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硒化壳聚糖逆转K562/ADM细胞多药耐药的实验研究
目的:研究硒化壳聚糖对人慢性粒细胞白血病耐阿霉素细胞株( K562/ADM) mdr-1基因/P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响,为逆转肿瘤多药耐药提供新的途径.方法:硒化壳聚糖100,200 mg·L-1作用K562/ADM细胞24 h,应用RTPCR法和免疫印迹法检测mdr-1/P-gp表达的改变；应用高效液相色谱法检测细胞内阿霉素积聚浓度；应用MTT法检测阿霉素对K562/ADM细胞增殖的影响.结果:硒化壳聚糖可增强K562/ADM细胞对阿霉素的敏感性,增加细胞内阿霉素集聚浓度,200 mg·L-1硒化壳聚糖作用效果显著强于100 mg·L-1硒化壳聚糖(P＜0.01)；硒化壳聚糖能明显抑制K562/ADM细胞mdr-1/P-gp的表达(P＜0.01),100 mg·L-1硒化壳聚糖可使mdr-1/P-gp表达分别下降(40.87 -3.19)％和(35.08±0.09)％,200 mg·L-1硒化壳聚糖可使mdr-1/P-gp表达分别下降(78.24±3.42)％和(79.61±0.23)％.结论:硒化壳聚糖可明显抑制K562/ADM细胞mdr-1/P-gp表达,增加细胞内阿霉素含量,恢复细胞对化疗药物敏感性,逆转mdr-1编码蛋白P-gp介导的多药耐药.
关键词： 硒化壳聚糖 K562/ADM细胞 多药耐药 -
硒化壳聚糖对体外培养表皮细胞增殖的影响
目的 研究硒化壳聚糖对体外培养的表皮细胞增殖的影响. 方法 用不同剂量(25,50,100,200,400 mg/L)硒化壳聚糖作用于表皮细胞,镜下观察药物对细胞形态的影响;MTT法、3H-TdR掺入法、细胞生长动力学研究用于检测药物对细胞增殖影响,并以等体积的细胞培养液处理为对照组. 结果 各药物浓度组处理细胞后,细胞形态未见明显改变,均可使细胞吸光度值增加(除25 mg/L组外,均P<0.05),细胞倍增时间缩短(除25 mg/L组外,均P<0.05),促进表皮细胞对3H-TdR的掺入(P<0.05,P<0.01). 结论 硒化壳聚糖对体外培养表皮细胞增殖具有促进作用.
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硒化壳聚糖与阿霉素联合及序贯给药对NB4细胞增殖的影响
目的 研究硒化壳聚糖与ADM联合应用对NB4细胞增殖的影响,探讨两药序贯给药的不同效果. 方法 硒化壳聚糖(50,100 mg/L)及ADM(0.5,1,2 mg/L)同时或者序贯给药(先给予硒化壳聚糖后给予ADM或先给予ADM后给予硒化壳聚糖)作用于NB4细胞,MTT法检测药物对细胞增殖的影响;金氏公式评价两药的协同效果. 结果 硒化壳聚糖与ADM单独作用均可抑制NB4细胞增殖,二者联合应用呈协同作用;先给予硒化壳聚糖作用24 h,再给ADM作用24 h,对NB4细胞的抑制呈协同作用;先给予ADM作用24 h,再给硒化壳聚糖作用24 h,呈拮抗及单独相加作用. 结论硒化壳聚糖与不同浓度的ADM(0.5-2 mg/L)联合应用可协同抑制NB4细胞增殖;序贯应用硒化壳聚糖和ADM时,先给予硒化壳聚糖再给予ADM比先给予ADM再给予硒化壳聚糖协同效果好.
