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通痹灵总碱对T淋巴细胞活化CD71表达的影响
目的:通痹灵总碱(TBL)是从通痹灵中提取出来的总生物碱部位.本研究旨在探索TBL对T淋巴细胞活化CD71表达的影响,探讨通痹灵免疫调控作用的机理.方法:对清洁级小鼠T淋巴细胞进行培养,体外加入通痹灵总碱,采用流式细胞仪检测 T淋巴细胞CD71的表达率.结果:TBL(100μg/mL)对 ConA或 PDB激活的大鼠T淋巴细胞活化表达CD3+CD71+抗原有明显的下调作用(P<0.01),并且随着剂量的增加,其抑制作用加强(P<0.01),呈明显的量效关系;对ConA活化组的作用要强于PDB.结论:TBL对ConA和PDB诱导活化T细胞的CD71表达率均有明显的抑制作用,而且呈明显的量效关系.提示对TBL在T细胞活化信号传导过程有明显作用,在治疗RA的过程中可能可以通过影响上游T淋巴细胞的活化,调节其细胞免疫机制来达到治疗RA的目的.
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康肺扶正方对肺癌患者淋巴细胞生成IL-2、干扰素-γ、白介素-17及CD71表达的影响
目的:探讨康肺扶正方对肺癌患者淋巴细胞生成的白介素-2(IL-2)、白介素-17(IL-17)、干扰素-γ(IFN-γ)及CD71表达的影响.方法:收集肺癌组、对照组各30例患者血中的淋巴细胞,并分别用大、小剂量的康肺扶正方干预淋巴细胞培养;并采用酶联免疫吸附试验盒(ELISA)检测上清中IL-2、IL-17、IFN-γ;流式方法检测淋巴细胞CD71.结果:①肺癌组患者IL-2、IFN-γ、CD71低于对照组(P<0.05),IL-17高于对照组;②加入小剂量康肺扶正方后,与同组内未刺激时相比,IL-2、IFN-γ生成升高,CD71表达增加,IL-17生成减低,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05).③加入大剂量康肺扶正方后,与同组内未刺激时相比,IL-2、IFN-γ生成升高;CD71表达增加,IL-17进一步减低,且两组差异均有统计学意义(P<0.05).结论:康肺扶正方能促进肺癌患者淋巴细胞激活,促进IL-2、IFN-γ和CD71效应分子,减低IL-17,提高AM免疫活性.
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CD71作为增殖指标在血液肿瘤中的表达及与Ki-67的相关性分析
目的:本研究旨在探讨CD71作为增殖指标在血液肿瘤中的表达情况及与Ki-67的相关性,评价CD71替代Ki-67用于流式细胞术(FCM)检测血液肿瘤细胞增殖活性的可行性.方法:分别以细胞系和临床标本为研究对象:①以静止期成熟的B淋巴细胞作为对照,检测血液肿瘤细胞系的细胞周期以及CD71和Ki-67的表达情况,分析CD71的表达与细胞增殖活性和Ki-67表达的相关性;②以非血液病患者成熟B淋巴细胞作为对照,采用Ki-67/CD71/CD45/CD123、Ki-67/CD71/CD45/CD20或Ki-67/CD71/CD45/CD138抗体组合,分析临床标本中白血病细胞和骨髓瘤细胞CD71和Ki-67的表达情况和相关性.结果:①血液肿瘤细胞系CD71的表达情况:在髓系白血病细胞系中HL-60细胞CD71表达率为(99.77 ±0.064)％,NB4细胞CD71表达率为(99.23±0.12)％,THP-1细胞CD71表达率为(98.90 20.30)％,K562细胞CD71表达率为(97.03 20.15)％,在淋巴瘤细胞系中Raji细胞和Mino细胞CD71表达率分别为(99.35 20.21)％和(96.95 20.42)％,均明显高于对照组细胞(P＜0.05);②血液肿瘤临床标本CD71的表达情况:在分化差的急性髓系白血病中CD71表达率为(51.50±19.31)％,在急性早幼粒细胞白血病(AML-M3)中CD71表达率为(35.71±14.02)％,在急性单核细胞白血病(AML-M5)中CD71表达率为(30.54±14.38)％,在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)和急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中CD71表达率分别为(68.40±20.83)％和(39.67±18.27)％,在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中CD71表达率为(1.32±0.33)％,在多发性骨髓瘤(MM)中CD71表达率为(55.49 ±18.15)％,除CLL细胞与对照组细胞差异无统计学意义(P＞0.05)外,其余血液肿瘤细胞CD71表达率均高于对照组细胞(P＜0.05).③血液肿瘤细胞CD71阳性表达率和S期细胞比率(SPF)呈线性正相关(r=0.914,P＜0.05),CD71和Ki-67阳性表达率呈线性正相关(r=0.894,r=0.904,P＜0.05).结论:CD71可以替代Ki-67作为FCM评估血液肿瘤细胞增殖活性的指标,在方法学上FCM检测CD71优于对Ki-67的检测.
