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129 线粒体在细胞凋亡中的作用
细胞凋亡是一种由基因控制的细胞自杀性死亡过程.通过对凋亡机制的深入研究,人们发现线粒体在凋亡过程中发挥着重要作用.本文综述了凋亡过程中线粒体的形态及分布变化,凋亡相关因子TR3、Bcl-2蛋白家族、细胞色素C、凋亡诱导因子、神经节苷酯GD3及Ca2+等调节线粒体功能从而产生凋亡效应,同时还探讨了线粒体外膜渗透性增加的两种主要理论.
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补肾健脾中药复方对去势大鼠血清中Bcl-2和Bax水平的影响
目的:探讨补肾健脾中药复方对去势大鼠血清中Bcl-2和Bax水平的影响.方法:48只6月龄的雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组(补肾健脾中药复方)、西药组(雌激素).治疗12周后,收集左侧股骨、血清分别行骨矿含量、骨密度测量和Bcl-2、Bax水平含量的检测.结果:模型组的骨密度值和骨矿含量均低于对照组(P＜0.05)；中药组和西药组的骨密度值高于模型组(P＜0.05).与空白组相比,模型组血清中Bcl-2表达水平下降,Bax表达水平上升(P＜0.05).经过药物干预后,中药组和西药组均能提高血清中Bcl-2表达,降低Bax表达(P＜0.05).结论:补肾健脾中药复方对去势大鼠血清中Bcl-2和Bax水平的影响作用与雌激素一致,有可能在一定程度上抑制细胞的凋亡.
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TNF-α诱导肝细胞凋亡机制的回顾与展望
在多种肝脏疾病中都涉及到TNF-α诱导的肝细胞凋亡.TNF-α在细胞凋亡过程中发挥多种效应,主要由TNF-R1介导.TNF-R1的激活导致了多种凋亡途径的激活,包括促凋亡的Bcl-2家族蛋白、活性氧、c-Jun NH2-末端激酶、组织蛋白酶B、酸性鞘磷脂酶及中性鞘磷脂酶.这些途径密切相关并主要作用于线粒体,线粒体释放致凋亡因子及其他物质,导致细胞凋亡.
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水飞蓟宾对异丙肾上腺素引起的大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制
水飞蓟宾(silibinin)为从菊科植物水飞蓟(Silybum marianum)的种子和果实中提取得到的黄酮类单体成分.本研究观察水飞蓟宾对β-肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素对培养乳鼠心肌细胞损伤的影响,并对其机制进行研究.采用MTT法测定细胞存活率,酶联法测定细胞丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)和细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性,流式细胞仪测定线粒体膜电位(ΔΨ),以及Western blotting检测与线粒体相关蛋白的表达.与模型组相比,水飞蓟宾使细胞受损伤的程度降低,并且增加SOD的活性,抑制了细胞膜电位的降低,并且改善Bcl-2家族蛋白中Bax/Bcl-2的表达比率,上调Bax上游去乙酰化酶SIRT1蛋白的表达.水飞蓟宾通过上调线粒体上游Bax/Bcl-2的表达比率与SIRT1蛋白的表达,改善了线粒体的功能,从而对由异丙肾上腺素引起的培养乳鼠心肌细胞损伤有明显的保护作用.
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维泰醇对小鼠淋巴白血病细胞促进凋亡的作用及其机制
维泰醇(alternol)是利用红豆杉树皮中一种微生物菌诱变株,经过发酵、纯化等工艺分离出的新型单体化合物.本研究探讨维泰醇对小鼠淋巴白血病(L1210细胞)的作用及其机制.采用MTT法检测维泰醇对细胞活力的影响,用形态学方法、 DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡,以Western blotting法检测与凋亡相关蛋白的表达.维泰醇对L1210细胞的增殖有明显抑制作用;处理后的细胞表现出凋亡特有形态学改变,细胞凋亡比率的增加有时间依赖性;维泰醇能降低细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm),增加细胞内活性氧(ROS)的水平,并引起细胞DNA发生片段化,形成典型的梯状条带;维泰醇能下调Bcl-2/Bax表达比率,并且上调caspase-3和caspase-9的表达,但是对caspase-8的表达没有明显的影响.维泰醇可能通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导L1210细胞凋亡.
