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人参炔醇对氧糖剥夺神经细胞损伤的保护作用
目的:探讨人参炔醇对氧糖剥夺(OGD)致神经细胞损伤的保护作用.方法:体外培养PC12细胞,分为正常对照组、OGD组、人参炔醇组、尼莫地平组,加入含0.5 mmol·L(-1)Na2SO4的无糖Earle's液建立OGD损伤模型,以人参炔醇(10,20mg·L(-1))、尼莫地平(100 μmol·L(-1))处理.采用荧光显微镜观察细胞形态,Hoechst和PI双染流式细胞分析仪检测凋亡率,测定培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性与细胞Ca(2+)浓度,观察人参炔醇对OGD致PC12细胞损伤的保护作用.结果:人参炔醇能够减少OGD损伤PC12细胞LDH的释放(P<0.05,P<0.01),抑制Ca(2+)的过量产生(P<0.05,P<0.01)、显著减少细胞凋亡及坏死(P<0.05,P<0.01).结论:人参炔醇对OGD致神经细胞损伤具有保护作用.
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人参炔醇抑制实验性迟发型超敏反应
目的:考察人参炔醇(PAN)对实验性迟发型超敏反应的影响及可能作用途径.方法:应用2,4-二硝基氯苯(DNCB)造成小鼠变态反应性接触性皮炎(ACD)模型,考察PAN诱导相给药对耳廓肿胀的影响,并进行病理组织学检查;MTT法检测PAN对ConA诱导的T淋巴细胞增殖的影响.EUSA方法检测ConA刺激的脾细胞培养上清IFN-γ水平.结果:PAN10 mg·kg~(-1)诱导相给药可明显抑制小鼠耳肿胀;病理组织学结果显示PAN可减轻模型小鼠局部水肿及血管扩张,减少淋巴细胞浸润;PAN对ConA诱导的T细胞增殖有明显的抑制作用,而对静息状态的脾细胞末观察到显著影响;PAN 10 μmol·L~(-1)起明显抑制体外ConA刺激脾细胞的IFN-γ分泌,且作用在早期(6 h)即已呈现.结论:PAN对实验性迟发型超敏反应有显著的抑制作用,该作用可能与抑制T细胞增殖和IFN-γ的分泌有关.
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人参炔醇抑制胰腺癌干细胞的增殖及自我更新
目的 探讨人参炔醇对胰腺癌干细胞增殖及自我更新的影响.方法 胰腺癌PANC1细胞在干细胞体系培养液中培养成干细胞,用流式细胞术检测胰腺癌干细胞的CD133+细胞比例.以72、144、287 nmol/L人参炔醇处理干细胞12、24、48 h,采用CCK8法检测细胞成活率;通过克隆形成实验观察287 nmol/L人参炔醇处理胰腺癌干细胞48 h后的集落数量;采用蛋白质印迹法检测细胞增殖相关蛋白Ki67、PCNA及自我更新相关蛋白β-catenin的表达.结果 经干细胞培养体系培养的胰腺癌PANC1细胞的CD133+细胞比例为(9.70±0.59)％,显著高于常规培养对照组的(2.11±0.25)％,差异有统计学意义(P＜0.001).人参炔醇呈浓度及时间依赖性减少胰腺癌干细胞的存活率,对照组及72、144、287nmol/L人参炔醇处理48 h组细胞的存活率分别为100％、(63.32± 2.37)％、(49.91±2.13)％、(41.37±2.01)％,差异有统计学意义(P＜0.001);对照组及287 nmol/L人参炔醇处理48 h组细胞的集落形成数分别为(611 ±25)、(280±16)个,人参炔醇处理组集落形成数显著减少,差异有统计学意义(P ＜0.001);对照组细胞Ki67、PCNA、β-catenin表达量分别为0.376±0.012、0.772±0.026、0.219±0.018,人参炔醇处理组分别为0.183±0.010、0.453 ±0.009、0.148 ±0.006,处理组的蛋白表达量均较对照组显著下降,差异有统计学意义(P值均＜0.001).结论 人参炔醇可抑制胰腺癌PANC1干细胞的增殖及自我更新,其机制可能与下调Ki67、PCNA表达,阻断Wnt/β-catenin信号通路有关.
