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As2O3对SGC7901和K562细胞的COX-2及基质金属蛋白酶表达的影响
本研究探讨As2O3对肿瘤细胞中COX-2、MMP-2和MMP-9表达的影响.以体外培养SGC7901和K562细胞为对象,加不同浓度As2O3干预40和72小时.采用Western blot法和荧光定量RT-PCR法分别测定COX-2、MMP-2和MMP-9的表达和SGC7901细胞内的COX-2和MMP-2 mRNA的水平.结果显示:As2O3干预后SGC7901和K562细胞内的COX-2、MMP-2和MMP-9的表达水平呈时间和荆量依赖性减低;MMP-2 mRNA和COX-2 mRNA减低.结论:三氧化二砷可抑制肿瘤细胞COX-2、MMP-2和MMP-9表达,这一机制可能参与砷剂抑制肿瘤血管生成的过程.
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ER-α36对胃癌SGC7901细胞在裸鼠体内生长的影响
目的:观察ER-α36分子对人胃癌细胞SGC7901在裸鼠体内生长的影响.方法:利用慢病毒转染技术构建稳定高表达和低表达ERα-36分子的重组人胃癌SGC7901细胞株.实验分为空白对照组(SGC7901-Control)、ER-α36低表达组(SGC7901-Low36)和ER-α36高表达组(SGC7901-High36),每组各3只雄性裸鼠.将上述细胞(5×106个/mL)接种裸鼠皮下,建立裸鼠荷瘤模型,连续观测30 d.采用瘤结节体积测量和称质量、瘤组织HE染色及免疫组织化学法检测Ki67指数和E-cadherin蛋白表达等方法,鉴定各组细胞生长的情况.结果:全组实验动物均出现移植瘤.第16天开始,SGC7901-High36组裸鼠肿瘤的体积＞SGC7901-Control组裸鼠肿瘤的体积＞SGC7901-Low36组裸鼠肿瘤的体积,两两之间有显著性差异(P＜0.05).第30天,SGC7901-High36组肿瘤的质量(2.58 g±0.014 g),明显大于SGC7901-Control组(1.32 g±0.0245g)和SGC7901-Low36组(0.471 g±0.021 g),两两之间有显著性差异(P＜0.05).SGC7901-High36组肿瘤细胞的核分裂数(42.33±6.33),明显高于SGC7901-Control组(28.5±0.35)和SGC7901-Low36组(12.5±2.5),两两之间有显著性差异(P＜0.05).ki67阳性细胞计数,SGC7901-High36组(86.35±5.23),明显高于SGC7901-Control组(65.44±4.56)和SGC7901-Low36组(18.25±2.56),两两之间有显著性差异(P＜0.05).SGC7901-High36组肿瘤细胞几乎不表达E-cadherin蛋白,明显低于SGC7901-Control组和SGC7901-Low36组.结论:ER-α36分子在胃癌细胞的生长与增殖中具有重要作用,并可能通过靶向肿瘤细胞的粘附分子而促进肿瘤的侵袭与转移.
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氧化苦参碱通过ERK途径影响SGC7901胃癌细胞增殖的作用机制
目的 探讨氧化苦参碱(OXY)对人胃癌细胞株SGC7901增殖及调控PCNA的作用机制.方法 以SGC7901为研究对象,用SRB法测定OXY的增殖抑制率;FCM测定细胞周期;QPCR检测PCNA mRNA的表达;Western blot方法检测OXY作用SGC7901后p38MAPK、p-p38MAPK、JNK、p-JNK、ERK、p-ERK信号通路蛋白的表达变化.结果 OXY对SGC7901细胞增殖具有明显的抑制作用,FCM结果显示OXY组G1期的细胞均显著增加,S期细胞明显减少;与对照组比较,OXY组PCNA mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05或<0.01);与对照组比较,OXY组p-ERK表达水平降低(P<0.05),预防给予ERK抑制剂PD98059能进一步降低p-ERK表达(P<0.01),其他蛋白表达均无明显变化.结论 OXY通过抑制ERK磷酸化抑制胃癌SGC7901细胞PCNA表达,抑制细胞增殖.