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蛇床子素诱导HeLa细胞凋亡的作用机制研究
目的 研究蛇床子素对人宫颈癌细胞系HeLa细胞的凋亡机制.方法 HeLa细胞分别用不同浓度的蛇床子素处理.MTT法检测细胞活力;Hoechst 33342染色观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期;Western blot检测Bcl-2、Bax、caspase-3和caspase-9表达情况.结果 蛇床子素浓度为20～120μg/mL可以剂量和时间依赖性降低HeLa细胞的活力.Hoechst 33342染色显示蛇床子素处理后的HeLa细胞膜通透性增高.流式细胞检测结果显示蛇床子素作用HeLa细胞后可以诱导细胞凋亡,20、40、80 μg/mL蛇床子素处理后细胞凋亡率分别为(21.5±3.6)％、(45.8±5.4)％、(63.6±7.1)％,明显高于0 μg/mL蛇床子素处理的(4.5±1.5)％(P＜0.05).HeLa细胞经过不同浓度蛇床子素(20、40、80 μg/mL)处理48 h后,G0/G1期细胞比例增加,同时GJM期与S期细胞比例减少(P＜0.05).Western blot检测结果显示蛇床子素(20、40、80 μg/mL)处理HeLa细胞中Cle-caspase-3、Cle-caspase-9和Bax表达量升高,而Bcl-2表达量降低,且呈剂量依赖性.结论 蛇床子素能抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制与下调Bcl-2基因的表达、上调Bax基因的表达及增加caspase活性有关.
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以Bcl-2为靶点的小分子抑制剂研究进展
Bcl-2蛋白家族作为抗肿瘤药物的作用靶点受到广泛关注，在研究其蛋白家族成员结构和功能的基础上，靶向Bcl-2小分子抑制剂不断被发现，本文介绍了细胞凋亡与Bcl-2蛋白家族间相互作用机制，并对Bcl-2小分子抑制剂的研究进展进行综述，以期为抗肿瘤药物的研发提供思路。
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高良姜素诱导人乳头瘤病毒阳性的宫颈癌细胞凋亡实验研究
目的 研究高良姜素对人乳头瘤病毒(HPV)阳性人宫颈癌细胞的诱导凋亡作用及其机制.方法 选择2株HPV阳性人宫颈癌细胞(SiHa、HeLa)和1株HPV阴性人宫颈癌细胞(C-33-A),用不同浓度的高良姜素(20、40、80 μmol/L)分别处理24、48、72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法测定高良姜素对3株宫颈癌细胞增殖的影响;不同浓度高良姜素处理宫颈癌细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;Western blotting法检测Bcl-2家族蛋白表达情况.结果 高良姜素可以剂量和时间依赖性地降低HPV阳性宫颈癌细胞SiHa和HeLa的活力;而对于HPV阴性的宫颈癌细胞C-33-A活力无明显影响;细胞周期检测显示高良姜素可以使SiHa和HeLa细胞的生长阻滞在G1或G2/M期;流式细胞仪分析发现40μmol/L高良姜素作用于SiHa和HeLa细胞48 h后,细胞出现明显凋亡,而C-33-A细胞仅有少量凋亡;Western blotting检测发现40 μmol/L高良姜素处理后,HPV阳性宫颈癌细胞中促凋亡蛋白Bad、Bid、Bax表达量升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w表达量降低.结论 高良姜素能抑制HPV阳性宫颈癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2、Bcl-w基因的表达及上调Bad、Bid、Bax基因的表达有关.