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硒化壳聚糖通过下调PML-RARα融合蛋白对急性早幼粒白血病NB4细胞增殖和凋亡的作用
目的 研究硒化壳聚糖对急性早幼粒白血病细胞株NB4增殖和凋亡的影响及其与PML-RARα融合蛋白表达的关系.方法 应用MTT法检测硒化壳聚糖对细胞增殖的影响,电镜下观察药物诱导细胞凋亡作用,应用Western印迹法检测细胞PML-RARα融合蛋白含量的变化.结果 硒化壳聚糖对体外培养的NB4细胞可产生剂量和时间依赖性的抑制作用,50～100 mg/L硒化壳聚糖作用NB4细胞24 h可诱导细胞出现明显的凋亡现象,经硒化壳聚糖作用24 h后,NB4细胞内PML-RARα融合蛋白含量明显减少.结论 硒化壳聚糖可通过下调PML-RARα融合蛋白含量对NB4细胞产生抑制增殖和诱导凋亡作用.
关键词： 硒化壳聚糖 NB4细胞 增殖 凋亡 PML-RARα融合蛋白 -
硒化壳聚糖对K562／ADM细胞生物学行为的影响
目的：观察硒化壳聚糖对体外培养慢性粒细胞多药耐药白血病细胞株 K562／阿霉素（ ADM）细胞生物学行为的影响。方法硒化壳聚糖作用于体外培养的K562／ADM细胞12、24 h，应用流式细胞法检测细胞凋亡，软件拟合计算细胞周期；应用免疫印迹法检测P－糖蛋白（ P－gp）的表达；应用RT－PCR法检测MDR－1 mRNA水平。结果硒化壳聚糖能够明显增强 ADM对 K562／ADM细胞的诱导凋亡作用，阻滞细胞周期于 G1期（P＜0．05，P＜0．01），下调P－gp表达和MDR－1 mRNA水平（P＜0．05，P＜0．01），硒化壳聚糖浓度越高，作用效果越显著。结论硒化壳聚糖能够通过下调MDR－1基因和P－gp表达，阻滞细胞周期于G1期来诱导细胞凋亡，进而对体外培养的K562／ADM细胞耐药生物学行为产生逆转。
关键词： 硒化壳聚糖 K562/ADM细胞 多药耐药 生物学行为 -
硒化壳聚糖对HL60细胞增殖分化的影响
目的 探讨硒化壳聚糖与细胞c-myc和c-fos基因表达的关系及对人早幼粒白血病HL60细胞增殖和分化的影响.方法 采用SRB法和克隆形成法检测细胞增殖;Wright-Giemsa染色法检测细胞分化;流式细胞术检测CD11b、c-myc和c-fos分子表达.结果 25、50、100 mg/L硒化壳聚糖作用HL60细胞48 h可明显促进细胞分化和抑制细胞增殖(P＜0.05,P＜0.01);各浓度硒化壳聚糖均可使细胞CD11b蛋白表达显著升高(P＜0.01),c-myc蛋白表达下降(P＜0.05或P＜0.01),c-fos蛋白表达升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 硒化壳聚糖可通过调控c-myc和c-fos基因表达来抑制HL60细胞增殖,促进细胞分化.
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硒化壳聚糖的制备及其表征
本研究将具有良好的生物相容性的壳聚糖无机硒酸进行硒化,并对其硒化产物进行结构表征.硒化壳聚糖的IR和UV光谱证明:硒化位点为壳聚糖碳6位上的羟甲基与碳2位上的氨基.硒化壳聚糖为低分子量水溶性物质,有望开发成为高效低毒的抗肿瘤有机硒药物.
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硒化壳聚糖抗K562细胞作用机制的初步探讨
应用分光光度法和放免法观察不同剂量硒化壳聚糖对K562细胞株抗氧化指标及cAMP、cGMP含量的影响,结果发现硒化壳聚糖可明显升高细胞内GSH-PX活力,降低SOD活性和MDA含量,升高cAMP含量,降低cGMP含量,升高cAMP/cGMP比值.降低K562细胞内脂质过氧化水平,升高cAMP/cGMP比值可能是硒化壳聚糖诱导K562细胞凋亡机制之一.
