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人参皂苷对紫外线诱导PC12细胞损伤及凋亡的保护作用
目的研究人参皂苷(GRS)对神经元分化细胞株(PC12)损伤及凋亡的影响.方法采用神经细胞培养和流式细胞仪技术,以不同强度紫外线诱导PC12细胞损伤作用作为细胞模型,观察紫外线对PC12细胞的影响,以及不同剂量GRS对PC12损伤的保护作用.结果 PC12照射后死亡方式之一是凋亡,吖啶橙和溴化锭(AO)染色荧光显微镜计数凋亡细胞百分率和DNA梯状带(DNA ladder)检测结果发现细胞凋亡有时间和剂量上的依赖性,GRS对紫外线诱导的细胞凋亡,也有一定的拮抗作用.结论 GRS能拮抗紫外线诱导的PC12细胞凋亡,对紫外线引起的细胞凋亡有一定的保护作用.
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13种巴基斯坦草药对PC12细胞保护作用的研究
目的:选择13种巴基斯坦传统草药,观察其对PC12细胞增殖的影响,并探讨其对H202、谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用,为寻找神经细胞保护作用新药提供实验依据.方法:体外培养PC12细胞,应用不同浓度的H202、GLU,分别建立神经细胞损伤模型,采用MTT法检测细胞存活率.结果:虎爪豆、诃子等能明显促进PC12细胞增殖作用(P＜0.05)；在H202 150μmol· L-1损伤模型中,药物组和模型组相比,罗勒、仙人掌、芦笋、灯油藤、诃子等能显著减轻H202的细胞损伤作用(P＜0.05)；在GLU 30mmol·L-1诱导PC12细胞损伤,与模型组比较,凤仙花、仙人掌、虎爪豆、诃子等均显示出损伤保护作用(P＜0.05).其中,诃子不仅能促进PC12细胞增殖,且在两种PC12细胞损伤模型中均具有较强的损伤保护作用.结论:具有促进PC12细胞增殖的药物为诃子、罗勒、虎爪豆；具有对抗H202损伤作用的药物有:诃子、凤仙花、仙人掌、芦笋、灯油藤、罗勒；具有减弱GLU诱导PC12细胞损伤的药物为:虎爪豆、诃子、凤仙花、仙人掌、芦笋、甘草；诃子在3种模型中均表现出较强的细胞损伤保护作用.本研究结果为神经退行性疾病药物的开发和选择提供了初步的实验依据.
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栝楼桂枝汤醇提物对氧化应激PC12细胞内NrF2和HO-1mRNA表达的影响
目的 观察栝楼桂枝汤乙醇提取物(EEGLGZD)对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)缺氧损伤时细胞内核因子相关因子2(NrF2)和血红素氧合酶1(HO-1)mRNA表达的影响,探讨中药治疗脑卒中后痉挛的作用机制.方法 将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组、模型组、EEGLGZD低剂量组(0.5 mg·mL-1)和EEGLGZD高剂量组(1 mg·mL-1).采用H2O2诱导PC12细胞建立缺氧损伤模型,倒置显微镜观察细胞形态变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度EEGLGZD干预后对细胞增殖的影响;RT-PCR测定药物作用后H2O2损伤PC12细胞NrF2和HO-1 mRNA的表达.结果 MTT检测显示,与模型组比较,EEGLGZD高剂量组和低剂量组的PC12细胞增殖率明显增加(P＜0.01);与EEGLGZD低剂量组比较,高剂量组细胞密度明显增加(P＜0.01).RT-PCR检测显示,与模型组比较,EEGLGZD高剂量和低剂量组的PC12细胞内NrF2和HO-1 mRNA的表达明显增加.结论 栝楼桂枝汤醇提物对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能与上调NrF2和HO-1 mRNA的表达有关.
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连翘酯苷对PC12细胞增殖及其细胞损伤模型的保护作用
目的:研究连翘酯苷对PC12细胞增殖及其损伤模型的影响.方法:应用谷氨酸(20 mmol· L-1)、低糖低血清培养基及β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35,10 μmol·L-1)建立谷氨酸、低糖低血清及Aβ25～35致PC12细胞损伤模型,观察连翘酯苷低、中、高浓度(0.1,1,5μmol·L-1)剂量对上述模型细胞存活率的影响,同时观察连翘酯苷低、中剂量对Aβ25-35致PC12细胞凋亡的影响.结果:连翘酯苷可提高PC12细胞存活率,提高谷氨酸、低糖低血清及Aβ25～35致PC12细胞损伤模型的存活率,与模型组比较,有显著性差异(P＜0.05),并呈现一定量效关系.连翘酯苷(0.1,1μmol·L-1)可降低Aβ25 ～ 35引起PC12细胞凋亡率(P ＜0.05,P＜0.01).结论:连翘酯苷在体外实验具有神经细胞保护作用.