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猪苓酮A通过调节Bcl-2/Bax信号通路诱导雌激素受体阴性的乳腺癌细胞凋亡研究
目的 研究猪苓酮A对雌激素受体(ER)阳性或阴性人乳腺癌细胞的凋亡作用及其可能的作用机制.方法 选择2株ER阳性人乳腺癌细胞(MCF-7细胞、BT474细胞)和1株ER阴性人乳腺癌细胞(MDA-MB-453细胞),用不同浓度的猪苓酮A分别处理24 h,或以50 μmol/L的猪苓酮A分别处理6、12、24、48 h后,分别采用噻唑蓝(MTT)法测定3株乳腺癌细胞的增殖情况;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;采用Western blottig法检测与细胞凋亡密切相关的Bcl-2家族蛋白表达情况.结果 猪苓酮A可以时间和剂量依赖性地抑制ER阴性MDA-MB-453细胞的增殖;而对于ER阳性MCF-7、BT474细胞增殖均无明显影响;细胞周期检测显示猪苓酮A可以使MDA-MB-453细胞的生长阻滞在G1或G2/M期;50 μmol/L猪苓酮A作用于MDA-MB-453细胞24h后,细胞出现明显凋亡,而MCF-7、BT474细胞则没有出现明显凋亡;Western blotting检测发现50 μmol/L猪苓酮A处理组ER阴性MDA-MB-453细胞中促凋亡蛋白Bax、Bad表达量升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w表达量降低.结论 猪苓酮A能抑制ER阴性乳腺癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制与调控Bcl-2家族蛋白的表达量有关.
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芦竹素对人前列腺癌细胞系细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响
目的：研究芦竹素对人前列腺癌细胞系LNCap细胞凋亡的影响及其作用机理。方法：取对数生长期的LNCap细胞，分别用不同浓度的芦竹素处理48 h后，用MTT细胞增殖法检测细胞活力，Hoechst 染色观察细胞形态学变化，流式细胞仪检测细胞凋亡和周期，并用Western blot检测LNCap细胞中Bcl-2和casepase家族蛋白表达情况。结果：芦竹素能以剂量依赖性方式降低LNCap细胞的活力，浓度为20、40、80μg/mL 的芦竹素作用LNCap细胞48 h后，细胞凋亡率分别增加至11.3%、25.2%、57.1%，明显高于对照组（0.5%）；不同浓度的芦竹素处理LNCaP细胞48 h后，G0/G1期细胞的比例增加，而G2/M期和S期的比例减少；芦竹素处理组 LNCap 细胞Cleaved-caspase 3及Cleaved-caspase 9表达量增加，同时促凋亡蛋白Bax表达量增加，而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低，且呈剂量依赖性。结论：芦竹素能抑制LNCap细胞增殖并诱导其凋亡，其作用机制与上调Cleaved-Csepase 3，Cleaved-Casepase 9和Bax表达、下调Bcl-2的表达有关。
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Multidomain蛋白对线粒体膜通透性的调控
Bcl-2超家族成员分子由多种同源结构域(BH)组成,主要为BH1、BH2、BH3和BH4,它们是Bcl-2超家族蛋白调控细胞生死存亡的重要功能区[1].
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氟对人成骨样细胞株凋亡的影响
目的研究氟化钠(NaF)对人成骨样细胞株凋亡的影响及其机制.方法四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖能力, 萤光染剂(Hoechst 33342)染色,DNA梯形(DNA Ladder)琼脂糖电泳,流式细胞仪分析检测细胞凋亡,RT-PCR半定量分析抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax mRNA表达,显色法检测凋亡相关激酶半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性. 结果 NaF(4,6,8×10-3mol/L)可以剂量依赖性地抑制细胞增殖(P<0.01),Hoechst 33342染色、琼脂糖电泳和流式细胞仪均可检测到氟对成骨细胞凋亡的诱导作用.RT-PCR结果显示:NaF可以剂量依赖性地抑制Bcl-2 mRNA表达(P<0.01),提高Bax mRNA表达(P<0.01),并显著增强Caspase-3的活性(P<0.01).结论 NaF可以显著的抑制人成骨样细胞株增殖和诱导其凋亡,并可能是通过抑制Bcl-2表达,促进Bax表达和提高Caspase-3活性来诱导人成骨样细胞株凋亡.