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人参炔醇体外抑制人胰腺癌SW1990细胞迁移作用研究
目的 胰腺癌患者的高死亡率与肿瘤转移高度相关,本研究主要探讨人参炔醇对胰腺癌细胞迁移的作用.方法 将人胰腺癌细胞系SW1990细胞与不同浓度人参炔醇(0、8、16、32和64 μg/mL)分别共培养3、6、12和24 h后,CCK-8试验检测人参炔醇对SW1990增殖活性的影响;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测人参炔醇对细胞迁移能力的影响;蛋白质印迹法检测细胞迁移相关蛋白E-Cadherin、MMP-9和Vimentin以及增殖相关蛋白PCNA表达的变化.结果 CCK 8试验结果显示,不同浓度人参炔醇对SW1990增殖具有抑制作用,但不同浓度之间抑制作用存在差异;其中以浓度为32 μg/mL人参炔醇作用24 h后抑制率高.划痕实验及Transwell迁移实验结果显示,对照组(0 μg/mL)细胞的愈合率为(78.3±1.4)％,8、16和32 μg/mL人参炔醇组细胞的愈合率分别为(47.8±1.9)％、(30.82±1.2)％和(20.54±2.8)％,差异有统计学意义,F=169.524,P＜0.01.Transwell迁移实验中,对照组与实验组穿至下室的细胞数分别为410.0±7.41、351.3±5.20、183.1±10.01和108.5±10.53,差异有统计学意义,F=284.574,P＜0.01.不同浓度人参炔醇对SW1990细胞迁移具有抑制作用,且在32 μg/mL浓度24 h抑制作用为显著.蛋白质印迹法结果显示,随着药物浓度升高,SW1990细胞E-Cadherin表达上调,Vimentin及MMP-9表达下调,P＜0.01;增殖相关蛋白PCNA的表达下调,P＜0.01.结论 人参炔醇能够有效的抑制胰腺癌SW1990细胞迁移,这一作用主要与通过抑制细胞增殖及上皮细胞向间质细胞转化相关.
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人参炔醇对神经细胞的营养和保护作用
目的探讨人参炔醇对神经细胞的营养及保护作用.方法通过PC12细胞、新生鼠脊髓背根神经节研究人参炔醇的神经营养和保护作用.结果人参炔醇可时间、剂量依赖性地促进PC12细胞轴索生长,促进细胞分化标志物MAP-2B表达;8μmol·L-1的人参炔醇可与5μg·L-1的神经生长因子协同促进大鼠脊髓背根神经轴索的延长;对叠氮钠致PC12细胞损伤有剂量依赖性保护作用.结论人参炔醇对PC12细胞具有类似神经生长因子的神经营养和神经保护作用.
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人参炔醇对氧应激诱导大鼠海马神经细胞凋亡的影响
目的 探讨人参炔醇对原代大鼠海马神经细胞氧应激的保护作用.方法 通过MTT和LDH法、AO/EB双染色法检测人参炔醇对神经元氧应激诱导凋亡的影响;通过使用信号转导阻断剂研究人参炔醇抗凋亡涉及的信号转导通路.结果 人参炔醇对H2O2造成的海马神经细胞损伤有浓度依赖性的保护作用,可促进细胞存活,减少细胞的凋亡率;人参炔醇的神经保护作用可被RpcAMPs和wortmannin阻断,可被genistein和H7部分阻断,而PD98059对人参炔醇的神经保护作用无显著影响.结论 人参炔醇保护神经元对抗氧应激,主要与细胞内cAMP及PI3K系统活性增高有关.