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姜黄素对SGC7901和HepG2两种细胞株生长和凋亡的影响
目的:探讨姜黄素抑制人胃癌SGC7901细胞和人肝癌HepG2细胞生长及促进两种癌细胞发生凋亡的效应.方法:将被研究细胞分为空白对照组、姜黄素组、As2O3组、姜黄素+As2O3组,用MTT法检测不同浓度姜黄素溶液作用后SGC7901、HepG2细胞的生长抑制率,观察细胞的形态改变.结果:各浓度姜黄素组、As2O3组、姜黄素+As2O3组部分细胞形态呈现凋亡表现;40μg/L姜黄素组对两种细胞的生长抑制率大;As2O3组、姜黄素+As2O3合用组对细胞的生长抑制率随浓度增加而增大.结论:姜黄素及As2O3均可显著抑制细胞增殖;二者合用可加强各自作用.
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Adv-shRNA抑制NRP2表达对胃癌SGC7901细胞增殖的影响
目的 通过特异性抑制胃癌细胞株SGC7901中神经纤毛蛋白2(NRP2)基因的表达,检测RNA干扰片段对SGC7901细胞增殖能力的影响.方法 将NRP2的特异性RNA干扰腺病毒载体转染至胃癌细胞SCG7901 72 h后荧光显微镜观察转染情况；采用RT-PCR法检测转染后NRP2基因mRNA表达情况；MTT法检测胃癌细胞增殖情况；Westerm印迹检测转染后NRP2蛋白表达情况.结果 成功将NRp2-shRNA重组腺病毒载体转染至胃癌细胞SGC7901.各重组腺病毒转染组NRP2 mRNA水平均低于阴性对照组和空白组,其中以NRP2-shRNA-3抑制效应强.阴性对照组与空白组细胞增殖迅速,两组间无显著差异(P＞0.05),实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少,与前两组相比有显著差异(P＜0.05).阴性对照组与空白组NRP2蛋白表达量明显高于实验组(P＜0.01),而阴性对照组与空白组之间无显著差异(P＞0.05).结论 重组腺病毒载体NRP2-shRNA可有效抑制胃癌细胞SCG7901中NRP2基因的mRNA和蛋白的表达,并在一定程度上抑制癌细胞增殖,可作为动物实验的理论基础和前期条件.
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海洋微生物次级代谢产物1403-B的抗胃癌活性
目的 筛选能被海洋微生物次级代谢产物1403-B显著抑制的肿瘤细胞,初步探讨其机制,为临床抗肿瘤提供候选药物.方法 用2.5、5.0、10、20、40 μmol/L 1403-B分别处理鼻咽癌细胞株(3种:HONE-1、CNE-2、5-8F),肝癌细胞株(2种:HepG2、Be17402),胃癌细胞株(SGC7901)48 h后,MTT法检测细胞增殖的情况；荧光显微镜观察细胞形态学变化；用Annexin V/PI双染法分析其凋亡情况,Western印迹法检测caspase-3的切割.结果 MTT实验显示,1403-B呈浓度依赖性抑制多种肿瘤细胞的增殖(P＜0.05),其中对胃癌细胞SGC7901的IC5o低,为(4.12±o.57) μmol/L.1403-B作用SGC7901细胞24h后,出现细胞膜、细胞核皱缩,染色质浓集和形成包裹细胞核片段的凋亡小体等凋亡现象,且呈剂量依赖性增加.Annexin V/PI双染法显示,随着1403-B浓度增加,SGC7901凋亡率升高.1403-B促进SGC7901细胞caspase-3切割.结论 海洋药物1403-B能够通讨诱导SGC7901凋亡而显著抑制其增殖,有望成为一种抗胃癌的新药物.
