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Sema 3F及其受体在子宫内膜异位症发生发展机制中的初步研究
目的 研究Sema 3F及其受体在子宫内膜异位症发生、发展机制中的作用.方法 选择于我院行腹腔镜治疗的20例腹膜子宫内膜异位症患者、20例深部浸润型子宫内膜异位症患者及20例卵巢巧克力囊肿患者作为实验组,另选择于我院行宫腹腔镜联合治疗的20例非子宫内膜异位症(如不孕或子宫肌瘤)患者作为对照组.采用原位PCR免疫组织化学实验分别对2组对象组织的Sema 3F及其受体NRP2、Plexin A1的表达水平进行检测.结果 实验组患者组织Sema 3F蛋白阳性表达率明显低于对照组(P＜0.05).同时实验组3亚组中,患者组织的Sema 3F蛋白阳性表达率排列顺序为:卵巢巧克力囊肿＜浸润型内异症＜腹膜内异症.实验组患者组织NRP2、Plexin A1蛋白阳性表达率明显高于对照组(P＜0.05).同时,实验组3亚组中,患者组织的NRP2、Plexin A1蛋白阳性表达率排列顺序为:卵巢巧克力囊肿＞浸润型内异症＞腹膜内异症.结论 Sema3F作为的潜在的肿瘤抑制因子,其在子宫内膜异位症的发生、发展中可通过受体NRP2、Plexin A1抑制子宫内膜异位症的发生及病情发展.
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VEGF、NRP2、MVD、LN在胃癌中的表达
胃癌(GC)是发生在胃上皮组织的恶性肿瘤，在全球每年新发胃癌90余万例，占所有新发癌症的9％，仅次于肺癌、乳腺癌和肠癌，居第4位，每年约有70余万人因胃癌死亡，居癌症死亡原因的第2位[1-2]。胃癌在中国是常见的恶性肿瘤之一，在消化道肿瘤中其死亡率高[3]。总体5年生存率<20%，大部分的初治患者就诊时已为中晚期，并出现局部进展或远处转移[4]。目前，胃癌的治疗主要是采取手术切除为主，联合放疗、化疗、免疫治疗和中医中药治疗等综合治疗方法。近年来，尽管胃癌的诊断与治疗水平不断提高，但即使是根治性切除的患者5年内复发转移的仍可达到35.0%[5]。因此，寻找判断胃癌浸润与转移的分子生物学指标不仅可以提高胃癌的诊疗水平，而且对判断患者的预后，筛选出具有高转移危险的患者都具有非常重要的意义。本文主要对VEGF、NRP2、MVD、LN与胃癌根治性切除术后浸润、转移、复发及生存期的相关性作一综述。
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Adv-shRNA抑制NRP2表达对胃癌SGC7901细胞增殖的影响
目的 通过特异性抑制胃癌细胞株SGC7901中神经纤毛蛋白2(NRP2)基因的表达,检测RNA干扰片段对SGC7901细胞增殖能力的影响.方法 将NRP2的特异性RNA干扰腺病毒载体转染至胃癌细胞SCG7901 72 h后荧光显微镜观察转染情况；采用RT-PCR法检测转染后NRP2基因mRNA表达情况；MTT法检测胃癌细胞增殖情况；Westerm印迹检测转染后NRP2蛋白表达情况.结果 成功将NRp2-shRNA重组腺病毒载体转染至胃癌细胞SGC7901.各重组腺病毒转染组NRP2 mRNA水平均低于阴性对照组和空白组,其中以NRP2-shRNA-3抑制效应强.阴性对照组与空白组细胞增殖迅速,两组间无显著差异(P＞0.05),实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少,与前两组相比有显著差异(P＜0.05).阴性对照组与空白组NRP2蛋白表达量明显高于实验组(P＜0.01),而阴性对照组与空白组之间无显著差异(P＞0.05).结论 重组腺病毒载体NRP2-shRNA可有效抑制胃癌细胞SCG7901中NRP2基因的mRNA和蛋白的表达,并在一定程度上抑制癌细胞增殖,可作为动物实验的理论基础和前期条件.