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醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞谷氨酸损伤的保护作用
目的:探讨醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞谷氨酸(GLU)损伤的影响.方法:采用血清药理学方法,体外培养PC12细胞,用GLU形成损伤,观察PC12细胞形态学、MTT法细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化.结果:醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞的形态改变具有明显的保护作用,可增强细胞活力,降低LDH活性.结论:醒脑启智胶囊药物血清能明显减轻PC12细胞的GLU损伤,并呈现一定的剂量依赖关系.
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醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞NO损伤的保护作用
目的:探讨醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞一氧化氮(NO)损伤的影响.方法:采用血清药理学方法,体外培养PC12细胞,用SNP产生NO损伤,观察PC12细胞形态学、MTT法细胞活力、LDH活性的变化.结果:醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞的形态改变具有明显的保护作用,可增强细胞活力,降低LDH活性.结论:醒脑启智胶囊药物血清能明显减轻PC12细胞的NO损伤,并呈现一定的剂量依赖关系.
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6种开心散类方对不同物质损伤神经细胞的保护作用
目的:研究组方相同,比例不同的6种开心散类方对模拟抑郁、阿尔茨海默病和帕金森病细胞模型的保护作用.方法:以0.4 mmol· L-1皮质酮损伤SH-SY5Y细胞,20 μmol·L-1β-淀粉样肽(Aβ25-35)损伤PC12细胞,250 μmol·L-1 1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)损伤SH-SY5Y细胞,建立体外模拟抑郁、阿尔茨海默病及帕金森模型,采用MTT法检测细胞的存活率及LDH法检测细胞损伤程度.结果:100,500 mg·L-1《备急千金要方》之定志小丸可显著提高皮质酮损伤的SH-SY5Y细胞的存活率并明显减少LDH的释放浓度；各开心散类方均有明显增加Aβ25-35损伤的PC12细胞的存活率、减少LDH的释放浓度的作用；其中以10,100,500 mg·L-1《备急千金要方》之开心散的作用为显著；500 mg·L-1《古今录验》之茯神丸可显著提高MPP+损伤的SH-SY5Y细胞的存活率、减少LDH的释放.结论:定志小丸对皮质酮损伤的神经细胞有明显的保护作用,有潜在抗抑郁作用；6种开心散类方对Aβ25-35损伤的PC12细胞均有保护作用,有潜在抗阿尔茨海默病作用,《备急千金要方》之开心散作用为显著；《古今录验》之茯神丸高剂量组对MPP+损伤的SH-SY5Y细胞有一定的保护作用.
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多巴胺抑制Erastin诱导PC12细胞系铁死亡
目的 探讨多巴胺在不同诱导剂导致的嗜铬细胞瘤PC12细胞死亡中的作用.方法 应用RT-qPCR鉴定PC12的肿瘤特异性基因和神经相关基因的mRNA表达;通过细胞存活率评价生理浓度范围内(0～100μmol/L)不同浓度(0、6.25、12.5、25、50和100μmol/L)的多巴胺对PC12存活的影响,以及对药物诱导的铁死亡、凋亡和坏死的影响;流式细胞仪检测并分析PC12细胞铁死亡的发生和多巴胺保护PC12过程中PI、Annexin V和细胞周期的情况.结果 PC12表达肿瘤特异性基因和部分神经类基因.多巴胺在浓度25、50和100μmol/L时对PC12细胞有杀伤效果.生理浓度多巴胺特异性保护Erastin诱导的PC12细胞铁死亡.多巴胺能有效的降低Erastin造成的PI、Annexin V双阳性细胞上升和S期到G2/M期阻滞.结论 生理浓度多巴胺对PC12有细胞毒性,并可以保护PC12抑制Erastin诱导的铁死亡.
