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天智颗粒对叠氮钠诱导脑损伤大鼠纹状体细胞外乙酰胆碱和儿茶酚胺含量的影响
目的:观察天智颗粒(TZ)对脑线粒体损伤大鼠纹状体细胞外乙酰胆碱(ACh)和儿茶酚胺类递质的影响,探讨促智中药TZ的神经保护作用机理.方法:应用微透析技术和高效液相色谱相结合,建立清醒自由活动大鼠脑内灌流叠氮钠(NaN3)造成局部脑区线粒体能量代谢障碍的急性模型,动态监测TZ对叠氮钠灌流大鼠脑细胞外ACh、胆碱(Ch)和儿茶酚胺类递质水平的影响.结果:NaN3灌流后,大鼠纹状体细胞外ACh、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)水平均显著下降(P＜0.05～0.01),Ch水平则明显升高(P＜0.01);停止NaN3灌流后,各递质水平逐渐恢复.TZ可延缓叠氮钠灌流大鼠脑内ACh水平的降低;促进Ch水平的恢复;与都可喜合用升高叠氮钠灌流大鼠ACh水平的作用显著优于单用TZ或都可喜.TZ还有延缓儿茶酚胺类递质水平降低和促进其恢复的趋势,与都可喜合用可促进DOPAC水平的恢复,对DA的代谢异常具有积极的调节作用.结论:TZ对线粒体损伤,能量代谢障碍引起的胆碱能神经系统的损伤具有保护作用,并与都可喜有协同作用;对肾上腺素能、多巴胺能神经系统的损伤,TZ也有保护的趋势.
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制首乌对叠氮钠脑内灌流大鼠纹状体细胞外液乙酰胆碱和胆碱水平的影响
目的:探讨制首乌对叠氮钠脑内灌流大鼠脑保护作用的机制.方法:大鼠分成6组:对照组、模型组、制首乌组、都可喜组和制首乌+都可喜组.应用脑内微透析技术,高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学检测器动态监测清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液乙酰胆碱(ACh)和胆碱(Ch)水平的变化.结果:在动态观察期间,对照组大鼠纹状体细胞外液ACh和Ch水平较稳定.模型组的ACh水平明显低于对照组;3个给药组的ACh水平则分别在一些时间点显著高于模型组.模型组的Ch水平则明显高于对照组;3个给药组的Ch水平在一些时间点显著低于模型组.制首乌的作用与阳性药都可喜相近.结论:制首乌通过升高ACh水平、改善Ch摄取,提高受损的胆碱能神经功能,来达到脑保护作用.为其作为脑保护剂用于治疗老年人常见的神经退行性疾病所致的痴呆提供了实验依据.
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脑内同步灌流NaN3致大鼠mPFC和海马细胞外液中胆碱类递质含量变化
目的:观察脑内同步灌流特异性呼吸链复合体Ⅳ抑制剂叠氮钠(sodium azide,NaN3)对大鼠腹内侧前额叶皮质(mPFC)和海马细胞外液中乙酰胆碱(ACh)和胆碱(Ch)含量的影响,建立线粒体损伤的AD急性模型.方法:应用脑双位点双通道同步微透析采样技术,对清醒自由活动正常大鼠mPFC和海马同步灌流含NaN3(50 μmol·L-1)和新斯的明(2μmol·L-1)的改良Ringer氏液120 min,并同步连续收集两脑区的透析液.采用高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学法动态监测ACh和Ch含量.结果:正常大鼠的mPFC细胞外液中ACh和Ch含量高于海马区,NaN3在灌流期间能明显降低mPFC/海马细胞外液中ACh,但显著升高Ch,并持续抑制mPFC/海马区ACh和Ch含量恢复.结论:大鼠脑内mPFC和海马同步灌流NaN3使胆碱能神经投射区域功能受损,可造成ACh和Ch代谢紊乱的AD急性模型,可用于病理机制和药理学研究.