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超声检测老年前列腺癌患者血流分级与术后组织中NRP1和NRP2的关系
临床常通过血清学中前列腺特异抗原(PSA)等肿瘤相关标志物的检测以早期发现肿瘤,但由于其特异性差,使其在临床中的应用并不理想.研究显示前列腺癌发生中血管生成相对于正常组织来说明显增多[1].临床上观察血流简便而无创的是彩色多普勒超声检测血流分级.神经纤毛蛋白(NRP)1和NRP2是内皮细胞表面的一种受体,其对肿瘤的进展和血管形成均有促进作用[2,3].在超声检测中的血流分级提示器官内的血液流量,由于超声检测的无创性,早期通过超声将血流分级与肿瘤组织中的NRP1和NRP2联系起来,可能对早期判断肿瘤的生物学行为有一定意义.本文关注血流分级与术后组织中NRP1和NRP2的关联性.
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喉鳞癌患者术后组织中神经纤毛蛋白1、2的表达及对血管生成的作用
目的 观察喉鳞癌组织中神经纤毛蛋白(NRP)1、2的表达特点,关注二者对肿瘤中CD34阳性的血管生成的作用.方法 收集79例喉鳞癌标本作为观察组,收集53例正常喉黏膜组织作为对照组,应用免疫组织化学技术检测二组中NRP1、NRP2和CD34的表达,分析其在不同临床特征中的表达差别及相关性.结果 喉鳞癌中NRP1、NRP2表达的阳性率和CD34标记的微血管密度(MVD)明显高于对照组,观察组中NRP1、NRP2表达的阳性率和MVD与肿瘤体积、淋巴结转移、淋巴结转移数量及Ki67的表达密切相关,线性相关分析显示NRP1和MVD、NRP2和MVD具有正相关性,生存分析显示NRP1、NRP2和MVD与患者的预后相关.结论 NRP1、NRP2和MVD高表达在喉鳞癌的发生发展中具有重要作用,NRP1、NRP2具有促进CD34阳性的血管生成的作用,联合检测NRP1、NRP2和MVD可能与喉鳞癌的预后密切相关.
关键词： 喉鳞癌 神经纤毛蛋白(NRP)1 NRP2 CD34 免疫组织化学 -
食管鳞癌中神经纤毛蛋白2基因断裂和重排的分析与鉴定
目的：分析食管鳞癌中的基因断裂及重排，旨在为食管鳞癌的诊断及治疗提供分子标志和新的治疗靶点。方法通过对食管鳞癌手术标本进行单核苷酸多态性（ single nucleotide polymorphism ， SNP ）微阵列检测，首先发现基因内部断裂；采用 cDNA 末端快速扩增法（ rapid amplification of cDNA ends ， RACE ）技术鉴定与断裂基因残留部分融合的新的染色体片段，采用蛋白免疫印迹（ Western blotting ）和免疫组织化学（ immunohistochemistry ， IHC ）方法检测基因断裂后的表达情况；利用荧光原位杂交（ fluorescence in situ hybridization ， FISH ）技术检测候选基因在较大临床样本中的断裂频率。结果 SNP 微阵列分析6例食管鳞癌手术组织，在2例标本中发现2号染色体长臂33.3区段的 NRP 2基因内发生了断裂。3′-RACE 分析结果表明，在其中1例的互补 DNA 水平存在神经纤毛蛋白2-膜联蛋白 A 13基因（ NRP 2-ANXA 13）融合转录本。通过 FISH 进一步分析16例食管鳞癌组织，发现6例存在NRP 2断裂，其中2例疑似存在 NRP 2-ANXA 13重排。 Western 印迹和 IHC 分析结果显示，发生 NRP 2-ANXA 13融合病例标本的正常 NRP 2蛋白表达与癌旁组织相比显著下调。结论在食管鳞癌组织中存在 NRP 2基因的高频断裂和 NRP 2-ANXA 13的基因融合，该结果为探明食管鳞癌中基因断裂和重排的作用及机制提供了新的重要线索。
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Nrp1、Nrp2及SEMA3F在口腔癌组织及TCa、ACC细胞系中的表达及其可能的作用
目的 研究SEMA3F及其受体Nrp1和Nrp2在口腔癌组织和细胞(ACC2,ACCM 和 TCa)中的表达情况,并推测其在口腔癌生成中的可能意义.方法 应用RT-PCR和Western bloting以及免疫组化法检测SEMA3F、Nrp1及Nrp2在口腔癌(ACC2,ACCM and TCa)组织和细胞中的表达情况.结果 在所有口腔癌组织和癌细胞中均可检测到Nrp1和Nrp2的表达,但Nrp2相对表达较弱.Western bolting、RT-PCR提示Nrp1呈高表达,Nrp2及SEMA3F均表达较低.在免疫组织化学中显示癌及癌周组织中Nrp1均呈高表达,且癌巢中的表达明显高于癌间隙组织,Nrp2及SEMA3F呈较弱表达.结论 提示在肿瘤的发展进程中,Nrp1可能对肿瘤本身的发生,增殖及肿瘤的血管生成均可能起到了重要的作用.
