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紫草素对银屑病T淋巴细胞增殖、活化的影响
目的:研究具有凉血、解毒作用的中药单体紫草素对银屑病病理状态下异常活化的T淋巴细胞功能及相关信号转导通路的影响.方法:选取Jurkat E6-1 T淋巴细胞,以佛波醇酯和离子霉素活化Jurkat E6-1 T淋巴细胞,同时将0.5～2μg/mL浓度的紫草素作用于细胞,采用CCK-8法检测T淋巴细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞膜CD69的表达及细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测T淋巴细胞释放白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;用Realtime-PCR和Western blotting法分别观察核转录因子mRNA及蛋白的表达影响.结果:不同浓度的紫草素均可明显抑制细胞增殖、CD69表达及Th1类细胞因子分泌;均可有效降低[Ca2+]i和蛋白激酶C(PKC)磷酸化蛋白的水平;显著降低核转录因子NF-AT mRNA的表达,下调c-Jun的mRNA及蛋白表达并可抑制核因子-κB蛋白的表达.以上各项指标均有一定量效关系.结论:紫草素可以通过抑制过度活化的T淋巴细胞功能从而发挥免疫调控作用,为紫草素治疗银屑病的作用机制及应用前景提供实验依据.
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通痹灵总碱对T淋巴细胞活化CD71表达的影响
目的:通痹灵总碱(TBL)是从通痹灵中提取出来的总生物碱部位.本研究旨在探索TBL对T淋巴细胞活化CD71表达的影响,探讨通痹灵免疫调控作用的机理.方法:对清洁级小鼠T淋巴细胞进行培养,体外加入通痹灵总碱,采用流式细胞仪检测 T淋巴细胞CD71的表达率.结果:TBL(100μg/mL)对 ConA或 PDB激活的大鼠T淋巴细胞活化表达CD3+CD71+抗原有明显的下调作用(P<0.01),并且随着剂量的增加,其抑制作用加强(P<0.01),呈明显的量效关系;对ConA活化组的作用要强于PDB.结论:TBL对ConA和PDB诱导活化T细胞的CD71表达率均有明显的抑制作用,而且呈明显的量效关系.提示对TBL在T细胞活化信号传导过程有明显作用,在治疗RA的过程中可能可以通过影响上游T淋巴细胞的活化,调节其细胞免疫机制来达到治疗RA的目的.
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参七汤干预冠心病支架植入术后再狭窄临床研究
目的 观察参七汤对冠心病支架植入术后炎症免疫反应、机体免疫状态以及再狭窄的影响,并探讨其作用机理.方法 冠心病支架植入术后患者88例,采用随机、对照方法分为治疗组45例和对照组43例.对照组采用西医常规治疗,治疗组在其基础上加用参七汤,疗程6个月,观察再狭窄发生率、超敏C-反应蛋白(hsCRP)、活化的T淋巴细胞(CD3+/HLA-DR+)、可溶性白细胞介素-2受体(SIL-2R)及血瘀证、气虚证积分.结果 治疗组再狭窄率低于对照组(P＜0.05).冠状动脉介入术后,CD3+/HLA-DR+较术前降低,SIL-2R、hsCRP较术前升高,治疗组治疗后CD3+/HLA-DR+水平较对照组升高(P＜0.01),SIL-2R,hsCRP水平较对照组降低(P＜0.01),血瘀证积分和气虚证积分亦显著低于对照组(P＜0.01),且持续到术后6个月.结论 参七汤能有效减少冠心病冠状动脉介入术后再狭窄的发生.减少支架引起的炎症免疫反应,调节机体免疫状态,是其预防冠状动脉介入术后再狭窄的机制之一.
