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高良姜素对缺血性脑卒中大鼠脑线粒体代谢相关酶的影响
目的：观察高良姜素对缺血性脑卒中大鼠脑线粒体能量代谢相关 ATP 酶的影响，探讨高良姜素通过干预线粒体能量代谢障碍发挥缺血性脑卒中保护作用的可能机制。方法：将120只雄性 SD 大鼠随机分成两大组，即术前给药组和术后给药组，每大组中又分为假手术组、模型组、阳性药银杏叶提取物 EGb761组（mg·kg －1）及高良姜素高、中、低剂量组（100，50，25 mg·kg －1），每组10只。大鼠行中动脉栓塞手术前15 min 或者术后6 h 灌胃给药或给予等量生理盐水，于手术后24 h 进行神经功能学评分，制备缺血侧脑组织线粒体悬液，并对其 Na ＋-K ＋ATP 酶，Ca2＋-ATP 酶，Mg2＋-ATP 酶，Ca2＋-Mg2＋ATP 酶活性进行检测。结果：高良姜素中剂量和高剂量组，Na ＋-K ＋ATP 和 Ca2＋-Mg2＋ATP 酶活性均有明显提高（P ＜0.05），低剂量组酶活性无明显改变；相比较，Ca2＋-ATP 酶，Mg2＋-ATP 酶活性各组之间没有明显的差别。结论：高良姜素能明显提高缺血性脑卒中大鼠脑线粒体 Na ＋-K ＋ATP 酶和 Ca2＋-Mg2＋ATP 酶活性，缓解缺血脑细胞的能量代谢障碍，是其发挥脑缺血保护作用的可能机制之一。
关键词： 高良姜素 缺血性脑卒中 线粒体 能量代谢 Na+-K+ATP酶 Ca2+-Mg2+ATP酶 -
基于多成分同时检测的良附丸质量控制
目的:建立一种同时检测良附丸中主要成分的定性、定量方法,为其质量控制标准提供参考.方法:采用薄层色谱法(TLC),以硅胶GF254为薄层板,石油醚(60 ～ 90℃)-乙酸乙酯(5:1)为展开剂,于254,365 nm波长下检视,对良附丸中高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮5种特征性成分同时进行定性鉴别;高效液相色谱法(HPLC),采用PhenomenexC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇(A)-0.2％磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 30 min,55％A;30～45 min,55％ ～70％A;45 ～ 70 min,70％ A),检测波长242 nm,流速1.0 mL· min-,柱温30℃,对5种特征性成分含量进行同时测定.结果:该法可在同一条件下实现对良附丸中5个特征性成分的同时检测,不同批次良附丸的高良姜素质量分数在3.33～3.81 mg·g-1,山柰素质量分数在1.13～1.29 mg·g-1,香附烯酮质量分数在0.57～1.12 mg·g-1,圆柚酮质量分数在0.02 ～0.09 mg·g-1,α-香附酮质量分数在0.36～0.54 mg·g-1.结论:该方法简便、可行、重复性好,可为进一步完善良附丸质量标准,为其二次开发奠定基础.
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HPLC同时测定维吾尔族药复方小艾飞中5种有效成分的含量
目的:建立HPLC同时测定复方小艾飞中槲皮素、山柰素、乔松素、高良姜素4种黄酮类成分及胡椒碱含量的方法.方法:采用Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),以乙睛(A)-1％磷酸溶液(B)-甲醇(C)为流动相,梯度洗脱(0～12 min,28％A∶52％B∶20％C;12～13 min,28％ ～30％A,52％ ～50％B,20％C;13～45 min,30％A∶50％B∶20％C),流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,进样量20 μL,检测波长280 nm.结果:槲皮素、山柰素、乔松素、高良姜素、胡椒碱的标准曲线分别为Y=357314X-88 066(r =0.999 9),Y=442 853X-74 204(r =0.999 9),Y=647 926X-327 436(r =0.999 9),y=471 672 X-256 408(r=0.999 9),Y=290 000X-391 906(r=0.999 9),线性关系良好.平均加样回收率(n=9)分别为98.4％(RSD 1.6％),98.9％ (RSD 1.7％),101.3％ (RSD 2.2％),98.6％ (RSD 2.1％),98.6％ (RSD 1.8％).结论:该方法准确、简便,具有良好的重复性,可用于维吾尔族药复方小艾飞的质量控制.