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Tropic1808在PC12细胞中的表达
目的构建稳定表达tropic1808基因的PC12细胞株,并通过观察稳定株中高分子量神经丝蛋白(NFH)的表达以初步观察该基因的作用. 方法构建重组真核表达载体pcDNA-HA-tropic 1808,转染PC12细胞,经G418筛选、Western blot鉴定.采用RT-PCR,实时PCR,Westem blot和细胞组织化学方法观察tropic1808稳定株中NFH的表达.结果Western blot检测表明,tropic1808基因稳定表达,RT-PCR,实时PCR,Western blot和细胞组织化学方法均观察到NF-H在tropic1808稳定株中的表达高于空载体对照.结论Tropic1808基因可以在PC12稳定表达且NF-H在tropic1808稳定株中表达上升.
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二苯乙烯苷对过氧化氢诱导的PC12细胞损伤的保护作用
目的 探讨二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)所致PC12细胞损伤的保护作用.方法 培养PC12细胞给予H2O2(100 μmol/L)诱导细胞凋亡,实验分为空白对照组、H2O2损伤组、高剂量组(TSG 120 μg/L+H2O2)、中剂量组(TSG 60 μg/L+H2O2)和低剂量组(TSG 30 μg/L+H2O2).TSG处理2 h后,加入H2O2损伤细胞,4 h后取细胞测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,采用硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛(MDA),黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,噻唑兰(MTT)法检测细胞活力,免疫组织化学方法检测bcl-2的蛋白表达.结果 TSG能提高细胞活力,降低LDH漏出和细胞凋亡率(P<0.05).0.1～1 μmol/L TSG处理后bcl-2的蛋白表达降低(P<0.05).结论 TSG能减少H2O2对PC12细胞的损伤.
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大剂量γ射线照射后PC12细胞死亡方式的研究
目的 研究受大剂量γ射线作用后,大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)的死亡方式,寻找神经细胞辐射损伤的体外模型.方法 PC12细胞分为0、8、16和32 Gy组,经60 Co γ射线照射后,PI单染流式细胞术法观察细胞增殖周期改变,Annexin-V-FITC及PI双染法检测细胞凋亡的发生,光镜和电镜技术观察照射后细胞分化与存活的形态学变化.结果 大剂量γ射线照射后,随照射剂量的加大,发生死亡的细胞数有所增加,但发生凋亡的PC12细胞数目很少,可以忽略不计;细胞主要是在肿胀的基础上发生死亡的.电镜显示,细胞器明显肿胀扩张,粗面内质网高度扩张,线粒体肿胀、空化,核染色质浓缩成块状,散在于核膜下及核仁周围,核膜间隙增宽,与胀亡性坏死的特征相类似.结论 大剂量γ射线照射后,PC12细胞主要是在肿胀的基础上发生死亡的.该细胞模型适于被用来研究辐射致神经细胞坏死相关病理生理过程及其内在机制等问题.
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虫草素对鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡的保护作用
目的:探讨虫草素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡是否具有保护作用.方法:以1μmol·L-1鱼藤酮制备帕金森病(Parkinson's disease,PD)体外细胞模型,用MTT法测定细胞存活率;比色法测定LDH释放率;Hoechst 33258核染色法观察不同时间细胞凋亡形态;DNA Ladder检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡比率.结果:①不同浓度鱼藤酮作用不同时间均能明显降低PC12细胞存活率(P ＜0.001),1tμmol·L-1时效果为显著.②低浓度虫草素(10-6～10-2μm0l·L-1)除24 h促进正常PC12细胞增殖外其余均无明显影响;但1 ～ 102μmol·L-1虫草素能够抑制PC12细胞增殖(P ＜0.05,0.01,0.001).③将0.4×10-6,2.0×10-6,8.0×10-6μmol·L-1虫草素分别与鱼藤酮同时给药,作用24,48和72 h后均能使细胞存活率显著上升(P＜0.05);LDH释放率显著降低(P＜0.05);Hoechst 33258核染色中细胞核出现致密蓝色亮点的细胞明显减少;虫草素干预48 h后,DNA片段化现象减少或消失,经流式细胞仪检测,细胞总凋亡率明显降低(P＜0.001).结论:虫草素能抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡,具有潜在的保护作用.