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2型糖尿病患者T淋巴细胞活化与颈动脉内中膜厚度的相关性
目的 探讨2型糖尿病患者T淋巴细胞活化与颈动脉内中膜厚度(IMT)的关系. 方法 121例2型糖尿病患者根据IMT水平分为IMT正常组与IMT增厚和斑块形成组,测定淋巴细胞活化水平、生化指标及基本临床资料. 结果 (1)CD3~+HLA-DR~+细胞比率在IMT增厚和斑块形成组显著高于对照组[(11.16±6.88 vs 6.91±3.33)%,P<0.05],IMT正常组与对照组的差异无统计学意义;(2)偏相关分析显示,CD3~+HLA-DR~+细胞比率与IMT呈正相关;CD3~+HLA-DR~+细胞比率、年龄、SBP为影响颈动脉IMT水平的独立相关因素. 结论 T淋巴细胞活化正相关于颈动脉IMT,可能参与T2DM大动脉硬化的发病机制.
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凉血解毒方对Jurkat T淋巴细胞增生、活化及细胞因子分泌的影响
目的 研究凉血解毒方含药血清对模拟银屑病病理状态的T淋巴细胞增生、活化及释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为阐明凉血解毒类中药治疗银屑病血热证的作用机制和临床治疗提供实验依据.方法 选用Jurkat E6-1 T淋巴细胞株为研究材料,以不同剂量的凉血活血胶囊药物粉末灌服大鼠,制备大鼠含药血清.将含药血清预先与细胞孵育3 h,用多克隆刺激剂佛波醇酯(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)活化T淋巴细胞.采用CCK-8比色法检测含药血清对活化及正常的T淋巴细胞增生的影响;采用流式细胞术观察药物对T淋巴细胞早期活化标志分子CD69表达的影响;采用酶联免疫夹心法(ELISA)检测药物对T淋巴细胞所释放TNF-α含量的影响.结果 低、中、高3种剂量的凉血解毒方含药血清均可使活化的T淋巴细胞数量明显下降,且排除药物毒性作用.不同剂量的药物均可显著降低T淋巴细胞早期活化标志分子CD69的表达,不同浓度的药物均可抑制T细胞分泌TNF-α.结论 临床用于治疗银屑病的常用有效方剂凉血解毒方能显著抑制T淋巴细胞增生、活化及炎性反应细胞因子的释放.
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EV71型手足口病患儿外周血T淋巴细胞活化状态与病情进展的相关性
目的 探讨肠道病毒71型(EV71)手足口病(HFMD)患儿外周血T淋巴细胞活化状态与病情进展的相关性.方法 选取140例经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定性法检测粪便呈EV71病毒核酸阳性的HFMD患儿,依据临床分期标准分为普通病例组(60例)、重型病例组(45例)、危重型病例组(35例),另选同期健康体检儿童50例作为对照组,检测并比较各组外周血T淋巴细胞亚群分布及其活化状态.结果 EV71型HFMD患儿各组外周血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞绝对计数及CD4+/CD8+比值显著低于对照组(P<0.05);普通病例组患儿外周血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞绝对计数及CD4+/CD8+比值明显高于重型病例组及危重型病例组(P<0.05);重型病例组外周血CD3+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞绝对计数及CD4+/CD8+比值明显高于危重型病例组(P<0.05).EV71型HFMD患儿各组HLA-DR+CD4+、HLA-DR+CD8+、CD38+CD4+、CD38+CD8+活化亚群百分比显著高于对照组(P<0.05);普通病例组患儿HLA-DR+CD4+、HLA-DR+CD8+、CD38+CD4+、CD38+CD8+活化亚群百分比明显低于危重型病例组,且重型病例组HLA-DR+CD4+、CD38+CD8+活化亚群百分比明显低于危重型病例组,差异具有统计学意义(P<0.05);普通病例组患儿HLA-DR+CD4+、CD38+CD8+活化亚群百分比明显低于重型病例组(P<0.05).经Pearson相关性分析发现,HLA-DR+CD4+、CD38+CD8+活化亚群百分比与手足口病病情进展呈极强正相关(r=0.878、0.867,P<0.05),HLA-DR+CD8+、CD38+CD4+活化亚群百分比与手足口病病情进展呈中等程度正相关(r=0.415、0.525,P<0.05).结论 EV71型HFMD患儿外周血T淋巴细胞数量显著减少,但其活化程度增加,且活化程度与病情进展密切相关.