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RP-HPLC测定蜂胶中乔松素、白杨素和高良姜素的含量
目的:采用反相高效液相色谱法测定蜂胶中乔松素、白杨素和高良姜素的含量.方法:使用YMC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1％磷酸(40∶ 60),流速1.0mL·min-1,检测波长,乔松素290 nm,白杨素和高良姜素268 nm,柱温30℃.结果:乔松素、白杨素和高良姜素分别在4.266 ～ 426.6,4.59 ～459,4.322～ 432.62 mg·L-线性关系良好,平均回收率(n=6)分别为98.28％,98.82％,100.77％,RSD分别为0.89％,0.90％,1.32％.结论:方法简便、准确、重复性好,可为蜂胶的质量控制提供实验依据.
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高效液相色谱法测定良附微乳口服液中高良姜素的含量
目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定良附微乳口服液中高良姜素含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Diamonsil C18(5μm,150 mm×4.6 mm),以甲醇-0.5%H3PO4(58:42)为流动相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为360 nm,柱温40℃.结果:高良姜素在(0.005～0.04)mg·mL-1范围内呈良好的线性关系,r=0.999 4,平均回收率为99.0%,RSD为2.0%(n=5).结论:该方法简便、准确、可靠,可用于良附微乳口服液的质量控制.
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不同纯度高良姜素对A375-HaCaT共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响
目的：研究不同纯度高良姜素对人黑色素瘤细胞-人永生化角质形成细胞(A375-HaCaT)共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响。方法利用Transwell技术建立A375-HaCaT共培养体系,以0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良姜素作用于共培养模型。采用MTT比色法检测细胞增殖,NaOH裂解法测定黑素含量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,ELISA法检测HaCaT细胞因子干细胞生长因子(SCF)、内皮素(ET)-1的表达。结果 A375-HaCaT共培养模型中的A375细胞生长良好,0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良姜素对共培养体系中的A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成均具有上调作用。各纯度高良姜素浓度≥0.5μg/mL时,能够提高HaCaT细胞中的ET-1和SCF等细胞因子的表达水平,且纯度70%的高良姜素作用强度优于90%的高良姜素。结论高良姜素能显著促进A375-HaCaT共培养模型中A375的细胞增殖及黑素合成,其作用机制可能与高良姜素上调HaCaT细胞中的ET-1和SCF等细胞因子的表达水平有关。
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高良姜素对过氧化氢诱导的A375细胞氧化损伤后Nrf2、γ-GCS基因表达的影响
目的 观察高良姜素对人A375黑素瘤细胞氧化损伤后细胞内Nrf2、γ-GCS基因表达的影响,探讨其抗氧化损伤的保护机制.方法 以 700 μmol/L 过氧化氢(H2O2)作为外源性氧化剂,诱导人 A375 黑素瘤细胞处于氧化应激状态,建立细胞氧化损伤模型.实验分为正常组、模型组、阳性药组和高良姜素低、中、高剂量组,各给药组加入相应药物培养.MTT法检测细胞存活率,ELISA检测胞内活性氧簇(ROS)含量,RT-PCR检测Nrf2、γ-GCS基因表达.结果 与正常组比较,模型组细胞存活率显著下降,ROS含量明显上升,Nrf2与γ-GCS表达量均明显下降(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各药物组细胞存活率升高,ROS含量降低,Nrf2和γ-GCS基因表达量显著升高(P<0.05,P<0.01).结论 高良姜素可能是通过上调细胞Nrf2和γ-GCS的表达,促进Nrf2与抗氧化反应元件及其相关调节酶的结合,从而激活Nrf2信号通路达到对A375细胞氧化损伤的保护作用.