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人参炔醇对大鼠原代培养的神经细胞过氧化氢损伤的影响
目的探讨人参炔醇对原代神经细胞氧化应激的保护作用.方法通过MTT法、流式细胞术观察人参炔醇对神经细胞氧化应激的影响;并观察人参炔醇体外对自由基的清除作用及对细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性与丙二醛(MDA)含量的影响.结果2～16μmol/L人参炔醇对H2O2损伤神经细胞有一定的保护作用,可剂量依赖性地促进细胞存活,8μmol/L人参炔醇可显著减少细胞的坏死率及凋亡率(P＜0.01).30～100μmol/L人参炔醇对自由基有一定的清除作用,2～8 μmol/L人参炔醇还可显著提高H2O2损伤细胞内SOD、GSH-Px活性并抑制MDA的生成(P＜0.01).结论人参炔醇具有保护神经细胞对抗氧化应激的活性,该活性与细胞内SOD活性增高有关.
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人参炔醇对HL-60细胞体外诱导分化作用的研究
目的通过细胞形态学和增殖动力学研究人参炔醇对HL-60细胞诱导分化作用.方法采用台盼蓝染色及细胞计数器测定细胞存活量,流式细胞仪检测人参炔醇对细胞周期和分子标志表达的影响,观察信号通路阻断剂对人参炔醇诱导细胞分化的影响.结果人参炔醇使HL-60细胞倍增时间延长,诱导HL-60向单核细胞分化,细胞集中于G1期,显著上调细胞表面CD14分子表达,并中度上调CD11b分子表达,RpcAMPS及H7均可使人参炔醇诱导的HL-60细胞NBT阳性率降低.结论人参炔醇诱导HL-60向单核细胞分化,与细胞内腺苷酸环化酶(cAMP),蛋白激酶C(PKC)信号通路活化有关.
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三七中人参炔醇的提取、分离和鉴定方法分析
目的:探讨超临界CO2萃取法、硅胶柱层析法及波谱技术对三七中人参炔醇的提取、分离和鉴定的价值.方法:通过超临界CO2萃取法萃取三七脂溶成分,通过硅胶柱层析法进行分离,使用波谱技术对其有效成分人参炔醇的化学分子式进行鉴定.结果:三七中萃取人参炔醇分子式为C17H24O,化学名为3(R)-十七碳-1,9(Z)-二烯-4,6-二炔-3-醇.结论:超临界技术使人参炔醇开发和应用得到了飞跃式发展,同时创造了新型研究的理论依据.
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人参的药理作用
人参为五加科植物人参的干燥根,史载于我国本草专著《神农本草经》.中医认为人参味甘,有大补元气,生津止渴.调荣养卫的功能.现代化学研究表明,人参中含有多种皂苷,少量的挥发油.β-榄香烯和人参炔醇.现将人参的药理作用简述如下.
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三七不同药用部位聚炔类成分的GC-MS分析研究
目的 对三七不同药用部位的聚炔类成分进行气质联用分析.方法 采用气质联用技术对三七主根、花、剪口、筋条、茎叶和须根等不同药用部位的环己烷提取溶液进行了聚炔类成分分析,并测定其相对含有量.结果 从三七不同药用部位中共鉴定了3个聚炔类成分,包括methyl 5,7-hexadecadiynoate、人参炔醇和人参环氧炔醇.测定结果显示,3个聚炔类成分的总含有量在三七筋条、3年生主根、花、剪口中很高,在茎叶中很低；主根中头数越多,含有量越低；三七花中的人参炔醇含有量很高,但人参环氧炔醇几乎未能检测.结论 建立了内标校正相对含有量的三七聚炔类成分气质联用的定量分析方法,使测定具有可比性.