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抗CD71人-鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞的效应
目的通过体外实验探讨抗CD71人-鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞效应的影响,并与其鼠源性单克隆抗体进行比较.方法以丝裂原诱导的人外周血单个核细胞(PBMC)为靶细胞,测定嵌合抗体和鼠源性单抗对其增殖抑制率;在新鲜补体存在下,测定补体依赖性嵌合抗体介导的细胞毒效应(CDC).以EBV转化的B细胞为刺激细胞,测定两种抗体对其诱导的同种异体PBMC的增殖抑制率;以同种异体的PBMC为刺激细胞,测定两种抗体在单向、双向混合淋巴细胞培养(MLC)中的增殖抑制率.结果嵌合抗体和鼠源性单抗均可明显抑制丝裂原诱导的PBMC的增殖反应,且二者抑制率差异无显著性(P＞0.05),其抑制作用随抗体浓度增加而增强,PBMC和丝裂原共同孵育12 h后加入抗体的增殖抑制效应明显;在新鲜补体存在下,嵌合抗体对丝裂原诱导增殖的PBMC具有CDC作用,而鼠源性单抗CDC作用较弱;两种抗体对混合淋巴细胞培养反应有明显的抑制作用,且嵌合抗体组抑制率明显高于鼠源性单抗组(P＜0.05).结论抗CD71人-鼠嵌合抗体在体外实验中可抑制淋巴细胞的活化及其效应,其作用明显强于抗CD71鼠源性单克隆抗体.
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抗CD71人-鼠嵌合抗体诱导K562细胞凋亡及其机制探讨
目的研究抗CD71人-鼠嵌合抗体诱导K562细胞凋亡的效应及其机制. 方法台盼蓝拒染法观察抗CD71人-鼠嵌合抗体对K562细胞生存的影响;细胞计数和MTT试验测定嵌合抗体及鼠源性抗体对K562细胞的作用;琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察K562细胞凋亡,以Annexin Ⅴ检测其凋亡率及进行细胞周期分析;并检测胞浆中细胞色素C和活化的caspase-8的相对含量. 结果抗CD71嵌合抗体及鼠源性抗CD71抗体均可抑制K562细胞的增殖作用,且二者抑制作用差异无显著性(P＞0.05).经琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察分别可见抗体诱导的K562细胞DNA梯形条带和细胞凋亡的形态改变,细胞周期分析可见其将细胞周期阻止在G1期,胞浆中细胞色素C含量增加而活化的caspase-8的含量不增加. 结论抗CD71人-鼠嵌合抗体可通过线粒体死亡途径诱导K562人红白血病细胞凋亡,其诱导凋亡可能与其干扰细胞铁离子转运有关.