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高良姜中高良姜素的醇提和纯化工艺研究
目的 筛选高良姜素的佳醇提和初步纯化工艺条件.方法 以高良姜素含量为指标,采用高效液相色谱法,通过L9(34)正交试验设计优选醇提工艺条件,确定高良姜的佳醇提工艺;以高良姜素的纯度为指标,采用不同酸碱水溶液对醇提液进行初步纯化.结果 高良姜素的佳醇提工艺条件为乙醇浓度80%,提取次数2次,溶剂倍数8倍,提取时间1.5 h;纯化工艺为3倍量的水溶液,静止24 h.结论 优化的高良姜醇提工艺条件合理可靠,重复性良好;纯化工艺条件操作方便,除杂效果好,为后续纯化实验提供便利.
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南药植物高良姜内生真菌群体多样性及其组织分布
采用组织PCR-末端限制性片段长度多态性分析(T-RFLP)免培养技术,从南药植物高良姜道地产地植株根、根茎、茎、叶4个不同组织总共检测到28个不同的末端限制性片段(T-RFs),说明高良姜内生真菌群体至少组成28个不同的真菌种;不同组织其T-RFLP图谱、T-RFs数目、优势T-RFs组成不同,内生真菌群体Shannon多样性指数和Shannon均匀度指数也随组织而异;采用水蒸气蒸馏法、甲醇抽提-高效液相色谱法测定高良姜主要活性成分挥发油、高良姜素含量,结果显示,该2类活性组分在其根、根茎、茎、叶4个不同组织均有积累,且均以根茎高;相关性分析显示2类所测活性成分与该宿主内生真菌群体Shannon多样性指数及其均匀度呈极显著的负相关,与325 bp对应于拟盘多毛孢菌属Pestalotiopsis的优势T-RFs呈极显著的正相关.
关键词： 高良姜 内生真菌 末端限制性片段长度多态性 高良姜素 挥发油 -
高良姜素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其机制的研究
目的 观察高良姜素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响并探讨其机制.方法 体外培养人骨肉瘤MG-63细胞株,给予不同浓度的高良姜素处理24h,MTT法测定细胞活力,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡,Western blot分析Caspase-3、Cytochrome C及Bcl-2蛋白表达.结果 高良姜素可导致人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡并抑制其增殖,其作用具有浓度依赖性,在80mM为显著；同时可改变细胞周期分布.与对照组相比,80mM高良姜素处理24h后MG-63细胞活力降低、凋亡率增加(P＜0.01 ) G0/G1期百分比增高,S+G2+M期百分比降低(P＜0.01)Caspase-3、CytochromeC表达增加,Bcl-2表达降低(P＜0.01).结论 高良姜素可诱导人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡、抑制其增殖,并改变细胞周期分布,其作用与线粒体途径相关.