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含人参炔醇的胡萝卜提取物的制备工艺研究
目的 探索及优化从胡萝卜中提取人参炔醇的工艺.方法 采用高效液相色谱( HPLC)技术,以提取物中人参炔醇的含量为考察指标,对提取部位、提取方式等影响提取效率的因素分别进行单因素实验,在此基础上设计正交实验进行优化.流式细胞仪检测该工艺得到的提取物和人参炔醇体外对白血病细胞株HL-60细胞的作用.结果 确定以新鲜去汁后的胡萝卜渣为提取原料,优选工艺为1倍量石油醚超声提取3次,每次超声2h.流式细胞仪检测显示40 μg/mL提取物和5μmol/L人参炔醇作用12 h后细胞凋亡显著.结论 该工艺方法简便,合理可行,可显著提高胡萝卜中人参炔醇的提取率,得到的提取物体外对白血病细胞株HL-60细胞具有显著的增殖抑制和促凋亡作用.
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UPLC-MS/MS测定人源Caco-2细胞中人参炔醇的含量
目的 建立一种测定人源Caco-2细胞中人参炔醇的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法,分析人参炔醇在Caco-2细胞中的摄取量.方法 采用Acquity BEH C18柱(2.1 mm×100mm,1.7μm),流动相为水-甲醇溶液,梯度洗脱,流速为0.30 mL/min.质谱测定采用电喷雾离子源,正离子模式,多反应监测(MRM)定量离子对m/z 227→129和定性离子对m/z227→143,测定Caco-2细胞中人参炔醇的含量.结果 该方法具有良好的线性(r2＞ 0.99)、精密度(≤6.2％)和准确度(-6.7％～2.1％),人参炔醇低检出限为4 ng/mL.50μmol/L和100μmol/L的人参炔醇在37℃与细胞共同孵育2h,Caco-2细胞中人参炔醇的摄取量分别为( 20.7±1.8) nmoL/mg蛋白和(21.8±1.7) nmol/mg蛋白,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 该方法灵敏、可靠、专属性强,可用于人参炔醇在Caco-2细胞中的吸收及转运特性研究.
关键词： 人参炔醇 超高效液相色谱串联质谱 Caco-2 -
人参炔醇对大鼠脑片不同类型损伤的影响
目的评价人参炔醇对代谢障碍、兴奋性氨基酸、氧自由基三种脑片损伤模型的作用.方法通过大鼠皮质和海马脑片孵育技术,建立缺氧缺糖、谷氨酸和过氧化氢三类损伤模型,采用新鲜脑片TTC染色酶标仪比色法,定量考察人参炔醇对不同类损伤的保护作用.结果与对照组相比,缺氧缺糖、谷氨酸和过氧化氢均能明显降低皮质和海马脑片TTC染色OD490值,2~4μmol/L人参炔醇可显著减轻缺氧缺糖及过氧化氢所致的脑片组织损伤(P<0.01),对谷氨酸所致损伤无作用. 3μmol/L cAMP阻断剂RpcAMPS可显著减弱4μmol/L人参炔醇对缺氧缺糖和过氧化氢所致损伤的保护作用.结论人参炔醇能够保护大鼠脑片对缺氧缺糖和过氧化氢所致损伤作用,但对谷氨酸所致损伤无保护作用,其保护活性可能与提高神经细胞内cAMP含量有关.
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人参炔醇对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的抑制作用
目的 探讨人参炔醇(PNN)对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的抑制作用.方法 将人胰腺癌细胞PANC-1分为3个PNN浓度(1、9、27μmol/L)组和对照(C)组,MTT检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞周期变化,Western blot检测各组细胞Ki67蛋白表达.结果 PNN组细胞抑制率和G1期细胞比例均呈浓度依赖性增加,而Ki67蛋白表达量呈浓度依赖性递减(P＜0.01).结论 PNN可能通过抑制细胞分裂和Ki67表达对人胰腺癌细胞PANC-1增殖发挥抑制作用.