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硒化壳聚糖和亚硒酸钠抗K562细胞的实验研究
应用MTT比色分析法比较研究有机硒化物-硒化壳聚糖和无机硒化物-亚硒酸钠对白血病K562细胞的作用.结果表明:两种硒在体外实验浓度范围内均对K562细胞的增殖具有显著的抑制作用,并有剂量反应关系:硒化壳聚糖的抗白血病效应明显高于含同样硒量的亚硒酸钠,约为其3倍,有机硒比无机硒具有更高的抗白血病活性.
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硒化壳聚糖理化性质和分子结构的研究
运用高效凝胶色谱(HPGPC)、乌氏粘度计、XYG-110型多功能原子荧光仪、常规溶剂和WZZ-1自动指示旋光仪等方法对本实验室制备的硒化壳聚糖的理化性质进行测定,结果表明:硒化壳聚糖的分子量为3448;特性粘度为99;室温干燥放置1年,硒化壳聚糖保持稳定;硒化壳聚糖在水中可溶,而且溶解度随温度升高而增加,但在有机溶剂中基本不溶;硒化壳聚糖在25℃时的旋光度为-14.通过紫外光谱、红外光谱、氢谱(1HNMR)和碳谱(13CNMR)的测定分析,确定亚硒酸根是连接在壳聚糖分子中C2位的氨基上和C6位的羟基上.
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硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响及其与PI-3K/Akt信号途径的关系
目的 研究硒化壳聚糖对耐阿霉素慢性粒细胞白血病细胞株K562/ADM增殖的影响,探讨这种影响与PI-3 K/Akt信号途径的关系.方法 硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞后,应用MTT法和克隆形成法检测硒化壳聚糖对细胞增殖和存活的影响,计算逆转倍数；应用免疫印迹法检测p-Akt蛋白表达的改变.结果 随着硒化壳聚糖浓度的增加,细胞增殖抑制率相应增加,存活率相应减少,呈剂量时间效应关系.硒化壳聚糖能够下调p-Akt表达(P＜0.01),明显增强ADM对K562/ADM细胞的增殖抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),对细胞耐药产生一定的逆转作用.结论 硒化壳聚糖可通过抑制PI-3 K/Akt信号途径对耐药白血病细胞株K562/ADM产生增殖抑制和多药耐药逆转作用.
关键词： 硒化壳聚糖 K562/ADM细胞 增殖 PI-3K/Akt -
小剂量硒化壳聚糖与全反式维甲酸协同诱导NB4细胞分化和凋亡
目的 研究小剂量硒化壳聚糖(25 mg/L)与全反式维甲酸(ATRA 0.1 μmol/L)联合应用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化及凋亡的影响.方法 采用DNA片段化凝胶电泳法检测细胞凋亡;NBT还原法检测细胞分化;流式细胞法检测分化抗原CD11b.结果 25 mg/L硒化壳聚糖没有诱导NB4细胞分化和凋亡的能力,但与0.1 μmoL/L ATRA联合使用同单独使用0.1 μmol/L ATRA相比,CD11b表达阳性率进一步增加,NBT还原能力进一步增强,两药合用DNA电泳呈现出典型的梯带.结论 小剂量硒化壳聚糖与ATRA联合使用可诱导NB4细胞发生凋亡及分化.
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硒化壳聚糖通过下调PML-RARα融合蛋白来对NB4细胞产生抑制增殖和诱导凋亡作用
目的 研究硒化壳聚糖对急性早幼粒白血病细胞株NB4增殖和凋亡的影响,探讨这种影响与PML-RARα融合蛋白表达的关系.方法 应用MTT法检测硒化壳聚糖对细胞增殖的影响,应用AO/EB荧光染色法共聚焦显微镜下观察诱导凋亡作用,应用Western blot的方法检测细胞PML-RARα融合蛋白含量的变化.结果 硒化壳聚糖可对体外培养的NB4细胞产生剂量和时间依赖性的抑制作用,50 mg/L 至 100 mg/L硒化壳聚糖作用NB4细胞24 h可诱导细胞出现明显的凋亡现象,经硒化壳聚糖处理24 h后,NB4细胞内PML-RARα融合蛋白含量明显减少.结论 硒化壳聚糖可通过下调PML-RARα融合蛋白含量对NB4细胞产生抑制增殖和诱导凋亡作用.