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高良姜素下调Bcl-2通过线粒体途径促进人肝癌Hep3B细胞凋亡
目的 研究高良姜素对人肝癌Hep3B细胞凋亡的影响并探讨相关机制. 方法 体外培养人肝癌Hep3B细胞,经高良姜素处理后,RT-PCR和Western blot检测Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法测定细胞生长抑制率,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率,流式细胞仪分析线粒体膜电位,Western blot检测Caspase-3、9及Cytochrome C蛋白的表达水平. 结果 高良姜素使Hep3B细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平明显下降.不同剂量的高良姜素(40、80、120 μmol/L)对细胞生长抑制率分别为6.38％±1.32％,21.58％±1.97％和43.18％±3.89％,明显高于对照组(t低剂量组=13.01,t中剂量组=15.12,t高剂量组=14.79,均P＜0.01);细胞凋亡率分别为21.58％±1.97％,34.18％±3.89％和43.18％±3.89％,明显高于对照组(分别t低剂量组=24.67,t中剂量组=32.35,t高剂量组=25.89,均P ＜0.01);线粒体膜电位绿色荧光蛋白表达百分比分别为18.93％±2.3％,31.11％±2.67％和46.06％±2.95％,明显高于对照组(分别t低剂量组=16.70,t中剂量组=31.38,t高剂量组=48.15,均P ＜0.01);Caspase-3、9和胞质内Cytochrome C表达水平明显高于对照组(Caspase-3:分别t低剂量组 =11.94,t中剂量组=10.18,t高剂删量组=18.82,均P＜0.01;Caspase-9:分别t低剂量组=15.11,t中剂量组=20.41,t高剂量组=21.25,均P＜0.01;Cytochrome C:t低剂量组=15.11,t中剂量组=28.47,t高剂量组=16.01,P＜0.01),而线粒体中Cytochrome C表达水平明显低于对照组(分别t低剂量组=16.70,t中剂量组=12.00,t高剂量组=27.61,均P＜0.01). 结论 高良姜素可下调Bcl-2 mRNA和蛋白表达促进人肝癌Hep3B细胞凋亡,其作用机制可能与线粒体途径相关.
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高良姜素的体内外肿瘤血管生成抑制作用
目的 探讨高良姜素体内、体外对肿瘤血管生成的影响.方法 采用磺酰罗丹明B(SRB)法测定高良姜素对人微血管内皮细胞(EaHy926)增殖的影响;细胞划痕实验检测其对EaHy926迁移能力的影响;观察其对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型体内血管生成的影响.实验分为对照组(高良姜素0 μg)、高良姜素药物组(1、5和10 μg);采用H22细胞株建立裸鼠肝癌种植瘤模型,模型小鼠分成5组,阴性对照组,高良姜素低、中、高剂量组小鼠按照10、20和40 mg/(kg·d)分别灌胃给药,阳性对照组环磷酰胺按20 mg/(kg·d)腹腔注射,连续15 d;免疫组化法分析肿瘤组织中微血管密度(MVD),观察高良姜素裸鼠对肿瘤生长及肿瘤血管形成的影响.结果 不同浓度的高良姜素对EaHy926细胞生长、迁移能力及体外Matrigel小管的形成均有抑制作用,且抑制作用随药物浓度递增而增强;高良姜素5和10 μg组对CAM血管形成均呈现较强的抑制作用(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,高良姜素20和40 mg/(kg·d)剂量组和环磷酰胺组能显著降低肿瘤瘤重(P<0.05),其抑瘤率分别为34.17%,79.73%,55.71%;同时,高良姜素20和40 mg/(kg·d)剂量组能显著降低肿瘤组织中MVD(P<0.05).结论 高良姜素体内体外都具有抑制肿瘤血管生成的作用.
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双姜止痛软胶囊质量标准研究
目的:建立双姜止痛软胶囊的质量标准.方法:采用薄层色谱法鉴别双姜止痛软胶囊中干姜及高良姜;高效液相色谱法对制剂中6-姜酚和高良姜素进行定量分析.结果:6-姜酚平均回收率为99.1%,RSD=1.2%(n=9);高良姜素平均回收率为98.8%,RSD=0.78%(n=9).结论:所建立之方法可靠、准确、专属性强,可有效控制双姜软胶囊的质量.