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缺铁性贫血患者血清Hepcidin和红细胞CD71的变化
目的 探讨缺铁性贫血患者血清Hepcidin和红细胞CD71的变化及其意义.方法 分别应用酶联免疫吸附法和流式细胞仪检测50例缺铁性贫血患者(病例组)和20例健康体检者(对照组)血清Hepcidin和红细胞CD71水平.结果 病例组与对照组比较血清Hepcidin明显降低(P＜0.01),红细胞CD71明显升高(P＜0.01).中度贫血组和重度贫血组血清Hepcidin 与轻度贫血组比较明显降低(P均＜0.05),重度贫血组红细胞CD71与轻度贫血组比较明显升高(P＜0.05).病例组血清Hepcidin与血红蛋白(Hb)、红细胞平均体积(MCV)、平均血红蛋白含量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)和血清铁蛋白(SF)呈正相关(P均＜0.05),与红细胞分布宽度(RDW)呈负相关(P＜0.01),与网织红细胞百分比(RET％)和红细胞CD71无相关性(P均＞0.05)；红细胞CD71与Ret％呈正相关(P＜0.01),与HB、MCV、MCH、MCHC、SF和RDW无相关性(P均＞0.05).结论 缺铁性贫血患者血清Hepcidin降低和红细胞CD71升高,其变化程度与疾病严重程度相关.
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中药八珍汤对TGF-β1抑制下人T淋巴细胞功能恢复的研究
目的 探讨中药八珍汤对TGF-β1抑制下人T淋巴细胞功能恢复的效果.方法 取正常人外周血T淋巴细胞并加入TGF-β1制备成人T淋巴细胞功能抑制模型;实验共设对照组、PHA组、PHA+八珍汤组、PHA+TGF-β1组、PHA+TGF-β1+八珍汤组等5组;分别采用流式细胞仪检测T淋巴细胞CD71的表达和ELISA法检测T淋巴细胞TNF-β1的分泌等指标,以判定T淋巴细胞的功能状况.结果 与PHA+TGF-β1组比较,PHA+TGF-β1+八珍汤组的T淋巴细胞CD71表达有显著性增强(P<0.01);T淋巴细胞分泌TNF-β的能力明显恢复(P<0.01),但都未能恢复到TGF-β1抑制前的水平.结论 中药八珍汤对TGF-β1抑制下人T淋巴细胞的功能恢复具有显著作用.
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小鼠黑素瘤细胞培养上清对同型小鼠淋巴细胞转铁蛋白受体CD71的抑制作用分析
目的 通过检测小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)培养上清对同型小鼠淋巴细胞活化分子CD71表达的抑制,探讨黑素瘤细胞抑制淋巴细胞活化、介导肿瘤细胞免疫逃逸的机制.方法 用B16F10培养上清培养同型小鼠脾淋巴细胞(上清组),经植物血凝素活化,用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞转铁蛋白受体CD71表达水平,用RPMI 1640完全培养液代替B16F10培养上清作为对照组.结果 上清组培养上清培养的淋巴细胞CD71表达率为(55.41±3.70)%低于对照组的(60.92±2.02)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 B16F10培养上清对淋巴细胞表达CD71具有抑制作用,可抑制淋巴细胞活化,成为免疫逃逸机制之一.
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CD71与IgA肾病
CD71分子,又称转铁蛋白受体(TfR),是与细胞的成熟、增殖、分化密切相关的分子,在许多类型的细胞表面均有表达.目前对CD71的研究已涉及到血液、肿瘤等许多与免疫相关的领域.但国内外对它与肾脏疾病的关系研究甚少,本文主要讨论它的功能作用与IgA肾病的关系.
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CD71在IgA沉积性肾炎患者肾小球表达的研究
目的:研究CD71在IgA沉积性肾炎患者肾小球表达的特征及其与IgA分子表达之间的关系,探讨其在IgA肾病发病机制中的作用.方法:在免疫荧光显微镜下观察IgA肾病组35例患者和非IgA肾病性IgA沉积组31例患者肾小球上抗-CD71抗体和抗人IgA抗体的表达情况.结果:CD71在两组患者骨小球系膜上呈现不同程度的高表达,且与IgA的表达程度相关(r=0.992,P<0.01);CD71在IgA肾病组的表述高于非IgA肾病性IgA沉积组.结论:CD71在IgA肾病患者和非IgA肾病性IgA沉积患者肾小球上出现不同程度的高表达,而且在IgA肾病组的表达高于非IgA肾病性IgA沉积组,认为其在IgA肾病形成中的免疫发病机制方面发挥着重要的作用.