关键词： 硒化壳聚糖 NB4细胞 增殖 凋亡 PML-RARα融合蛋白 -
硒化壳聚糖诱导人早幼粒白血病细胞凋亡的研究
目的 探讨硒化壳聚糖对人早幼粒白血病细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用SRB法和集落形成法检测硒化壳聚糖对人早幼粒白血病细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞法检测药物对细胞的促凋亡作用;应用Western blot法检测WTI蛋白表达的情况.结果 25,50,100 mg/L硒化壳聚糖作用HL60细胞48h对细胞有增殖抑制作用(P<0.01);50,100 mg/L硒化壳聚糖作用细胞48 h后,G0/G1期细胞数较对照组增加了14.9%和22.0%(P<0.05),S期细胞减少了14.3%和20.1%(P<0.05),凋亡率分别是(6.7±1.6)和(11.8±2.1);50,100 mg/L硒化壳聚糖作用HL60细胞48 h后WTI蛋白表达分别下调38.2%(P<0.05)和64.3%(P<0.01).结论 硒化壳聚糖具有对人早幼粒白血病细胞增殖抑制及促凋亡作用,WTI在此过程中可能发挥着重要的作用.
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硒化壳聚糖通过下调核因子КB途径增强ST1571对耐药K562/ADM细胞敏感性
目的 研究硒化壳聚糖增强ST1571对多药耐药白血病K562/ADM细胞敏感性的作用,并进一步探讨其耐药逆转机制.方法 应用MTT法检测ST1571单独和联合硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响,计算逆转倍数;应用流式细胞法检测细胞凋亡;应用免疫印迹法检测核因子КB(NF-КB)蛋白的改变.结果 单独应用1μmol·L-1 ST1571作用12,24,36 h,对K562/ADM细胞增殖抑制率分别为(19.15±1.64)％、(24.35±2.37)％和(26.37±2.39).1μmol·L-1ST1571联合25～400 mg·L-1硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞,随着硒化壳聚糖浓度和作用时间的增加,对细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量时间效应关系.硒化壳聚糖能够对K562/ADM细胞耐ST1571产生一定的逆转作用,明显增强ST1571对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用(P＜0.05,P＜0.01),下调NF-КB蛋白表达(P＜0.01).结论 硒化壳聚糖能够增强K562/ADM细胞对ST1571的敏感性,其部分机制可能是通过诱导细胞凋亡,抑制细胞mdr-1基因表达,阻断细胞NF-КB信号通路来实现的.
关键词： 硒化壳聚糖 K562/ADM细胞 ST1571 耐药逆转 信号通路 -
硒化壳聚糖增强K562/ADM细胞对ST1571敏感性的作用研究
目的 研究硒化壳聚糖增强ST1571对多药耐药白血病K562/ADM细胞敏感性的作用,并探讨其逆转耐药的可能机制.方法 硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞,MTT法检测ST1571对K562/ADM细胞增殖的影响;RT-PCR法和免疫印迹法检测mdr-1/P-gp表达的改变.结果 单独应用1μmol·L-1 ST1571作用124 h,对K562/ADM的增殖抑制率为(24.35±2.37)％,加入100 mg·L-1或200 mg·L-1硒化壳聚糖后,抑制率则上升为(62.79±4.89)和％(78.63±5.42)％,逆转倍数分别为2.51倍和3.43倍;ST1571与100 mg·L-1或200 mg·L-1硒化壳聚糖联用可使mdr-l mRNA水平分别下调(60.93±5.21)％和(82.61±6.74)％(P＜0.01),使P-gp表达水平分别下调(58.35±5.38)％和(81.14±8.96)％(P＜0.01).结论 硒化壳聚糖能够增强K562/ADM细胞对ST1571的敏感性,下调其mdr-1 mRNA和P-gp表达水平,从而起到逆转K562/ADM白血病细胞对ST1571的多药耐药作用.