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反义Survivin核酸对荷瘤裸鼠放疗敏感性影响的初步研究
目的 探讨反义Survivin核酸(anti-pcDNA3-svv)对荷瘤裸鼠放疗敏感性的影响.方法 采用电转染法转染胃癌细胞系SGC7901,观察转染组(SGC7901-SVVanti)和未转染组(SGC7901)在体内(裸鼠)和体外(细胞水平)对放射线敏感性的不同;采用免疫组化SP法对比转染组和未转染组裸鼠肿瘤中Survivin蛋白表达的不同.结果 SGC7901-SVVanti组细胞随着照射剂量的升高,细胞存活率明显低于SGC7901组,其IC50分别为(718.7±1.6)cGY和(1654.1 ±1.2)cGY,差异具有统计学意义(P＜0.05);相同剂量的X线照射裸鼠后,SGC7901-SVVanti组裸鼠的肿瘤缩减率明显高于SGC7901组裸鼠,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 Survivin反义核酸可以在体内、外水平增加荷胃癌细胞裸鼠对放射线的敏感性;抑制Survivin蛋白在裸鼠肿瘤中的表达.
关键词： 反义Survivin核酸 SGC7901 裸鼠 放疗 免疫组化 -
蜂斗菜素对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制和诱导凋亡作用
目的 观察蜂斗菜素对人胃癌细胞SGC7901增殖及凋亡影响,并探讨其作用机制.方法 磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B,SRB)法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡及周期阻滞,免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤抑制基因p53蛋白的表达及细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)磷酸化水平.结果 蜂斗菜素作用24、48、72 h后对人胃癌SGC7901细胞均有显著的增殖抑制作用,并具有剂量和时间依赖性;与对照组相比,蜂斗菜素作用48 h后G1/G0期细胞比率增加,S期及G2/M期细胞比率下降,细胞凋亡率升高;和对照组相比,蜂斗菜素作用48 h后,细胞中p53蛋白表达显著增加增加,ERK1/2磷酸化水平则显著降低.结论 蜂斗菜素对人胃癌SGC7901细胞具有增殖抑制、细胞周期阻滞及诱导凋亡作用,其机制可能与增加p53蛋白表达和降低ERK1/2磷酸化水平有关.
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藏药绿萝花体外抑制肿瘤细胞生长的实验研究
目的 探讨藏药绿萝花的体外抗肿瘤细胞作用,为其临床合理用药和进一步开发利用提供科学依据.方法 以k(34)正交设计试验所获得的绿萝花水萃取干膏制剂为研究材料,以来源于不同组织器官的人肺腺癌细胞株A549、肝癌细胞株HepG2、胃癌细胞株SGC7901、恶性黑色素瘤细胞株MM-A375、神经母细胞瘤细胞株SHEP1为研究对象,采用瘤细胞生长曲线、细胞形态、软琼脂克隆实验及细胞凋亡检测方法,研究绿萝花体外抗肿瘤细胞生长的作用.结果 绿萝花对5种肿瘤细胞生长均有抑制作用,其IC50分别为1 708.58、550.04、467.39、1 084.25、1 805.42μg/mL,其中对肝癌细胞株HepG2、胃癌细胞株SGC7901抑制效果好,且500 μg/mL绿萝花干膏制剂能引起SGC7901瘤细胞皱缩、细胞形态变圆、细胞周围变亮、细胞克隆数量减少和克隆体积变小,并能引起38.41％的SGC7901瘤细胞凋亡.结论 绿萝花干膏制剂在体外通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而产生抗肿瘤作用,并具有剂量、时间依赖性.