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淫羊藿苷对线粒体损伤模型大鼠脑内β-淀粉样蛋白和神经营养因子的影响
该研究主要是观察中药淫羊藿苷(ICA)对线粒体损伤模型大鼠脑内β-淀粉样蛋白(Aβ)含量和神经营养因子表达的影响.SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ICA低、高剂量组(12,36 mg· kg-1).各组大鼠皮下埋植Alzet微泵,假手术组给予生理盐水,其余各组给予线粒体呼吸链复合体Ⅳ抑制剂叠氮钠(0.Smg·kg-1 ·h-1),共28 d,建立大鼠线粒体损伤模型.生化法测定大鼠海马线粒体复合体Ⅳ(即细胞色素C氧化酶)活性；EHSA法测定大鼠脑内Aβ含量；Westem blot法和免疫组织化学法测定大鼠脑内神经营养因子及其受体的表达.结果显示叠氮钠微泵灌注可引起模型大鼠脑内线粒体细胞色素C氧化酶(COX)活性明显下降,Aβ含量升高,神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB的表达减少.ICA灌胃给药明显改善模型大鼠的上述异常.结果表踢ICA能够增强叠氮钠模型大鼠脑内线粒体活性,抑制Aβ产生,增强神经营养因子表达,提示ICA具有良好的治疗阿尔茨海默病的应用前景.
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参乌胶囊对微泵恒速灌注叠氮钠致痴呆大鼠行为学及胆碱能系统的影响
该研究的目的是利用线粒体细胞色素C氧化酶抑制剂叠氮钠致痴呆动物模型,观察参乌胶囊对模型大鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制.应用SD大鼠皮下埋植Alzet微泵,连续恒速给予叠氮钠(1 mg· kg-1·h-1)共30 d造模.手术后24 h开始给药,参乌胶囊低、中、高剂量组(干粉0.45,0.9,1.8g· kg-1)每日灌胃给药1次.应用水迷宫、避暗试验检测动物学习记忆能力.放射免疫法测定大脑皮层和海马胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性,羟胺比色法检测乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,放射配基结合试验测定M-胆碱能受体结合力.结果显示,微泵恒速灌注叠氮钠导致模型大鼠水迷宫游出时间及距离延长,避暗潜伏期缩短、错误次数增加.模型大鼠大脑皮层和海马ChAT活性降低,海马区AChE活性升高,皮层和海马M-胆碱能受体结合力明显下降.参乌胶囊灌胃给药能够明显减少模型大鼠水迷宫游出时间及距离,延长避暗潜伏期、减少错误次数；并且降低模型大鼠脑内AChE活性,升高ChAT活性及M-胆碱能受体结合力.实验结果表明,参乌胶囊明显改善线粒体缺陷致痴呆模型大鼠学习记忆能力,其药理作用机制与改善脑内胆碱能系统功能相关.提示参乌胶囊可干预线粒体缺陷这一AD早期的病理改变,进而拮抗其后出现的AD特征性病理变化,对于AD的治疗具有重要的应用价值.
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L-茶氨酸减轻叠氮钠诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞线粒体损伤
目的 研究L-茶氨酸对叠氮钠(NaN3)诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体损伤的影响其机制.方法 将不同浓度的L-茶氨酸及NaN3与SH-SY5Y细胞系共同孵育,用MTT法测定细胞存活力,以JC-1测定法和激光共聚焦显微镜来观察线粒体膜电位,Western blot法检测细胞内caspase-3、caspase-9和细胞色素c蛋白表达水平.结果 1)随着NaN3浓度的增高,细胞活性逐步降低,提前2h给予茶氨酸(0.25、0.50和1.00 mmol/L)能明显降低NaN3 (0.25 mmol/L)孵育24h对细胞的毒性并逆转线粒体跨膜电位的下降(P＜0.05)；2)茶氨酸在0.25～1.00 mmol/L浓度范围内能显著逆转NaN3诱导的SH-SY5Y细胞内caspase-3、caspase-9和细胞色素c蛋白表达水平的升高(P＜0.05).结论 茶氨酸可以通过稳定SH-SY5Y细胞线粒体膜电位,减轻细胞线粒体的损伤.