关键词： 硒化壳聚糖 K562/ADM细胞 ST1571 多药耐药 -
硒化壳聚糖对K562/ADM细胞生物学行为的影响
目的 观察硒化壳聚糖对体外培养慢性粒细胞白血病多药耐药细胞株K562/ADM细胞生物学行为的影响.方法 硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞12～24 h,应用流式细胞法检测细胞凋亡,软件拟合计算细胞周期；应用免疫印迹法检测P-gp的表达；应用RT-PCR法检测mdr-1 mRNA水平.结果 硒化壳聚糖能够明显增强ADM对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,阻滞细胞周期于G1期(P＜0.05,P＜0.01),下调P-gp表达和mdr-1mRNA水平(P ＜0.05,P＜0.01),硒化壳聚糖浓度越高,作用效果越明显.结论 硒化壳聚糖能够通过下调mdr-1基因和P-gp蛋白表达,阻滞细胞于G1期诱导凋亡来对体外培养的K562/ADM细胞耐药生物学行为产生影响.
关键词： 硒化壳聚糖 K562/ADM细胞 多药耐药 生物学行为 -
硒化壳聚糖对体外培养人皮肤成纤维细胞分泌细胞因子与一氧化氮的影响
目的 观察硒化壳聚糖对体外培养人皮肤成纤维细胞分泌细胞因子及一氧化氮(NO)的影响.方法 测定经25,50,100,200,400 mg·L-1硒化壳聚糖作用后,人皮肤成纤维细胞培养上清液中转化生长因子-α(TGF-α)、TGF-β1、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)及NO的水平;对照组用等体积细胞培养液处理.结果 与对照组比较,硒化壳聚糖作用后皮肤成纤维细胞培养液中TGF-α、TGF-β1、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF水平不同程度升高,差异有显著性或极显著性(P＜0.05或P＜0.01);而NO水平与对照组比较显著下降(均P＜0.01).结论 硒化壳聚糖通过促进细胞分泌TGF-α、TGF-β1、IL-1β、IL-6、IL-8及TNF,抑制NO释放来促进皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成.
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硒化壳聚糖抑制人早幼粒白血病细胞增殖的研究
为探讨硒化壳聚糖对体外培养人早幼粒白血病细胞增殖的抑制作用,用SRB法和集落形成法检测了药物对细胞增殖的抑制作用,流式法检测了细胞周期阻断作用.结果表明,25、50、100 mg/L硒化壳聚糖作用HL60细胞48 h对细胞有增殖抑制作用(P< 0.01);50、100 mg/L硒化壳聚糖作用细胞48 h后,G0/G1期细胞数较对照组增加了14.9%～22.0%(P<0.05),S期细胞减少了14.3%～20.1%(P<0.05).可见硒化壳聚糖对人早幼粒白血病细胞增殖具有抑制作用.
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硒化壳聚糖对NB4细胞作用的实验研究
应用 MTT 法、AO/EB 荧光染色法和NBT还原法观察硒化壳聚糖对 NB4 肿瘤细胞株生长的影响.结果发现,硒化壳聚糖可有效地抑制NB4细胞生长,并呈量效、时效关系.经100 mg/L 及以上剂量硒化壳聚糖作用后的细胞可明显出现核固缩、碎裂等凋亡形态改变.而经100 mg/L 以下剂量硒化壳聚糖作用后,细胞可出现诱导分化成熟的表现.
关键词： 硒化壳聚糖 急性早幼粒细胞白血病