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应用磁珠细胞分离仪从母血中分离胎儿细胞的研究
目的研究利用免疫磁珠细胞分离仪分离孕妇血中胎儿细胞的效率.方法孕妇血采自孕龄为21～40周,初孕的孕男性单胎正常孕妇16例.脐血来 自胎龄38～40周的男性新生儿10例.标本根据CD71抗体的效价标记磁珠后放在磁场中进行磁 珠细胞分离.分离后的脐血标本在流式细胞仪上检测分离效率,孕妇血标本经套式PCR方法 鉴定男性SRY基因片段.根据CD71-FITC抗体效价标记脐血中的单个核细胞.同时利用流式细 胞仪检测和分离脐血中的胎儿细胞.结果利用磁珠细胞分离仪分离孕妇血 中的胎儿有核红细胞,经套式PCR技术寻找男性胎儿SRY基因片段.经第一次扩增有效率87.5 %,第二次扩增有效率100.0%.脐血中胎儿有核红细胞在分离前占53.2%～74.9%;分离后, 流式细胞仪富集为99.2%～99.8%,免疫磁珠细胞分离仪富集为97.3%～99.4%.结论 免疫磁珠细胞分离仪可富集到98.3%的胎儿有核红细胞,经套式PCR技术在分离后 的孕妇血中可确定100%的男性胎儿SRY基因片段.该项技术简单,价廉,高效更适用于临床 .
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抗CD71人-鼠嵌合抗体(D2C)的构建和表达
目的:构建抗CD71人-鼠嵌合抗体的真核细胞表达载体并在真核细胞中表达嵌合抗体.方法:将鼠源性抗CD71单抗(7579)重、轻链可变区基因(VH和VL)分别克隆至含有人IgG轻、重链恒定区的表达载体pγ-Expr和pκ-Expr中;将嵌合表达载体(Chi7579-pγ-Expr和Chi7579-pκ-Expr)经电转染技术共转染至真核细胞(SP2/0)中.结果:经ELISA法检验阳性转染瘤细胞培养上清,证明其表达蛋白产物中同时具有人IgG重链恒定区(Cγ)和轻链恒定区(Cκ)蛋白;通过间接免疫荧光流式细胞术(FCM)和间接免疫荧光显微技术,证明该表达产物能够特异性识别和结合表达于靶细胞表面的CD71分子.结论:抗CD71人-鼠嵌合抗体(D2C)在体外真核细胞表达成功.