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基于细胞凋亡机制的抗肿瘤药物研究进展
基于细胞凋亡机制的抗肿瘤药物的研究是发现新型抗肿瘤药物的重要策略.该机制中与肿瘤发生和发展相关的有死亡受体、Bcl-2家族、IAP家族、MDM2蛋白等,该文对近年来以这些蛋白和受体为靶标的抗肿瘤药物研究进展进行综述.
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急性肝功能衰竭大鼠中凋亡相关蛋白的表达
细胞凋亡为急、慢性肝病的主要特征之一.近来研究表明,Bcl-2家族蛋白在细胞凋亡的胞内信号转导途径中发挥重要作用[1-3].目前发现,Bcl-2家族蛋白有20余种,其中Bcl-2、Bcl-xL蛋白具有抗凋亡作用,而Bad、Bax和Bid等具有促凋亡作用[2-4].
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Bcl-2蛋白家族及其诱导的神经元凋亡
癫癎发作可启动神经元凋亡通路,线粒体位于凋亡通路的核心位置.Bcl-2家族蛋白是其上游重要的调控因子,它们通过转录水平、磷酸化-去磷酸化修饰、二聚体形成或水解剪切等机制精确调控内、外源性凋亡途径,终决定神经元的存亡.对Bcl-2家族蛋白成员以及调控机制的研究有助于寻找新的干预手段,减少癫癎所致的神经元损伤.
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p53和Bcl-2家族蛋白在胰腺癌中的表达与细胞凋亡的关系
目的 探讨胰腺癌组织(pancreatic carcinoma,PC)中p53和Bcl-2家族(Bcl-2,Bax,Bcl-xL,Bcl-xS)蛋白表达及与细胞凋亡的关系.方法 免疫组化法检测35例PC中p53的蛋白表达,将PC分为p53阴性表达组(第1组,n=18)和p53阳性表达组(第2组,n=17);Western blot检测两组PC中p53、Bcl-2,Bax,Bcl-xL和Bcl-xS蛋白表达,TUNEL法检测第1组中凋亡指数(AI).结果 Bcl-2蛋白在p53阳性PC表达上调,而在p53阴性PC表达下调(P=0.047);Bax和Bcl-xL蛋白在两组PC中表达都明显上调(P=0.274,0.334);Bcl-xS在p53阳性表达PC明显下调,在p53阴性表达组明显上调(P=0.01);在p53阴性和阳性表达PC,AI分别为12.1±2.47和9.1±1.48(P=0.023);Bcl-2家族各成员表达与AI无相关性,而Bcl-2/Bax比率与AI有明显的相关性(P<0.01).结论 Bcl-2是依赖p53调节的抗凋亡蛋白,Bcl-xS是依赖p53调节的促凋亡蛋白,而p53主要通过调节Bcl-2/Bax比率发挥凋亡调节作用.
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Bcl-2家族蛋白对心肌细胞凋亡作用的研究进展
近年来,越来越多研究表明在许多心血管疾病中,心肌的损伤是通过心肌细胞的凋亡产生的.而在介导心肌细胞凋亡的过程中,线粒体发挥了重要作用,其中位于线粒体内的凋亡相关分子的释放是该过程中关键分子事件.Bel-2家族蛋白则是细胞凋亡的关键调节分子,其中Bel-2/Bax在心肌细胞凋亡的防治中可产生积极调控作用,因此彻底的了解心肌细胞凋亡过程将有助于我们在合适的时机进行干预,缓解心力衰竭的发展及其功能障碍,这将为我们提供新的治疗策略.本文旨在对近年来关于Bel-2家族蛋白以及与心肌细胞凋亡的关系相关研究进展做一综述.
