳米粒入胞速率要快于较大粒径的纳米粒.大粒径的纳米粒比小粒径纳米粒的入胞量到达平衡快,且总的入胞量要少.
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靶向NRP1单克隆抗体对黑色素瘤细胞B16F10的增殖、迁移和凋亡的影响
目的 研究靶向神经菌毛素1(neuropilin1,NRP1)单克隆抗体(NRP1 mAb)对黑色素瘤细胞B16F10增殖、迁移和凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 SDS-PAGE检测神经菌毛素1单克隆抗体的纯度;蛋白质印迹法、免疫荧光和免疫组化检测神经菌毛素1单克隆抗体的特异性和B16F10细胞及其移植瘤上神经菌毛素1的表达;四甲基偶氮唑蓝法、划痕实验、Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术等方法检测不同浓度神经菌毛素1单克隆抗体对黑色素瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响;蛋白质印迹法检测神经菌毛素1单克隆抗体作用后细胞内相关信号蛋白的表达.结果 纯化的神经菌毛素1单克隆抗体具有高纯度和特异性,同时B16F10细胞及其移植瘤上神经菌毛素1高表达.神经菌毛素1单克隆抗体能有效抑制B16F10细胞的增殖和迁移,抑制作用呈时间和浓度依赖性(P＜0.05).神经菌毛素1单克隆抗体能显著诱导B16F10细胞凋亡,并呈剂量依赖关系(P＜0.05).抗体作用后B16F10细胞中磷酸化的Akt和ERK1/2表达下调,Bcl-2和Caspase 3蛋白表达下调,Bax蛋白的表达上调.结论 纯化的神经菌毛素1单克隆抗体能有效地抑制B16F10增殖,迁移并明显诱导凋亡,其可能通过抑制膜上神经菌毛素1与相关细胞因子结合而减少其介导的PI3K/Akt和MEK/ERK1/2信号转导途径的活化来抑制细胞增殖和迁移,并通过Bcl-2/Bax/Caspase3途径诱导细胞凋亡,从而发挥其抗肿瘤作用.
关键词： 神经菌毛素1单克隆抗体 黑色素瘤细胞 增殖 迁移 凋亡 -
利用CRISPR-Cas9系统敲除小鼠黑色素瘤细胞系MATP基因的初步研究
目的 利用CRISPR/Cas9系统,敲除小鼠黑色素瘤细胞系的MATP基因,为MATP基因的功能研究奠定基础.方法 利用http://crispr.mit.edu/网站,设计针对MATP的特异性引物,并将引物链接到pCAS9/gRNA1载体.将阳性载体转染小鼠黑色素瘤细胞系B16F10,利用无限稀释的方法获得转染后的单克隆细胞株.提取不同细胞株的基因组,通过测序的方法进一步筛选出发生MATP基因切割的细胞株,并利用Western-blot的方法验证MATP的表达情况.结果 成功获得了3株MATP基因敲除的细胞株,Western-blot结果表明,该细胞株不表达MATP蛋白.结论 利用pCAS9/gRNA1载体,可以实现B16F10细胞系MATP基因的敲除.
关键词： CRISPR-Cas9 黑色素瘤细胞 MATP 研究 -
杏仁油对黑色素瘤细胞B16细胞增殖及黑素合成的影响
目的 探讨杏仁油对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖及黑素合成的影响.方法 采用MTT法测定杏仁油对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖的影响,L-dopa氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素合成.结果 杏仁油浓度在0.1～100μg/mL时对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖无影响(P>0.05),对酪氨酸酶活性和黑素含量均呈浓度依赖性抑制,均具有显著性抑制作用(P<0.05).结论 杏仁油对黑色素瘤细胞B16酪氨酸酶活性和黑素生成有较强的剂量相关性抑制作用.
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小鼠黑素瘤细胞培养上清对同型小鼠淋巴细胞转铁蛋白受体CD71的抑制作用分析
目的 通过检测小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)培养上清对同型小鼠淋巴细胞活化分子CD71表达的抑制,探讨黑素瘤细胞抑制淋巴细胞活化、介导肿瘤细胞免疫逃逸的机制.方法 用B16F10培养上清培养同型小鼠脾淋巴细胞(上清组),经植物血凝素活化,用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞转铁蛋白受体CD71表达水平,用RPMI 1640完全培养液代替B16F10培养上清作为对照组.结果 上清组培养上清培养的淋巴细胞CD71表达率为(55.41±3.70)%低于对照组的(60.92±2.02)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 B16F10培养上清对淋巴细胞表达CD71具有抑制作用,可抑制淋巴细胞活化,成为免疫逃逸机制之一.