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高良姜素对人胃癌SGC-7901细胞增殖、周期循环和凋亡的体外影响
目的 探讨高良姜素对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及可能机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞仪、形态学方法和线粒体膜电位分析高良姜素对SGC-7901细胞周期循环和凋亡的影响.结果 在作用浓度为40 ～ 200 μmol·L-1时,高良姜素对SGC-7901细胞有显著的增殖抑制作用,并呈现剂量-效应和时间-效应依赖关系；作用24、48和72 h时,半数抑制浓度(IC50)分别是160、100和70 μmol·L-1;高良姜素作用24 h后,G2/M期细胞比例从4.40％增加到18.31％.高良姜素作用后细胞呈现典型的凋亡形态学特征,线粒体膜电位明显降低,160 μmol·L-1高良姜素作用24、48 h时,凋亡细胞比例从2.6％和4.3％增加至27.4％和65.6％.结论 高良姜素可能通过干扰细胞周期循环和介导线粒体功能障碍,诱导细胞凋亡,从而抑制胃癌SGC-7901细胞的生长.
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良附微乳和良附丸中高良姜素药代动力学比较
目的 建立家兔血浆中高良姜素浓度的HPLC分析方法,并对良附微乳和良附丸中高良姜素药代动力学进行比较.方法 家兔分别灌胃良附微乳和良附丸后用HPLC法测定不同时间血浆样品中高良姜素的浓度,用3P87程序计算主要药代动力学参数.结果良附微乳在家兔体内药动学符合一级单室开放模型,达峰时间(tpeak)为0.75 h,血药峰浓度(Cmax)为38.46 μg/L,药时曲线下面积(AUC)为129.42(μg·h)/L,消除半衰期(t1/2ke)为1.47 h,良附丸中高良姜素的血药浓度未能检测出.结论 HPLC法简单可靠,可用于良附微乳中高良姜素的血药浓度分析和药代动力学研究.微乳可促进高良姜素的吸收,提高其生物利用度.
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高效液相色谱法测定蒙药复方述达格-4有效部位中山奈素和高良姜素的含量
目的：探析蒙药复方述达格-4有效部位高良姜素2与中山奈素应用高效液相色谱法检测的方法。方法应用高效液相反相色谱法，流动相为乙腈（A）-0.5%磷酸水溶液，检测波长286 nm，梯度洗脱（0 min～20 min，34%A→37%A；20 min～60 min，37%A），流速1.0 mL/min，色谱柱为Diamosil C18（4.6 mm×250 mm，5μm），柱温30°C，进样量20μL。结果山柰素的线性范围为0.01656μg～0.1656μg（γ=0.9999），高良姜素线性范围为0.04μg～0.40μg（γ=0.9999）。重复性试验中，山柰素、高良姜素的平均含量分别为0.43%、1.21%；RSD分别为1.43%、0.94%；加样回收率试验评估中，山柰素、高良姜素的回收率平均值分别为98.92%、99.92%，RSD为2.33%、2.09%。结论高效液相色谱检测法的重复性较佳，简便准确，可为蒙药复方述达格-4质量控制提供依据。
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超临界CO2流体萃取技术提取高良姜素的应用进展
目的:高良姜是一种传统中药,其含有的高良姜素是其主要作用组分,本文旨在研究超临界CO2流体萃取技术提取高良姜素的优点以及应用进展.方法:本文首先介绍了高良姜素结构、作用以及一般提取方法,着重讲述了采用超临界CO2流体萃取技术萃取高良姜中的有效成分高良姜素的原理、工艺、意义以及与传统中药提取法相比的优缺点,并分析了当今超临界CO2流体萃取技术提取高良姜素的发展状况.结果:通过比较,可以看出超临界CO2流体萃取技术提取高良姜素具有环保、工艺流程简单、生产效率高等优点.结论:认为采用超临界流体萃取技术提取高良姜素大有可为.