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原核表达的重组人B7.2 IgV区分子在体外实验中具有刺激活性
目的研究人B7.2分子中IgV和IgC 结构域何者含有与受体结合的位点；对由原核系统表达的B7.2蛋白体外共刺激活性作出评价。 方法 用PCR方法扩增人B7.2分子胞外区的三个片段，即IgV、IgC和包括IgV和IgC在内的Ig（V+C）区段，将三片段克隆入pGEM-Teasy。继而将三片段克隆入原核表达载体pGEX-4T-3，得到pGEX-4T-3-hB7.2 IgV、pGEX-4T-3-hB7.2 IgC和pGEX-4T-3-hB7.2 Ig(V+C)三个重组体，将三重组体转化宿主菌DH5α。经SDS-PAGE和Western blot证实与GST融合存在的相应靶蛋白的表达。用抗CD3单抗模拟T细胞活化的第一信号，用［3H］-TdR掺入法观察加入目的蛋白作为第二信号可否对T细胞活化起协同效应。结果 工程菌可表达出人B7.2分子的三种融合蛋白：GST-hB7.2 IgV、GST-hB7.2 IgC和GST-hB7.2 Ig(V+C)， 且以包涵体形式存在。在第一信号存在条件下，GST-hB7.2 Ig(V+C)和GST-hB7.2 IgV均能协同第一信号活化T淋巴细胞，但GST-hB7.2 IgC无此功能。 结论 细菌可表达出具有功能活性的人B7.2融合蛋白，单一的人B7.2 IgV结构域足以与受体结合，共刺激T细胞活化。
关键词： 人B7.2/CD86 免疫球蛋白结构域 共刺激 T淋巴细胞活化 融合蛋白 -
1,25(OH)_2D_3抑制卵巢切除小鼠骨髓中T淋巴细胞活化的研究
Ⅰ型骨质疏松发病的主要原因是妇女绝经后雌激素缺乏,由此引起的骨折严重影响寿命和生活质量.维生素D(VD)在体内的作用非常广泛~([1]),而对骨质疏松的防治作用已得到公认,但VD调节雌激素缺乏后骨代谢的机制尚不清,在体内VD是通过促进肠道钙吸收影响骨代谢还是对成骨细胞或破骨细胞有直接作用?或者还有其它机制?本实验利用卵巢切除小鼠模型研究雌激素缺乏后骨髓中T淋巴细胞的变化,并探索活性VD(1,25(OH)_2D_3)调节雌激素缺乏性骨丢失的免疫学机制.
关键词： 1 25(OH)_2D_3 卵巢切除小鼠 T淋巴细胞活化 -
脾肺气虚证HIV/AIDS患者CD8+CD38+T淋巴细胞及自然杀伤细胞变化的分析
目的:探索HIV/AIDS脾肺气虚证患者T淋巴细胞活化及自然杀伤细胞数量变化.方法:对河南省某地区的HIV/AIDS患者进行调查,筛选出脾肺气虚证患者26例,并在该地区筛选出20例健康人作为对照.采集患者和健康者的抗凝血液.应用流式细胞术检测外周血中CD8+T淋巴细胞绝对数量以及CD8 CD+T和CD56CD16 CD3-细胞的绝对数量和百分率.结果:和健康组比较,脾肺气虚组CD8+ T和CD8 CD3+T细胞数量和百分率均显著升高(P ＜0.05-0.01);CD56 CD16 CD3细胞数量和百分率均显著降低(P＜0.01).结论:脾肺气虚证患者CD8+T淋巴细胞显著活化.NK细胞数量明显下降,提示:脾肺气虚证患者的天然免疫功能受到一定的损害.