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赤芍总苷联合卡铂对黑色素瘤细胞生长的抑制及相关机制研究
目的 研究赤芍总苷( total paeonyglucosides,TPG)联合化疗药物卡铂(CBP)对人黑色素瘤A375细胞生长的抑制作用及相关机制.方法 用TPG和CBP作用于体外培养的黑色素瘤细胞,SRB法检测药物对黑色素瘤细胞生长的作用,逆转录-聚合酶链反应法( RT - PCR)检测各组细胞PCNA、cyclin D、P21 mRNA的表达情况；Western blot法检测各组细胞PCNA、cyclin D、P21蛋白表达水平.结果 CBP处理组OD值较对照组明显降低,TPG联合CBP导致OD值进一步下降(P＜0.01)；CBP处理组黑色素瘤细胞PCNA和cyclin D mRNA和蛋白水平均较对照组显著降低(P＜0.01),而P21 mRNA和蛋白水平则明显升高(P＜0.01)；TPG联合CBP作用于黑色素瘤细胞,PCNA和cyclin D mRNA和蛋白水平较CBP单独作用组下降更为明显；P21 mRNA和蛋白水平较CBP单独作用组升高更加显著.结论 TPG和CBP联合用药效果优于CBP单独用药,可进一步提高药物对肿瘤细胞的生长抑制,与降低PCNA和cyclin D表达、升高P21表达有关.
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CD146的研究进展
CD146是近年来发现的一种具有跨膜结构的黏附分子,属于免疫球蛋白(Ig)超家族成员.CD146初是从黑色素瘤细胞上发现的肿瘤相关抗原,介导肿瘤细胞间、肿瘤-内皮细胞间的同型或异型黏附,促进肿瘤牛长、血行转移,是肿瘤进展和转移的标志.国外学者发现,CD146在所有人血管内皮细胞上组成性表达,在平滑肌细胞、活化的T细胞及小脑皮层等组织中均检测到表达.
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亚砷酸钠致人类黑色素瘤细胞凋亡作用
目的 研究亚砷酸钠对人类黑色素瘤细胞凋亡的影响,并比较砷对2种黑色素瘤细胞(G361及A375)凋亡作用的差异.方法 2种细胞分别暴露于亚砷酸钠(NaAsO2)0,1,5,10,20,40 μmol/L以及促凋亡阳性对照物放射菌素5 μg/μl,培养24 h后,收集细胞,用流式细胞仪测定10 000个细胞的凋亡及坏死发生水平.结果 2种细胞在20及40 μmol/LNaAsO2作用下,凋亡发生水平均明显.高于相应对照组;40μmol/L(G361)及20,40μmol/L(A375)NaAsO2作用下坏死水平显著高于对照组;暴露于20,40 μmol/L NaAsO2以及5 μg/μl放射菌素时,A375细胞的凋亡及坏死发生水平均显著低于G361细胞.结论 NaAsO2可致人类黑色素瘤细胞发生凋亡,并对2种人类黑色素瘤细胞凋亡率不同.
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4-硫-5-(2-噻吩基)尿苷体外对黑色素肿瘤细胞增殖作用的影响
目的 探究新化合物4-硫-5-(2-噻吩基)尿嘧啶核苷酸体外对黑色素瘤细胞的增殖作用影响.方法 利用MTT法和磺酰罗丹明B染色法对比考察该化合物对人黑色素瘤细胞(A375)、小鼠黑色素肿瘤细胞(B16)和人正常皮肤细胞体外增殖的影响,并利用流式细胞术检测不同药物浓度下该化合物对人黑色素瘤细胞(A375)周期的影响.结果 4-硫-5-(2-噻吩基)尿嘧啶核苷酸苷体外对人和小鼠的黑色素瘤细胞无种属特异性,均表现出剂量依赖性的抑制作用,但对正常皮肤细胞却无抑制作用;流式细胞术显示:4-硫-5-(2-噻吩基)尿苷导致剂量依赖性的G2细胞累积,抑制细胞有丝分裂;同时具有诱导细胞凋亡的作用.结论 4-硫-5-(2-噻吩基)尿嘧啶核糖核苷酸对黑色素瘤有明显抑制作用,对正常皮肤细胞无抑制作用表明该化合物对细胞作用时具有选择性,有可能成为新型靶向抗癌药物的候选者.