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淋巴管内皮细胞受体NRP2研究新进展
NRP2是新近发现的淋巴管内皮细胞受体,其能与血管内皮细胞生长因子VEGFC/D结合,诱导肿瘤原有及新生淋巴管生成、分化和重构,促进肿瘤细胞向淋巴道迁徙、侵袭和转移.NRP2受体不仅是连接、启动、激活细胞外配体和细胞内信号通路的中枢结点,更是反映不同解剖学部位、不同组织学类型、不同发生发展阶段肿瘤特性的良好指标.了解NRP2受体结构功能的生化意义,确定其在VEGFC/D-NRP2反应轴中的核心地位,分析其与VEGFR3、NRP1等同类受体之间的相互关系,观察其在肿瘤淋巴管生成和淋巴道转移时的表达规律,阐明其可能涉及的分子生物学机制,具有重要意义.
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NRP2及miR-486-5p 在胃癌中的表达及临床意义
目的:检测神经纤毛蛋白-2 (neuropilin-2,NRP2)和miR-486-5p在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌淋巴结转移的关系.方法:收集65例胃癌组织及其配对癌旁正常粘膜组织,免疫组织化学法检测组织中NRP2的表达,real-time PCR检测miRNA-486-5p的表达,免疫组织化学法检测D2-40标记的微淋巴管密度(microlymphatic density,MLD),统计分析NRP2、miR-486-5p的表达与MLD相关性.结果:免疫组化提示NRP2在肿瘤中表达增高(78.5％ vs.29.2％,x2=16.046,P=0.000),且与淋巴结转移密切相关(x2=7.222,P=0.007).real-time PCR结果显示肿瘤组织miR-486-5p表达明显下调(0.39±0.16 vs.1.00±0.06,P=0.000),NRP2的表达水平与MLD呈正相关(r=0.384,P=0.015),miR-486-5p的表达水平与MLD呈负相关(r=-0.755,P=0.000).结论:NRP2和miR-486-5p与胃癌发生发展密切相关,有望成为胃癌治疗的新靶点.
关键词： 胃癌 NRP2 miR-486-5p 微淋巴管密度 -
RNA干扰Neuropilins-2基因真核表达载体的构建及其鉴定
目的 构建Neuropilins-2(NRP2)基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体.方法 以NRP2为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构件重组体,根据GenBank数据库提供的NRP2基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析.重组pGenSil-NRP2载体转染LOVO细胞48 h,收获细胞,采用Western blotting检测其NRP2蛋白表达.结果 经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功.重组体pGenSil-NRP2转染LOVO细胞48 h后NRP2蛋白表达显著降低.结论 利用RNAi技术可成功构建抑制NRP2表达的小干扰RNA重组体.
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VEGF-C基因RNA干扰真核表达载体的构建及其效果鉴定
目的:构建VEGF-C基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体.方法:以VEGF-C为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的VEGF-C基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析,将重组的pGenSil-VEGF-C质粒转染LOVO细胞48小时,检测其对LOVO细胞VEGF-C蛋白与mRNA表达的影响.结果:经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体显著降低Lovo细胞VEGF-C的蛋白和mRNA表达,重组载体构建成功.结论:利用RNAi技术可成功构建抑制VEGF-C表达的小干扰RNA重组体.