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黄药子体外抗胃癌活性成分的筛选及分析
目的 通过MTT体外实验观察黄药子4种不同提取物及从石油醚提取物中分离得到的黄独乙素和β-扶桑甾醇作用于MGC803、BGC823和SGC7901 3种人胃癌细胞株,探讨黄药子不同提取物及两个单体对3种胃癌细胞株的增殖情况的影响,从而筛选出黄药子有效抗胃癌活性成分.方法 采用MTT法检测0.5、1、2、4、6、8、10、12 mg/mL的不同质量浓度的黄药子石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、水层萃取物、醇提物和终质量浓度为1×10-4、5×10-4、1×10-3、5×10-3、1×10-2、5×10-2、1 ×10-1、5×10-1 mg/mL的黄独乙素和β-扶桑甾醇分别作用于MGC803、BGC823和SGC 7901细胞株24 h后对细胞增殖的影响.结果 石油醚萃取物、醇提物、黄独乙素和β-扶桑甾醇均有不同程度的抑制肿瘤细胞生长的作用,而乙酸乙酯萃取物和水萃取物低剂量有不同程度的促进肿瘤细胞生长的作用;大剂量表现为抑制肿瘤细胞生长的作用.结论 从石油醚提取物中分离得到的黄独乙素和β-扶桑甾醇对胃癌细胞均有抑制作用.
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胃腺癌细胞中血管活性肠肽自分泌调节作用及其机制
目的研究胃腺癌细胞株SGC7901细胞中是否存在血管活性肠肽(VIP)的自分泌调节作用及其机制.方法用RT-PCR检测SGC7901细胞中VIP及其受体(VIPR1、VIPR2)mRNA的表达,用免疫组化观察SGC7901细胞蛋白的表达,用放射免疫法测定细胞上清液中VIP含量,用MTT及细胞计数法观察外源VIP和VIP受体拮抗剂[D-p-Cl-Phe6,Leu17]-VIP对SGC7901细胞增殖的影响.同时用RT-PCR检测外源VIP及其受体拮抗剂孵育前后细胞c-myc、鸟氨酸脱羧酶(ODC)mRNA的表达量变化.结果SGC7901细胞不仅表达VIP mRNA,而且是VIP免疫反应阳性细胞,VIP免疫反应阳性颗粒主要分布在细胞质,少数在细胞核.细胞培养上清液中可检测到VIP蛋白,平均每106个细胞可分泌(13.15±8.54)pg的VIP.SGC7901细胞也能表达VIPR1和VIPR2 mRNA.10-5～10-12mol/L外源性VIP孵育24 h后,细胞增殖无显著影响(P＞0.05),而10-5～10-8mol/L拮抗剂显著促进SGC7901细胞增殖(P＜0.05).10-6mol/L外源性VIP孵育24 h后,SGC7901细胞c-myc及ODC mRNA的表达量显著下降(RM/β:0.816±0.049比0.901±0.054,P＜0.01;R O/β:0.737±0.060比0.830±0.051,P＜0.01);而10-6mol/L[D-p-Cl-Phe6,Leu17]-VIP使细胞c-myc及ODC mRNA的表达量显著升高(R M/β:0.950±0.045比0.901±0.054,P＜0.05;Ro/β:0.911±0.062比0.830±0.051,P＜0.01).结论SGC7901细胞具有VIP的自分泌调节作用,且表现为对细胞增殖的抑制作用.此作用与抑制细胞c-myc及ODCmRNA的表达有关.