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微泵恒速灌注叠氮钠致痴呆大鼠脑内胆碱及单胺类神经递质含量改变
目的观察线粒体呼吸链复合体IV(线粒体细胞色素C氧化酶)抑制剂叠氮钠对大鼠脑内胆碱及单胺类神经递质的影响,探讨线粒体缺陷导致学习记忆障碍的可能机制.方法 SD大鼠皮下埋植Alzet微泵,连续恒速给予叠氮钠共30天,分为1mg/kg/h和2mg/kg/h两个剂量组.取脑,分区测定皮层和海马胆碱乙酰基转移酶(放射化学法)及乙酰胆碱酯酶(羟胺比色法)的活性;高效液相色谱法测定纹状体内单胺类神经递质及其代谢产物含量.结果模型大鼠皮层和海马胆碱乙酰基转移酶活性降低,海马区乙酰胆碱酯酶活性升高,皮层和海马胆碱乙酰基转移酶与乙酰胆碱酯酶活性的比值明显降低.纹状体内单胺类神经递质及其代谢产物含量各组间无明显差异.结论线粒体细胞色素C氧化酶活性的抑制可以导致动物脑内胆碱乙酰基转移酶及乙酰胆碱酯酶活性的异常,是模型大鼠学习记忆能力障碍的基础.微泵恒速灌注叠氮钠仅损伤大鼠脑内胆碱能神经系统,对脑内单胺类神经递质无影响,可作为拟痴呆模型,应用于发病机理及药理学等方面的研究.
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红景天苷减轻叠氮钠诱导线粒体损伤的作用
目的观察红景天苷对呼吸链复合体IV抑制剂叠氮钠(NaN3)诱导的线粒体损伤的保护作用,探讨其在防治神经退行性疾病中可能的作用机制.方法将叠氮钠与人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y共同孵育,MTT法测定细胞存活力,JC-1法检测线粒体膜电位变化.刃天青法检测大鼠脑线粒体功能.结果 64 mmol·L-1叠氮钠与SH-SY5Y共同孵育4 h后,细胞存活率明显下降,线粒体膜电位下降.预先加入红景天苷能明显提高细胞存活率,维持线粒体膜电位.650 μmol·L-1叠氮钠能使大鼠脑线粒体功能下降,预先加入红景天苷能明显改善线粒体功能.结论红景天苷能够减轻叠氮钠(NaN3)诱导的线粒体损伤,能够改善线粒体功能,这可能是其抗老年痴呆的机制之一.
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超低分子肝素对原代培养大鼠大脑皮质神经元化学诱导损伤的保护作用
目的 探讨超低分子肝素(ULMWH)对不同化学诱导损伤大脑皮质神经元的保护作用.方法 谷氨酸、叠氮钠、KCl和咖啡因诱导损伤原代培养的大鼠大脑皮质神经元,观察神经元存活率、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量及细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i).结果 ULMWH(0.01～1.0 mg·L-1)预处理24 h可显著提高谷氨酸损伤神经元的存活率,降低细胞LDH的漏出量和[Ca2+]i,高浓度(1.0 mg·L-1)时对叠氮钠引起的神经元损伤也有一定的保护作用,但对咖啡因和KCl所致的神经元损伤无影响.结论 ULMWH对谷氨酸和叠氮钠所致大鼠大脑皮质神经元损伤有一定的保护作用,可能与其抑制[Ca2+]i升高有关;但不能对抗KCl和咖啡因所致的皮质神经元损伤.