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桔梗皂甙D对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用和机制研究
[目的]探讨桔梗皂甙D(platycodin D,PD)对人胃癌细胞株SGC7901增殖的抑制作用及作用机制.[方法]体外培养人胃癌细胞株SGC7901,加入终浓度分别为5～20μm·L-1的PD.采用MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡率,JC-1检测线粒体膜电位的变化,Western blot检测PD对凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、cleaved PARP、bcl-2、bax和对MAPK信号通路蛋白ERK、JNK、p38及其磷酸化蛋白p-ERK、p-JNK、p-p38表达的影响.[结果]MTT结果显示,PD作用24h和48h后,PD对SGC7901细胞增殖的抑制随浓度的增加而增强;PD作用SGC7901后,细胞凋亡率明显增加,线粒体膜电位降低.Western blot检测结果显示cleaved PARP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、bax蛋白表达量随着药物浓度的增加而升高,bcl-2蛋白表达下降,同时p-JNK、p-p38水平明显升高,p-ERK蛋白水平下降,ERK、JNK、p38蛋白的表达无明显变化.[结论]PD对胃癌细胞SGC7901有抑制增殖和诱导凋亡的作用.PD通过抑制ERK信号通路从而抑制细胞增殖,通过激活JNK和p38信号途径调控bax和bcl-2表达,导致线粒体膜电位下降,进而激活caspase,诱导癌细胞凋亡的发生.
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海芋石油醚部位对肝癌H22荷瘤小鼠的抑制及诱导凋亡作用研究
[目的]探讨海芋石油醚部位对肝癌H22荷瘤小鼠的抑制及诱导凋亡作用.[方法]建立小鼠肝癌H22移植瘤模型,随机分为模型组,顺铂组和海芋石油醚部位0.8 g·kg-1、0.4 g·kg-1、0.2 g·kg-1剂量组.观察小鼠肿瘤生长情况,测定抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数,H&E染色法观察肿瘤病理形态,流式细胞术检测H22肿瘤细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡蛋白pro-caspase-8、pro-caspase-3、Bcl-2和Bax表达情况.[结果]海芋石油醚部位0.8 g·kg-1剂量组抑瘤率达31.41%;H&E染色法结果表明,海芋石油醚部位能使H22肿瘤细胞出现明显的凋亡形态改变;流式细胞术实验结果表明,随海芋石油醚部位给药剂量的增加,H22肿瘤细胞凋亡率也增加;Western blot结果显示,海芋石油醚部位能下调pro-caspase-8和pro-caspase-3,增加Bax/Bcl-2的比例.[结论]海芋石油醚部位能抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关.
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雷酚萜甲醚抑制人胃癌细胞AGS增殖及诱导凋亡作用研究
目的：研究雷酚萜甲醚( TME )在体外对人胃癌AGS细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用 MTT法观察TME对人胃癌AGS细胞、正常人胃黏膜上皮细胞GES-1的增殖抑制作用；克隆形成实验观察细胞克隆的形成；光镜下及AO / EB染色观察细胞形态；流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期；JC-1染色和DCFH-DA荧光探针分别检测TME对AGS细胞线粒体膜电位的改变和活性氧产生的影响；West-ern blot检测凋亡蛋白caspase-3、caspase-8和Bcl-2、Bax表达情况,以及 caspase 广谱抑制剂 z-VAD-fmk 对 caspase-3、caspase-8蛋白表达的影响。结果 TME可明显抑制人胃癌AGS细胞的增殖,并诱导其凋亡,作用48 h时IC50为23.85μmol·L-1,而对正常人胃黏膜上皮细胞GES-1的抑制作用明显低于AGS。 TME能够抑制AGS细胞克隆形成,并使细胞出现明显的凋亡形态改变。 Annexin V-FITC / PI双染实验表明,随TME剂量的增加,细胞凋亡百分数也增加。 JC-1和DCFH-DA结果显示, TME使细胞内线粒体膜电位降低、细胞内活性氧水平增加。 Western blot结果显示, TME增加了Bax / Bcl-2的比例,激活caspase-8和caspase-3,并且加入z-VAD-fmk后, caspase-3、caspase-8蛋白的表达降低。 TME可使AGS细胞周期阻滞于G0/G1期。结论 TME能抑制人胃癌AGS细胞增殖和诱导凋亡,抗肿瘤作用机制与激活凋亡通路、影响细胞周期及Bcl-2蛋白家族相关。