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急性白血病患儿白血病干细胞表面CD96和CD71的表达对其疗效和预后的影响
目的:观察白血病干细胞(LSC)表面CD96和CD71表达对急性白血病患儿疗效及预后的影响,阐明白血病患儿LSC的分子生物学特征与其疗效和预后的关联性.方法:选择80例急性白血病患儿作为研究对象,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)39例,急性髓系白血病(AML)41例.应用流式细胞术对其LSC表面CD96和CD71表达情况进行检测,对患者的首次化疗疗效、5年生存率、化疗后感染、化疗后复发和髓外浸润发生率进行观察和比较.结果:38例(47.5%)患儿LSC表面CD96阳性表达,45例(56.3%)患儿LSC表面CD71阳性表达,2种抗原阳性表达率比较差异无统计学意义(χ2=1.227,P=0.268);AML患儿LSC表面CD96和CD71阳性表达率均明显高于ALL患儿(χ2=22.225,χ2=34.028,均P<0.01).LSC表面CD96阴性表达患儿首次化疗后的临床有效率和疗效分布均优于LSC表面CD96阳性表达患儿,LSC表面CD71阴性表达的患儿首次化疗后的临床有效率和疗效分布优于LSC表面CD71阳性表达患儿(χ2=11.323,χ2=16.589,P<0.05;U=2.939,U=2.291,P<0.05).LSC表面CD96阴性表达患儿的5年生存率明显高于LSC表面CD96阳性表达患儿(χ2=5.051,P<0.05),化疗后感染、化疗后复发和髓外浸润发生率明显低于LSC表面CD96阳性表达患儿(χ2=8.316,χ2=13.288,χ2=5.389,均P<0.05);LSC表面CD71阴性表达患儿化疗后感染发生率和化疗后复发率明显低于LSC表面CD71阳性表达的患儿(χ2=6.622,χ2=10.787,均P<0.05).结论:急性白血病患儿LSC表面的CD96和CD71表达水平与疾病亚型、首次化疗疗效具有一定的关联性,可作为辅助诊断和评价疗效的标志物;CD96的表达水平与患者的预后具有关联性,可作为预测患儿预后的指标.
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抗转铁蛋白受体鼠源性单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定
目的利用基因工程技术将鼠源性单克隆抗体WuT9改造成单链抗体.方法从分泌抗CD71单克隆抗体的杂交瘤细胞WuT9中提取总RNA,采用Oligod T为逆转录引物,逆转录合成eDNA第一链,然后分别采用VL和VH框架区的PCR引物,扩增VH(重链可变区)和VL(轻链可变区)DNA片段,利用事先合成的存在于VL下游引物和VH上游引物的部分人工连接子重叠互补序列,将VL和VH的PCR回收产物进行部分重叠PCR(SOE),形成单链抗体基因.后将此基因重组进表达载体pBAD/gⅢ/C中,经L-arabinose(左旋阿拉伯糖)诱导表达并初步鉴定.结果构建出700bp左右的单链基因,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27000左右的蛋白分子.结论经因特网查询表明,单链抗体基因重链部分属于小鼠H链可变区Ⅰ A亚组;轻链属于小鼠k轻链可变区Ⅱ亚组,此单链抗体基因的表达产物具有一定的特异结合活性.本研究为抗CD71单链抗体的临床应用打下了基础.
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肺癌组织CD44、CD71的检测及与病理学的关系
目的 了解肺癌组织CD44、CD71的表达与病理学的关系.方法 应用流式细胞术对53例肺癌患者癌组织的CD44、CD71进行检测,并与其组织细胞学分类、分型,年龄,淋巴结转移等进行分析.结果 CD44、CD71在低分化肿瘤细胞的表达明显高于中、高分化肿瘤细胞;肺肿瘤发生淋巴转移时,其CD44的表达明显增高,60岁以下患者CD71表达率明显高于60岁以上的患者.结论 肺癌组织CD44的表达与肿瘤细胞的分化程度、淋巴结转移有关,CD71的表达与肿瘤细胞的分化程度、患者的年龄有关.
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CD71在缺铁贫血患者治疗中的临床价值研究
目的:探讨缺铁性贫血治疗中红细胞膜上CD71变化的临床意义.方法:运用流式细胞仪检测缺铁性贫血患者使用铁剂治疗前后红细胞膜上CD71的表达情况.结果:缺铁性贫血患者红细胞膜CD71水平治疗前后比较有明显差异.结论:检测红细胞膜CD7l表达的变化可作为缺铁性贫血患者铁剂治疗是否有效临床指标.
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测定胃组织CD44+、CD71+细胞的临床意义
我们用流式细胞术(FCM)检测62例胃癌患者组织及其切缘组织、15例慢性萎缩性胃炎患者胃组织中CD44+、CD71+细胞含量,探讨其在胃癌中的变化.1.材料和方法1.1研究对象62例未经治疗、病理确诊的胃癌患者,手术切取胃癌组织标本及配对切缘组织.患者中男41例,女21例,年龄30～78岁,平均56岁.