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丙泊酚对N-甲基-D-天冬氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用
目的探讨静脉麻醉药丙泊酚(PPF)脑保护作用的可能机制.方法乳酸脱氢酶(LDH)法及MTT比色法判断细胞损伤程度及细胞存活率,Fura-2/AM荧光标记法测定细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化,分光光度法测定细胞一氧化氮合酶(NOS)活性.结果 N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA) 300 μmol*L-1处理4 h可明显导致PC12细胞的损伤,表现为LDH释放量明显增加,吸光度值A570 nm明显降低,细胞存活率降低,同时[Ca2+]i和NOS活性则明显增加.PPF 6.25, 25, 100, 400 μmol*L-1与NMDA同时处理PC12细胞则使LDH释放量显著降低,细胞存活率增加.PPF 12.5和125 μmol*L-1可显著降低NMDA诱导的[Ca2+]i水平及NOS活性的提高.结论 PPF对NMDA所致的PC12细胞损伤有明显的保护作用,其机制可能与其抑制NMDA受体的功能,降低[Ca2+]i,减弱Ca2+超载,并降低NMDA诱导的NOS活性增加有关.提示PPF可能是通过抑制NMDA受体-Ca2+-NOS通路的功能而产生细胞保护效应.
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尼古丁对6-羟多巴胺诱导PC12细胞凋亡的拮抗作用
目的探讨尼古丁对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导PC12细胞凋亡的拮抗作用及其与烟碱受体的关系.方法用6-OHDA诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12细胞凋亡的细胞模型;用MTT、二乙酸荧光素活细胞染色、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳等方法检测PC12细胞的凋亡;用尼古丁及N型和M型受体拮抗剂预处理,观察尼古丁的拮抗作用及其与受体的关系.结果尼古丁可明显拮抗6-OHDA(50 μmol·L-1)诱导PC12细胞凋亡,呈钟型浓度效应关系,10 μmol·L-1尼古丁的拮抗作用强.用10 μmol·L-1尼古丁预处理PC12细胞2 h可明显降低6-OHDA诱导的细胞凋亡.用10 μmol·L-1六甲溴胺阻断烟碱受体,可取消尼古丁对6-OHDA诱导细胞凋亡的拮抗作用;但用阿托品阻断M型胆碱受体,对尼古丁的拮抗作用则无明显影响.结论尼古丁对6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡有明显的拮抗作用,这种作用由烟碱受体所介导.
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微矩阵基因芯片筛选抗抑郁剂地昔帕明相关基因的研究
目的研究抗抑郁剂相关基因,探讨其可能作用机制.方法与结果以高浓度皮质酮(Cort)10 μmol*L-1或Cort与三环类经典抗抑郁剂地昔帕明(DIM)5 μmol*L-1共同处理PC12细胞3 d分别作为对照组和实验组,按Trizol一步法提取细胞总RNA并纯化mRNA,将等量的对照组与实验组mRNA以逆转录法分别标记荧光素cy3和cy5,合成cDNA探针并等量混合,与小鼠2048点微矩阵基因芯片杂交,扫描荧光信号图像并分析比较二组差异表达基因,发现DIM与Cort共孵PC12细胞3 d可以诱导259个基因表达水平发生改变.其中163个基因表达降低,如葡萄糖调节蛋白78 ku、葡萄糖激酶(GA)、细胞骨架蛋白、转化性生长因子β受体结合蛋白、细胞色素C氧化酶、锂盐敏感性内消旋肌醇一磷酸酯酶等;有96个基因表达水平升高,如神经元生长分化因子-9(GDF-9)、锌指蛋白216、细胞色素P450、睾丸特异基因-1等.随机选取二个差异表达基因GA和GDF-9,以细胞原位杂交方法验证,取得与基因芯片评价一致的结果.结论抗抑郁剂DIM作用可能与能量代谢、细胞骨架、营养因子、酶等多层次、多水平的基因表达改变有关.本研究利用基因芯片技术对抗抑郁剂相关基因进行了初步探索,为深入研究抗抑郁剂作用机制和药物筛选芯片的研发提供了线索与依据.