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022 B7/CD28/CTLA-4协同刺激通路与T淋巴细胞的活化
近10年来研究发现抗原呈递细胞上的协同刺激分子与T淋巴细胞表面的相应受体结合后可产生并传递协同刺激信号,此信号在T细胞活化中起着重要作用,其中具代表性的协同刺激信号来自B7/CD28/CTLA-4协同刺激通路.本文就此通路与T细胞活化的关系作一综述.
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再生障碍性贫血患者淋巴细胞亚群及T细胞活化水平的分析
目的:观察再生障性贫血患者外周血的淋巴细胞亚群的变化和T细胞活化,探讨免疫机制在再障发病中的作用.方法:用流式细胞术直接免疫法检测48例再障患者外周血淋巴细胞亚群及T细胞的HLA-DR表达.结果:再障组患者的CD4+、CD8+细胞明显增高,CD4+/CD8+比值降低,CD8+HLA-DR+细胞明显增加.结论:再障患者存在淋巴细胞亚群的失调及T细胞的异常活化.提示由T淋巴细胞介导的免疫异常对造血功能的抑制在再障的发生中起重要作用.
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肾复康汤剂对IgA肾病患者外周血T淋巴细胞体外作用研究
目的：观察肾复康汤剂体外对IgA肾病患者外周血T淋巴细胞活化功能的影响。方法检测75例IgA肾病患者和38例对照组CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞上活化指标CD25、CD69、HLA-DR的表达，并将PBS、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的肾复康汤剂作用于 IgA肾病患者的CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞，观察CD25、CD69、HLA-DR的表达变化。结果 IgA肾病患者组中CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞上HLA-DR的表达率均高于对照组，差异均有统计学意义（t分别=5.03、5.87，P均＜0.05）。两组中CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞上CD25、CD69的表达比较，差异均没有统计学意义（t分别=1.43、1.64、1.91、1.69，P均＞0.05）。不同浓度肾复康汤剂和PBS孵育对照组间的CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞上的CD25、CD69、HLA-DR表达率比较，差异均无统计学意义（F分别=0.19、0.49、0.20、0.59、0.78、0.51，P均＞0.05）。结论肾复康汤剂对IgA肾病患者肾脏的保护作用可能和其能降低外周血T淋巴细胞的活化潜能有关。
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(Pyr1) apelin-13对Jarkat T淋巴细胞增殖和活化的影响
目的 探讨(Pyr1) apelin-13对Jurkat T淋巴细胞增殖和活化的影响.方法 用(0、10、50) nmol/L(Pyr1) apelin-13处理Jurkat T淋巴细胞24h后,用CCK-8法检测细胞增殖能力的变化;用抗CD3抗体和抗CD28抗体包被并活化JurkatT淋巴细胞,观察(Pyr1) apelin-13对Jurkat T淋巴细胞活化的影响;实时定量PCR检测CD69、CD25、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)及程序性死亡蛋白1(PD-1)的mRNA水平.结果 (Pyr1) apelin-13对Jurkat T淋巴细胞增殖无影响,但通过增加CD69和CD25的表达促进Jurkat T淋巴细胞活化,但对CTLA-4和PD-1表达影响不明显.结论 (Pyr1) apelin-13促进Jurkat T淋巴细胞活化.
关键词： (Pyr1) apelin-13 T淋巴细胞活化 CD69 CD25 -
山奈酚对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响
目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养.流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;MTT法检测KA对T细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期.结果:终浓度为10、20和40 μmol/L的KA可以显著抑制ConA刺激的T细胞CD69的表达,由ConA组的(39.11±1.17)%,分别降低为(30.64±0.23)%、(27.95±0.04)%和(5.63±0.37)%(P<0.05);MTT法结果显示,KA对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;PI染色结果显示,随着KA浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期.结论:KA可显著抑制ConA刺激下的小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖;它能抑制T淋巴细胞进入细胞分裂期.