关键词： 超临界CO2流体萃取技术 高良姜素 高良姜 -
甘草地上部分化学成分研究
目的 研究甘草Glycyrrhiza uralensis地上部分的化学成分.方法 通过硅胶、凝胶等柱色谱及高效液相色谱技术进行分离纯化,根据理化性质和核磁数据对化合物进行结构鉴定.结果 从甘草地上部分乙醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为(2S)-3'-(2-hydroxy-3-methylbut-3-enyl)-4',5,7-trihydroxy-dihydroflavanone(1)、乔松素(2)、sigmoidin B(3)、licoflavanone (4)、6-异戊烯基柚皮素(5)、短叶松素(6)、高良姜素(7)、染料木素(8)、红车轴草素(9)、山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷(10)、芦丁(11)、α,α'-dihydro-3,5,3'-trihydroxy-4'-methoxy-5'-isopentenyl-stilbene (12).结论 化合物1为新化合物,命名为羟甘草黄烷酮;化合物3、6、7和9是首次从甘草属植物中分离得到.
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高良姜素抑制乳腺癌转移作用机制研究
目的 探究高良姜素对MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移及侵袭的影响及其作用机制.方法 采用MTT法观察不同浓度高良姜素对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响;划痕愈合实验和Transwell小室迁移实验考察高良姜素对MDA-MB-231水平迁移能力和垂直迁移能力的影响;Transwell小室侵袭实验分析高良姜素对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响;采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法考察高良姜素对MDA-MB-231细胞PI3K、Akt、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响,免疫荧光染色实验验证高良姜素对MDA-MB-231细胞PI3K、Akt、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响;Western blotting法和免疫荧光染色实验考察高良姜素对核转录因子(NF-κB)p65磷酸化表达和入核的影响;制备乳腺癌MDA-MB-231细胞株裸鼠移植瘤模型,高良姜素200 μg/kg ig给药15d,检测肿瘤体积和质量,计算抑瘤率,Western blotting分析肿瘤组织PI3K、AKT、MMP-2、MMP-9表达及NF-κB p65磷酸化表达情况.结果 高良姜素体外浓度为50、100、200μmol/L时可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖;高良姜素能剂量依赖性抑制PI3K、Akt、MMP-2、MMP-9蛋白表达,降低NF-κB p65磷酸化表达和入核;200 μg/kg高良姜素能抑制裸鼠乳腺癌的生长,抑瘤率为43.66％;高良姜素能抑制瘤组织中PI3K、Akt、MMP-2、MMP-9表达以及NF-κB p65磷酸化表达.结论 高良姜素在体内对MDA-MB-231生长有明显的抑制作用,在体外能抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭,抑制相关蛋白PI3K、Akt和MMP-2、MMP-9蛋白表达,抑制转录因子NF-κB磷酸化表达及入核,阻断其激活.
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高良姜素诱导人乳头瘤病毒阳性的宫颈癌细胞凋亡实验研究
目的 研究高良姜素对人乳头瘤病毒(HPV)阳性人宫颈癌细胞的诱导凋亡作用及其机制.方法 选择2株HPV阳性人宫颈癌细胞(SiHa、HeLa)和1株HPV阴性人宫颈癌细胞(C-33-A),用不同浓度的高良姜素(20、40、80 μmol/L)分别处理24、48、72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法测定高良姜素对3株宫颈癌细胞增殖的影响;不同浓度高良姜素处理宫颈癌细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;Western blotting法检测Bcl-2家族蛋白表达情况.结果 高良姜素可以剂量和时间依赖性地降低HPV阳性宫颈癌细胞SiHa和HeLa的活力;而对于HPV阴性的宫颈癌细胞C-33-A活力无明显影响;细胞周期检测显示高良姜素可以使SiHa和HeLa细胞的生长阻滞在G1或G2/M期;流式细胞仪分析发现40μmol/L高良姜素作用于SiHa和HeLa细胞48 h后,细胞出现明显凋亡,而C-33-A细胞仅有少量凋亡;Western blotting检测发现40 μmol/L高良姜素处理后,HPV阳性宫颈癌细胞中促凋亡蛋白Bad、Bid、Bax表达量升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w表达量降低.结论 高良姜素能抑制HPV阳性宫颈癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2、Bcl-w基因的表达及上调Bad、Bid、Bax基因的表达有关.