关键词： 人参炔醇 人胰腺癌细胞PANC-1 -
人参炔醇对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制
目的观察人参炔醇(panaxynol,PNN)对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMC)增殖的抑制作用及机制.方法由细胞计数、[3H] TdR参入试验确定细胞增殖率,采用分子探针Fura-3/AM及共聚焦显微镜检测胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i ),RT-PCR方法观察线粒体转录因子1( mtTF1) mRNA的表达.结果 PNN以浓度依赖方式抑制血清及PDGF-BB诱导的RASMC增殖和DNA合成;9 μmol·L-1 PNN预处理RASMC能抑制PDGF-BB引起的[Ca2+]i升高;PDGF-BB上调RASMC mtTF1 mRNA 表达,该作用可被3、9 μmol·L-1的PNN抑制.结论 PNN具有抗RASMC增殖作用,该作用与降低[Ca2+]i 和抑制mtTF1 mRNA表达有关.
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三七中人参炔醇的提取、分离和鉴定
目的:提取、分离和鉴定三七中人参炔醇.方法:采用超临界CO2萃取三七脂溶性成分,硅胶柱层析、制备薄层分离,并通过波谱技术(UV、IR、MS、1HNMR、13CNMR)分析鉴定人参炔醇化学结构.结果:从三七中分离并鉴定了人参炔醇成分,得率为0.077%.结论:应用超临界CO2萃取三七中脂溶性成分并分离其中的人参炔醇,得率较高.
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人参炔醇研究进展
研究表明,人参炔醇具有抗癌、抑菌、镇静、镇痛、降压、抗炎和神经细胞保护等药理作用,极具开发应用价值.本文综合国内外相关文献,综述了人参炔醇的药理研究进展.
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人参的药理作用及临床应用
人参为五加科植物人参的干燥根,始载于我国第一部本草专著<神农本草经>.中医认为人参味甘,有大补元气、生津止渴、调荣养卫的功能.现代化学研究表明,人参中含有13种以上的皂苷,其总皂苷称人参皂苷Rx,皂苷元为人参二醇、人参三醇及齐墩果酸等,皂苷是人参生物活性的物质基础.人参中还含有少量的挥发油、β-榄香烯和人参炔醇,其中含有的氨基酸主要有精氨酸、赖氨酸、甘氨酸等;人参中还含有人参酸、维生素B、维生素C及多种矿物质[1].近年来,人们又发现人参中含有机锗及一种能增强机体特异性免疫力的物质,在红参中还发现了一种特有的抗癌成份.现将人参的药理作用及其临床应用简述如下.
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高效液相色谱法测定人参炔醇在大鼠体内血药浓度及药动学研究
目的:绘制大鼠静脉注射人参炔醇(panaxynol)后血药浓度-时间曲线,揭示人参炔醇在大鼠体内动态变化过程,阐明其吸收、分布、代谢的药动学特征,提供重要的药动学参数.方法:大鼠静脉注射6,8,10 mg·kg-13组剂量的人参炔醇,给药后分时间段于眼静脉丛取血,高效液相色谱(HPLC)法测人参炔醇含量,绘制血药浓度-时间曲线,利用DAS 1.0软件对数据 进行拟合,求算药动学参数及房室模型分析.结果:人参炔醇血-药经时过程符合二室模型;3个剂量组之间的药动学参数无显著性差异,浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)分别为:(3.628±0.750),(5.492±0.959),(15.468±3.088) mg·h·L-1;总清除率(CL)分别为:(1.649±0.365),(1.459±0.267),(0.637±0.147) L·kg·h-1;表现分布容积(V)分别为:(13.104±1.217),(5.738±2.480),(3.355±0.810) L·kg-1;分布半衰期t1/2(α)分别为:(0.198±0.028),(0.193±0.015),(0.296±0.029)h;消除半衰期t1/2(β)分别为:(3.972±1.224),(3.168±1.235),(3.713±0.410)h.结论:panaxynol在大鼠体内呈线性动力学过程,分布消除极其迅速,给药剂量与药时曲线下面积呈正相关;二室模型拟合数据值与测定值之间差异较小,能较好地反应给药后药物浓度在体内的变化规律.