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miRNA-200c通过抑制Akt通路提高胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性
目的:研究miRNA-200c对人胃癌耐药SGC7901/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制.方法:Western blotting检测SGC7901/DDP及其亲代SGC7901细胞E-cadherin、PTEN、p-Akt及总Akt蛋白的表达；瞬时转染miRNA-200c前体(miRNA-200c precursor,Pre-200c)提高SGC7901/DDP细胞miRNA-200c的表达,MTT法检测转染后SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性,并分析p-Akt表达的改变；应用Akt通路抑制剂LY94002处理SGC7901/DDP细胞抑制Akt磷酸化,检测处理后细胞对顺铂的敏感性.结果:与SGC7901细胞相比,SGC7901/DDP细胞中p-Akt蛋白的表达量显著增高(1.02±0.09 vs 0.17±0.02,P＜0.05),E-cadherin、PTEN蛋白的表达量显著降低(0.10±0.03vs 0.47 ±0.06,0.18±0.06 vs 0.87±0.06；均P＜0.05).转染Pre-200c后,顺铂对SGC7901/DDP细胞的IC50显著低于对照组[(7.52 ±0.19)vs(12.18 ±0.29) mg/L,P＜0.05],细胞中p-Akt蛋白的表达量也显著低于对照组(0.22 ±0.04vs0.69±0.09,P＜0.05)；LY94002处理后,SGC7901/DDP细胞p-Akt蛋白的表达显著抑制(0.18 ±0.06 vs 0.66±0.10,P＜0.05),顺铂对细胞的IC50显著低于对照组[(6.80±0.28)vs(11.94±1.73) mg/L,P＜0.05].结论:SGC7901/DDP细胞的耐药可能与E-cadherin和PTEN蛋白的表达缺失及Akt通路的异常激活有关,而miRNA-200c提高该细胞对顺铂的敏感性可能是通过抑制Akt通路而发挥作用.
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人类β1,3半乳糖基转移酶7对人4IgB7-H3的修饰作用初探
目的:探讨人4IgB7-H3基因转染人胃癌细胞株SGC7901后人类β1,3半乳糖基转移酶7(β1,3-galactosyltransferase 7,β3GalT7)的表达变化,以期发现41gB7-143与β3GalT7的相互关系.方法:脂质体介导重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/41gB7-H3转染SGC7901细胞,筛选获得稳定表达41gB7-H3的亚克隆细胞株,通过RT-PCR和蛋白质印迹方法检测β3GalT7的表达.结果:成功获得稳定表达41gB7-H3的亚克隆细胞株SGC7901/4IgB7-H3;B3GAIT7随4IGB7-H3的表达上调而上调.结论:4IgB7-H3蛋白的修饰成熟可能需要83GAIT7的作用.
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基于miRNAs的知母水提物体外抑制胃癌细胞SGC7901增殖作用机制
目的 从微小核苷酸(miRNAs)的角度研究知母水提物(aqueous extract from Anemarrhenae Rhizoma,ARAE)体外抑制SGC7901细胞增殖的作用机制.方法 采用MTT法检测ARAE对SGC7901细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测ARAE对SGC7901细胞凋亡的影响;采用高通量测序法检测细胞中miRNAs的表达丰度差异;采用miranda、mirbase和targetscan 3个数据库信息比对,预测差异miRNAs的靶基因,并通过KEGG分析靶基因的相关功能;采用实时荧光定量PCR法验证主要靶基因的表达变化.结果 ARAE能明显抑制SGC7901细胞的增殖并诱导其凋亡,调节细胞miR-16-5p、miR-20a-5p、miR-26b-5p和miR-15b-5p的表达水平;并提示这些miRNAs所调控的靶基因主要富集于PI3K-Akt、JAK-STAT和MAPK等信号通路.结论 ARAE可能通过调节SGC7901细胞内miRNAs的表达从而抑制SGC7901细胞增殖,并诱导其凋亡.
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桔梗皂甙D对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用和机制研究
[目的]探讨桔梗皂甙D(platycodin D,PD)对人胃癌细胞株SGC7901增殖的抑制作用及作用机制.[方法]体外培养人胃癌细胞株SGC7901,加入终浓度分别为5～20μm·L-1的PD.采用MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡率,JC-1检测线粒体膜电位的变化,Western blot检测PD对凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、cleaved PARP、bcl-2、bax和对MAPK信号通路蛋白ERK、JNK、p38及其磷酸化蛋白p-ERK、p-JNK、p-p38表达的影响.[结果]MTT结果显示,PD作用24h和48h后,PD对SGC7901细胞增殖的抑制随浓度的增加而增强;PD作用SGC7901后,细胞凋亡率明显增加,线粒体膜电位降低.Western blot检测结果显示cleaved PARP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、bax蛋白表达量随着药物浓度的增加而升高,bcl-2蛋白表达下降,同时p-JNK、p-p38水平明显升高,p-ERK蛋白水平下降,ERK、JNK、p38蛋白的表达无明显变化.[结论]PD对胃癌细胞SGC7901有抑制增殖和诱导凋亡的作用.PD通过抑制ERK信号通路从而抑制细胞增殖,通过激活JNK和p38信号途径调控bax和bcl-2表达,导致线粒体膜电位下降,进而激活caspase,诱导癌细胞凋亡的发生.
