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BCR-ABL抑制剂STI571对慢性髓系白血病细胞株K562中SARI基因表达影响的研究
为了探讨抑癌基因SARI(suppressor of AP-1 regulated by IFN)在慢性髓系白血病(CML)中表达调控可能的分子机制,收集了46名CML患者和40名健康志愿者外周血样品,使用实时定量PCR技术检测2组人群中SARI基因的相对表达水平.在体外以CML细胞株K562为研究模型,使用BCR-ABL抑制剂STI571(imatinib)处理K562细胞,用实时定量PCR技术检测SARI基因的相对表达水平.结果表明,CML患者外周血中SARI mRNA相对表达量明显低于健康志愿者,2组间具有明显的统计学差异(P<0.001).使用STI571(2.5 μmol/L)处理K562细胞24小时后SARI mRNA相对表达量明显高于未处理K562细胞,两组间差异具有显著性(P<0.001).结论:CML患者外周血SARI mRNA表达水平降低可能与该疾病的发生发展过程相关联,而且SARI基因表达下调与BCR-ABL抑制作用有关.本研究为CML患者基因治疗的研究提供了新线索.
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STI571耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性初步研究
为了探讨STI571耐药机制和体外诱导建立甲磺酸伊马替尼(imatinib rnesylate,又称STI571)耐药的白血病细胞系,采用STI571递增给药的方法诱导裸鼠高致瘤性人慢粒红白血病变细胞系K562-n和多药耐药细胞系K562-n/VCR对STI571耐药,比较它们与各自亲本细胞系间基本生物学特性的异同.结果显示,建立多药耐药基础上对STI571耐药的白血病细胞亚系K562-n/VCR/STI,对STI571耐药倍数为23 41,对长春新碱(VCR)耐药倍数为662 26,对高三尖杉酯碱(HHT)具有交叉耐药性.K562-n经STI571诱导后对多种药物耐受性有所提高,命名为K562-n/STI.K562-n/STI和K562-n/VCR/STI细胞内DNR积聚量分别为33.24和18.76,低于各自亲本细胞系.K562-n/STI与K562-n/VCR/STI均检测到mdr-1基因的mRNA转录.K562-n/STI和K562-n/VCR/STI与亲本细胞系相比,倍增时间延长,增殖指数增高.结论:体外小剂量STI571递增给药的方法能够提高K562-n细胞系对STI571的耐受性,同时mdr-1基因表达阳性,表现一定程度的多药耐受,提示STI571耐药机制与多药耐药机制之间可能存在相关性.由于K562-n为裸鼠高致瘤的人白血病细胞系,K562-n/STI和K562-n/VCR/STI571的建立有可能为耐药机制及耐药逆转的研究提供体外和体内实验模型.
关键词： 多药耐药 ST1571 慢性髓性白血病细胞系 细胞培养 -
酪氨酸激酶抑制剂STI571对慢性粒细胞性白血病K562细胞周期的作用及机制
目的:研究酪氨酸激酶抑制剂STI571对K562细胞周期的作用及机制.方法:以逆转录-聚合酶链反应和Western blot方法分别检测ST1571处理K562细胞12、24、48 h后p38、ERK、cyclin D2、cyclin E、p27 mRNA和蛋白的表达,并以流式细胞仪检测其不同时间点细胞周期的变化.结果:ST1571处理后K562细胞p38、ERK、cyclin D2、cyclin E mRNA和蛋白表达降低,p27 mRNA和蛋白表达增高.G<0/G1期细胞增多,s期细胞减少,与用药前比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论:STI571可能通过丝裂原活化蛋白激酶途径影响细胞周期调控蛋白,终抑制K562细胞的增殖.
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硒化壳聚糖通过下调核因子КB途径增强ST1571对耐药K562/ADM细胞敏感性
目的 研究硒化壳聚糖增强ST1571对多药耐药白血病K562/ADM细胞敏感性的作用,并进一步探讨其耐药逆转机制.方法 应用MTT法检测ST1571单独和联合硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响,计算逆转倍数;应用流式细胞法检测细胞凋亡;应用免疫印迹法检测核因子КB(NF-КB)蛋白的改变.结果 单独应用1μmol·L-1 ST1571作用12,24,36 h,对K562/ADM细胞增殖抑制率分别为(19.15±1.64)％、(24.35±2.37)％和(26.37±2.39).1μmol·L-1ST1571联合25～400 mg·L-1硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞,随着硒化壳聚糖浓度和作用时间的增加,对细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量时间效应关系.硒化壳聚糖能够对K562/ADM细胞耐ST1571产生一定的逆转作用,明显增强ST1571对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用(P＜0.05,P＜0.01),下调NF-КB蛋白表达(P＜0.01).结论 硒化壳聚糖能够增强K562/ADM细胞对ST1571的敏感性,其部分机制可能是通过诱导细胞凋亡,抑制细胞mdr-1基因表达,阻断细胞NF-КB信号通路来实现的.
关键词： 硒化壳聚糖 K562/ADM细胞 ST1571 耐药逆转 信号通路 -
硒化壳聚糖增强K562/ADM细胞对ST1571敏感性的作用研究
目的 研究硒化壳聚糖增强ST1571对多药耐药白血病K562/ADM细胞敏感性的作用,并探讨其逆转耐药的可能机制.方法 硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞,MTT法检测ST1571对K562/ADM细胞增殖的影响;RT-PCR法和免疫印迹法检测mdr-1/P-gp表达的改变.结果 单独应用1μmol·L-1 ST1571作用124 h,对K562/ADM的增殖抑制率为(24.35±2.37)％,加入100 mg·L-1或200 mg·L-1硒化壳聚糖后,抑制率则上升为(62.79±4.89)和％(78.63±5.42)％,逆转倍数分别为2.51倍和3.43倍;ST1571与100 mg·L-1或200 mg·L-1硒化壳聚糖联用可使mdr-l mRNA水平分别下调(60.93±5.21)％和(82.61±6.74)％(P＜0.01),使P-gp表达水平分别下调(58.35±5.38)％和(81.14±8.96)％(P＜0.01).结论 硒化壳聚糖能够增强K562/ADM细胞对ST1571的敏感性,下调其mdr-1 mRNA和P-gp表达水平,从而起到逆转K562/ADM白血病细胞对ST1571的多药耐药作用.
关键词： 硒化壳聚糖 K562/ADM细胞 ST1571 多药耐药