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单核细胞微粒诱导T细胞活化并分泌细胞因子
目的 研究凋亡单核细胞系(THP-1)来源的微粒(MDMPs)对体外培养的T细胞系(Jurkat)以及健康人外周血单个核细胞(PBMC)细胞活性的影响,探讨MDMPs在免疫应答中的作用.方法 将凋亡THP-1来源的MDMPs按照低、中、高浓度(10、20和40 μg/mL)分别与Jurkat细胞和PBMC共育,用流式细胞术检测T淋巴细胞活化分子CD71的表达及培养上清液中相关细胞因子的分泌情况.结果 与阴性对照组相比,中、高浓度MDMPs均能诱导Jurkat细胞表面CD71表达水平升高(q分别为2.96、3.47,P均＜0.05);低、中、高浓度MDMPs均能上调PBMC表面CD71的表达水平(q分别为3.08、5.30、7.06,P均＜0.05).中、高浓度MDMPs可刺激Jurkat细胞分泌IL-6(q分别为3.10、5.50,P均＜0.05);低、中、高浓度MDMPs可刺激PBMC分泌IL-10(q分别为2.94、2.86、3.26,P均＜0.05),高浓度MDMPs还可刺激PBMC分泌IFN-γ(q =4.31,P＜0.01).结论 单核细胞可能通过释放MDMPs的方式刺激T细胞活化并产生细胞因子.
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sTfR、红细胞膜CD71检测在缺铁性贫血中的诊断价值
目的 探讨血清转铁蛋白受体(sTfR)、红细胞膜CD71检测在缺铁性贫血中的诊断价值.方法 采用散射免疫比浊法定量测定正常对照组、缺铁性贫血(IDA)组、慢性病贫血伴缺铁(CDID)组、慢性病贫血(ACD)组sTfR.运用流式细胞仪检测其红细胞膜上CD71的表达情况.结果 IDA、CDID组sTfR和红细胞膜CD71水平与ACD组及正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01) ACD组sTfR水平和红细胞膜CD71水平与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 sTfR、红细胞膜CD71检测可作为缺铁性贫血、慢性病贫血伴缺铁的临床诊断指标.
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抗CD71单抗与蓖麻毒蛋白A链免疫毒素的制备及其体外抗肝癌细胞效应的研究
目的 因抗CD71单抗具有靶向定位特性,及利用蓖麻毒蛋白A链(RTA)的细胞毒性,将两者进行偶联,构建免疫毒素CD71 Mab-RTA,并研究其体外抗肝癌细胞效应.方法 从蓖麻籽中提纯RTA,以N-琥珀酰胺-3-(2-吡啶二硫)丙酸酯[N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)-propionate,SPDP]作为偶联剂,偶联抗CD71单抗,构建免疫毒素(IT),以SDS-PAGE检测IT,以间接ELISA方法测定IT的免疫反应性,以WST-1法测定IT的体外抗肝癌细胞效应.结果 蓖麻籽经过研磨、过滤、亲和层析、凝胶层析、离子交换层析等步骤成功提纯RTA.提纯的RTA与CD71 mab进行偶联,成功构建免疫毒素CD71 Mab-RTA,SDS-PAGE结果显示,在非还原状态下,为一条分子量＞ 116kD的单一电泳条带,在还原状态下,为三条电泳条带,分别位于约55kD处、约32kD处及约28kD处.间接ELISA结果显示,免疫毒素与单抗的曲线走势一致,但各浓度下OD值均较单抗组略低.WST-1结果显示,IT在各浓度梯度下均表现出对HepG2细胞和LO2细胞不同的杀伤作用(P＜0.05).结论 CD71 mab-RTA基本保留了免疫反应性,及表现出对HepG2细胞和LO2细胞的不同体外细胞毒效应,提示对肝癌细胞具有较好的靶向细胞毒作用,有望成为新型的抗肝癌药物.