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砷与紫外线联合作用对人黑色素瘤G361细胞系色素代谢的影响
目的:探讨单纯紫外线(UV)暴露与砷(As)和紫外线联合暴露间在色素代谢方面有无差异.方法:采用体外细胞培养法将细胞分为9组(As:0,0.1,1 μmol/L;UV:5,10 mJ/cm2;As+UV:0.1μmol/L+5 mJ/cm2,1μmol/L+5 mJ/cm2,0.1μmol/L+10 mJ/cm2,1 μmol/L+10 mJ/cm2),UV照射后,培养72 h,测定黑色素水平、酪氨酸酶(Tyr)活力及TyrmRNA表达水平.结果:10 mJ/cm2UV组、0.1μ(mol/L+10 mJ/cm2组及1μmol/L+10 mJ/cm2组的黑色素水平分别显著高于5 mJ/cm2组、0.1μmol/L+5 mJ/cm2组、1μmol/L+5 mJ/cm2组及对照组;各组Tyr活力及mRNA表达水平与对照组相比无显著差异.结论:单纯UV作用对黑色素产生水平的影响与亚砷酸纳(NaAsO2)和UV联合作用对黑色素产生水平的影响无差异,砷对紫外线的促黑素化作用没有协同效应.
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人参皂苷诱导黑色素瘤细胞B16-BL6凋亡的机制
目的 探讨人参皂苷诱导黑色素瘤细胞B16-BL6凋亡的机制.方法 培养黑色素瘤细胞B16-BL6,5、10、20、40 μg/ml的人参皂苷作用于黑色素瘤细胞B16-BL6 0、12、24、48、72 h,胆囊收缩素(CCK)8试验检测人参皂苷对细胞增殖的影响;10、20、40 μg/ml的人参皂苷作用于黑色素瘤细胞B16-BL6 48 h后,流式细胞仪检测人参皂苷对细胞凋亡的影响;Western印迹检测与凋亡相关蛋白的表达.结果 随着时间的延长和浓度的增加,人参皂苷对细胞的抑制率增加,表现出时间和浓度的依赖性.72 h后,人参皂苷对细胞的抑制率到了平台期,用5 μg/ml的人参皂苷处理黑色素瘤B16-BL6细胞,细胞的抑制率较低,因此后期选择10、20、40 μg/ml的人参皂苷为研究对象,用10、20、40 μg/ml的人参皂苷作用于黑色素瘤细胞B16-BL6 48 h后,各浓度组早期凋亡和晚期凋亡的细胞显著高于对照组,且呈剂量依赖性(P<0.01).随着人参皂苷浓度的增加,Bax蛋白表达量增加,而Bcl-2蛋白表达量减少,两者之间的比例增加,而且呈剂量依赖性.随着人参皂苷浓度的增加,细胞色素(Cyt)C和细胞凋亡诱导因子(AIF)含量增加,且呈剂量依赖性.结论 人参皂苷抑制黑色素瘤细胞B16-BL6增殖,促进细胞凋亡,其凋亡机制可能与Bcl-2家族Bcl-2和Bax两者之间的比例改变、线粒体膜通透性改变、促使一些凋亡因子的释放有关.
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颗粒溶素活性肽与增强型绿色荧光蛋白融合基因真核表达质粒的构建及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达
目的 构建人颗粒溶素(GLS)活性肽(9ku-GLS)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因的真核表达载体,并检测其在小鼠黑色素瘤细胞B16中的表达.方法 经PCR扩增9ku-GLS基因,插入质粒pBudCE4.1中,经酶切及测序鉴定正确后,亚克隆至质粒pEGFP-C1中,将融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K转染B16细胞,采用荧光显微镜及RT-PCR法检测融合蛋白的表达.结果 融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K经双酶切鉴定证明构建正确,转染B16细胞24 h后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光,且经RT-PCR可扩增出267 bp的目的 基因片段.结论 已成功构建9ku-GLS与EGFP融合基因的真核表达质粒,且在B16细胞中表达了融合蛋白.
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千里光总碱和千里光碱对体外培养的小鼠黑色素瘤细胞增殖的影响
目的 探索千里光总碱和千里光碱对体外培养的小鼠黑色素瘤细胞增殖的影响.方法 采用MTT法观察千里光总碱和千里光碱对小鼠黑色素瘤B16F10株的影响.结果 千里光总碱和千里光碱可以抑制体外培养的小鼠黑色素瘤B16F10株的增殖.结论 千里光总碱和千里光碱可以抑制体外培养的小鼠黑色素瘤细胞的增殖.
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维生素D3对黑色素瘤细胞株生长及凋亡的影响
目的研究维生素D3对黑色素瘤细胞株A375生长及凋亡的影响.方法采用四唑氮蓝比色(MTT)法检测细胞增殖,光镜观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率,末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位酶标记(TUNEL)法计数凋亡细胞.结果10-7mol/L的1.25(OH)2D3可以抑制A375增生,改变细胞周期时相分布,致G0/G1期阻滞,加强细胞毒性化疗药物紫杉醇的作用,促进细胞凋亡.结论维生素D3可以作为细胞凋亡诱导剂,成为新一种黑色素肿瘤治疗药物.