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皖南尖吻蝮蛇蛇毒中抗肿瘤活性蛋白分离纯化及其活体外性研究
目的:分离纯化皖南尖吻蝮蛇蛇毒(wan-nan Agkistrodon acutus venom)中抗肿瘤活性蛋白并研究其活性.方法:利用DEAE-sepharose Fast Flow和SP-sepharose Fast now阴阳离子交换层析以及Sephadex G-75凝胶过滤层析等分离方法从皖南尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化得一种抗肿瘤活性蛋白,用CCK-8法检测该蛋白对体外培养的白血病K562细胞、结肠癌细胞(SW480)、胃癌细胞(SGC7901)、肝癌细胞(HeptG2)的增殖抑制作用.结果:分离纯化得一相对分子质量约23700的抗肿瘤活性组分(ATF1-c),CCK-8检测对体外培养的K562、SW480、SGC7901、HeptG2细胞的增殖抑制作用,呈剂量-时间依赖关系.结论:ATF1-c对体外培养的人癌细胞有明显的抑制和杀伤作用.
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Lipofectamine2000介导重组siRNA质粒载体转染SGC7901的条件优化
目的 寻求Lipofectamine 2000介导外源基因体外转染胃癌细胞SCG7901的佳条件,建立有效的转染体系.方法 以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,统计分析在不同质粒与脂质体的用量比、培养基选择、转染作用时间等条件下脂质体介导外源基因导人胃癌细胞的效率.结果 用24孔板培养细胞时,在细胞融合度约90％,质粒用量为0.6μg,脂质体用量1.2μl (两者质量/体积比为1∶2),转染作用时间为8h时,转染效率为465％％,细胞存活率约78％.结论 按以上转染体系,可获得较为满意的结果.
关键词： Lipofectamine 2000 siRNA 转染 SGC7901 -
rAd-p53联合顺铂对胃癌细胞生长及 KAI1／CD82蛋白表达的影响
目的：观察rAd-p53、顺铂（ DDP）单独及联合作用于人胃癌SGC7901细胞后，对肿瘤细胞增殖凋亡情况、KAI1／CD82蛋白表达情况的影响。方法 rAd-p53、DDP单独及联合作用于胃癌SGC7901细胞株24、48、72 h后，CCK-8法测定SGC7901细胞体外增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，免疫组化法检测KAI1／CD82蛋白表达情况。结果rAd-p53、DDP单独及联合作用于SGC7901细胞后，细胞增殖被抑制，并呈剂量和时间依赖性，且两药联合组细胞增殖抑制率明显高于单用组，与阴性对照组相比差异均有统计学意义（ P＜0．05）；rAd-p53、DDP单独及两药联合作用SGC7901细胞48h后，细胞凋亡率为36．94％±0．78％、28．79％±2．37％，69．26％±0．63％；rAd-p53、DDP单独及两药联合均可上调KAI1／CD82蛋白表达，且两药联合组更明显。结论 rAd-p53、DDP单独及两药联合均可抑制胃癌SGC7901细胞的生长，诱导其凋亡，二者联合对胃癌细胞的抑制作用增强，rAd-p53可能通过上调KAI1／CD82的表达诱导SGC7901细胞凋亡，同时增强DDP的抗肿瘤作用。
关键词： 重组人p53腺病毒注射液 SGC7901 KAI1/CD82 -
SGC7901细胞对化疗药物的敏感性研究
目的 了解胃腺癌细胞株SGC7901细胞对不同化疗药物的敏感性,为临床选择化疗药物提供信息. 方法 分别用5氟尿嘧啶、阿霉素、顺铂、表阿霉素、丝裂霉素、环磷酰胺的常规用药峰浓度孵育SGC7901,采用MTT法,测量孵育前后细胞的吸光度,计算各化疗药物对SGC7901细胞的抑制率. 结果 在常规峰浓度时对SGC7901细胞的抑制率分别为: 5氟尿嘧啶57.4%、阿霉素56.4%、顺铂39.8%、表阿霉素38.0%、丝裂霉素92.2%、环磷酰胺15.0%. 结论 SGC7901对化疗药物的敏感性依次为丝裂霉素、5氟尿嘧啶、阿霉素、顺铂、表阿霉素及环磷酰胺.达到50%以上抑制率的药物只有丝裂霉素、5氟尿嘧啶、阿霉素.