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蒿甲醚对神经元细胞线粒体形态和功能的影响
目的采用原代培养的神经元细胞探讨蒿甲醚的神经毒性.方法 MTT比色法和台盼蓝计数法测定双氢青蒿素和蒿甲醚对嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)活性的影响;电镜下观察蒿甲醚对原代培养的大鼠脑皮层神经元细胞和PC12细胞线粒体形态的影响;分光光度法测定蒿甲醚对大鼠脑皮层神经元细胞线粒体呼吸链复合酶Ⅰ和Ⅳ活性的影响;硫代巴比妥酸法测定蒿甲醚对大鼠脑皮层神经元细胞线粒体脂质过氧化产物丙二醛水平的影响.结果双氢青蒿素(≥62.5 μmol*L-1)和蒿甲醚(≥250 μmol*L-1)减低PC12细胞的存活率;电镜观察发现蒿甲醚主要损伤神经元细胞和PC12细胞的线粒体,引起线粒体肿胀,嵴断裂、减少、消失;蒿甲醚能够抑制神经元细胞线粒体呼吸链复合酶Ⅰ和Ⅳ的活性,使其氧化NADH和还原型细胞色素C的能力下降,有明显的时效和量效关系;蒿甲醚对神经元细胞线粒体丙二醛水平无明显影响.结论蒿甲醚损伤线粒体从而影响其功能是产生神经毒性的机制之一.
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丁螺环酮对皮质酮所致PC12细胞损伤的保护作用
提取大鼠大脑皮层突触膜并与丁螺环酮6.25～4000 μmol*L-1直接孵育,放射免疫法测定cAMP含量,发现丁螺环酮可浓度依赖地提高cAMP产生量,说明腺苷酸环化酶(AC)活性升高. 神经生长因子2, 10 kU*L-1,三环类抗抑郁剂地昔帕明2.5, 5 μmol*L-1或丁螺环酮5,10,20 μmol*L-1分别与皮质酮0.2 mmol*L-1共孵PC12细胞48 h,均可防止皮质酮所致的PC12神经细胞损伤, 使存活细胞增多. 结果提示丁螺环酮激活信号转导系统AC-cAMP通路, 从而对损伤神经元产生保护作用,这可能与其抗抑郁, 抗焦虑作用有关.
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人参皂苷Rg1对抗多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用
通过测定细胞的凋亡率,内源性NO的水平和iNOS mRNA的表达及半胱天冬酶3的活性, 探讨人参皂苷Rg1对抗多巴胺对PC12细胞凋亡诱导作用的可能机理. 结果表明多巴胺(0.15～0.60 mmol*L-1)可诱导PC12细胞凋亡, 预先经过10 μmol*L-1Rg1处理后, PC12细胞的凋亡率显著下降(P<0.001), 同时NO2-水平和iNOS mRNA表达水平及半胱天冬酶3活力较单纯多巴胺处理组明显降低(P<0.001). 结果提示, Rg1减少细胞内源性NO的生成及抑制半胱天冬酶3的活化可能是Rg1对抗多巴胺诱导PC12细胞凋亡的重要机理.
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人参炔醇对神经细胞的营养和保护作用
目的探讨人参炔醇对神经细胞的营养及保护作用.方法通过PC12细胞、新生鼠脊髓背根神经节研究人参炔醇的神经营养和保护作用.结果人参炔醇可时间、剂量依赖性地促进PC12细胞轴索生长,促进细胞分化标志物MAP-2B表达;8μmol·L-1的人参炔醇可与5μg·L-1的神经生长因子协同促进大鼠脊髓背根神经轴索的延长;对叠氮钠致PC12细胞损伤有剂量依赖性保护作用.结论人参炔醇对PC12细胞具有类似神经生长因子的神经营养和神经保护作用.
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积雪草苷对阿尔茨海默病的治疗作用
目的 探讨积雪草苷对小鼠学习记忆的增强作用和对PC12细胞的神经保护作用.方法 2012年8月～ 2013年1月期间建立东莨菪碱诱导的学习记忆紊乱的小鼠模型和Aβ25-35诱导的PC12细胞调亡的AD细胞模型,分别用水迷宫法测定小鼠的学习记忆功能和二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)分析法研究细胞活性的改变.结果 小鼠腹腔注射东莨菪碱4mg/kg可造成明显的记忆障碍(P＜0.01),给予积雪草苷(50～200mg/kg)对记忆有明显改善作用,能显著减少错误次数、缩短到达平台时间(P＜0.01);积雪草苷(100μmol/L)明显减少A β诱导PC12的细胞凋亡(P＜0.05).结论 积雪草苷对小鼠学习记忆的增强作用和对PC12细胞有神经保护作用