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携带人肝细胞生长因子第一结构域基因溶瘤腺病毒的构建及其对胃癌细胞的杀伤作用
目的 构建携带具有抗肿瘤细胞和抗血管生成作用的人肝细胞生长因子第一结构域(HGFK1)基因的肿瘤特异性启动子调控的溶瘤腺病毒,研究其对胃癌细胞选择性杀伤作用.方法以人端粒酶反转录酶启动子(hTERT)和缺氧调控元件序列(HRE)分别调控溶瘤腺病毒复制必要的E1a和E1b基因,基因组插入HGFK1基因,构建HGFK1溶瘤腺病毒(TH-Ad-HGFK1-EGFP)和无HGFK1溶瘤腺病毒(TH-Ad-EGFP),空斑计数法滴定病毒浓度;病毒分为3组:实验A组(TH-Ad-HGFK1-EGFP)、实验B组(TH-Ad-EGFP)和对照C组(Ad-EGFP),分别感染胃癌细胞SGC7901和正常人成纤维细胞(HF);半数细胞培养物感染量法(TCID50)检测病毒扩增倍数;噻唑蓝(MTT)法检测病毒杀伤抑制作用;双重荧光染色检测病毒促凋亡作用.结果 溶瘤腺病毒TH-Ad-HGFK1-EGFP、TH-Ad-EGFP经测序及聚合酶链反应(PCR)鉴定确认构建成功,滴度都为2×1010pfu/ml;病毒扩增结果显示:A、B组病毒在SGC7901细胞中的扩增倍数分别为1.47×104、1.60×104倍,远大于对照C组病毒,在HF细胞中为110倍和124倍,远小于对照C组病毒;MTT结果显示:当感染复数(MOI)=100时,A组病毒对SGC7901细胞72、96h后的抑制率为(71.34±8.27)%、(74.56±1.78)%,B组为(30.58±3.83)%、(31.84±6.62)%,C组为(23.40±2.29)%、(21.18±2.32)%.A组与B组两时间点分别比较差异有统计学意义(P=0.002、P=0.003),A组与C组分别比较差异有统计学意义(P=0.003、P=0.000).A、B组病毒对HF细胞在96h后的抑制率为(18.94±0.88)%、(22.84±3.34)%,C组为(53.25±3.50)%,A、B两组与C组分别比较差异有统计学意义(P=0.003、P=0.001);凋亡结果显示:A组SGC7901细胞的凋亡率为(18.66±4.04)%,远高于其余各组.结论 溶瘤腺病毒TH-Ad-HGFK1-EGFP能在胃癌细胞SGC7901中复制增殖并对其有杀伤抑制、促凋亡作用.
关键词： 胃癌 人肝细胞生长因子第一结构域 溶瘤腺病毒 SGC7901