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叠氮钠造成脑线粒体损伤模型的研究现状
现已证明,线粒体缺陷与阿尔茨海默病(AD)的发生密切相关,其中AD患者细胞色素C氧化酶(COX)活性的降低明显且特异.叠氮钠(NaN3),一种特异性COX抑制剂,可以损伤线粒体活性,建立具有部分类似AD病理改变的动物和细胞模型.它可以导致动物学习记忆功能障碍,其可能的机制包括细胞骨架结构破坏,Aβ沉积,氧化损伤,离子内稳态破坏,细胞膜损伤以及神经递质异常.NaN3造成的脑线粒体损伤模型为AD机理和治疗药物的研究提供了新的途径.
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建立脑内灌流叠氮钠所致的大鼠纹状体细胞外液乙酰胆碱水平下降的模型
目的建立可用于筛选防治老年退行性病变和其他脑细胞损伤所致智能减退药物的模型.方法应用脑内微透析技术,在清醒自由活动大鼠纹状体内灌流含叠氮钠(NaN3,30 mmol·L-1)和新斯的明(10μmol·L-1)的林格液,连续收集透析液.用高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学检测器检测乙酰胆碱(ACh)和胆碱水平.结果脑内灌流NaN390min后该脑区细胞外液ACh水平较正常组持续下降(P＜0.05～0.01).低值在停止NaN3灌流后60min时出现,为相同时间点对照组水平的10.0%;此后有所恢复,但在恢复期180 min内未能达到对照组水平.阳性药甲磺酸阿米三嗪(10 mg·kg-1·d-1,ig,灌流前连续给药14 d)可在停止NaN3灌流后30和60min时明显减缓ACh水平的下降(均P＜0.05).结论大鼠脑内灌流NaN3使局部脑区胆碱能神经功能损伤,可造成ACh水平持续下降的急性模型.
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叠氮钠中毒及解救1例
1临床资料患者,女性25岁,主因心情抑郁,口服"叠氮钠"(NaN3-除草剂)1g(25mg/kg)后出现恶心,呕吐1小时在当地医院就诊.经洗胃、注射硫代硫酸钠及补液等措施急救好转.24小时后仍感胸闷、心悸来我院就诊.入院查体:37.2℃,P:105次/分,BP:110/75mmHg.心电图示:窦性心动过速,STⅡⅢ avf.V1-4抬高0.15mv.
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人参炔醇对神经细胞的营养和保护作用
目的探讨人参炔醇对神经细胞的营养及保护作用.方法通过PC12细胞、新生鼠脊髓背根神经节研究人参炔醇的神经营养和保护作用.结果人参炔醇可时间、剂量依赖性地促进PC12细胞轴索生长,促进细胞分化标志物MAP-2B表达;8μmol·L-1的人参炔醇可与5μg·L-1的神经生长因子协同促进大鼠脊髓背根神经轴索的延长;对叠氮钠致PC12细胞损伤有剂量依赖性保护作用.结论人参炔醇对PC12细胞具有类似神经生长因子的神经营养和神经保护作用.
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茯苓水提液对叠氮钠致原代培养的新生大鼠海马神经细胞线粒体损伤的影响
目的从生化和形态学的角度观察茯苓水提液对叠氮钠致原代培养的新生大鼠海马神经细胞线粒体损伤的影响.方法新生大鼠海马神经细胞原代培养至第11天,吸弃培养液,加入MTT(0.4mg·mL-1)温育4 h,用自动酶标仪在550nm处检测被神经细胞线粒体酶还原的MTT的量,以此作为评价细胞活力的指标.通过间接免疫荧光(一抗为鼠抗α-tubulin抗体)的方法,利用激光扫描共聚焦显微镜观察来评价神经细胞骨架改变.结果叠氮钠与培养细胞孵育能剂量依赖性地损伤细胞,64mmol·L-1孵育4 h时,细胞的线粒体酶还原MTT的能力为对照组的(60.73±5.13)%,微管结构模糊、紊乱.茯苓水提液(10～20mg·mL-1)与细胞预孵育24 h,能明显抵抗叠氮钠引起的神经细胞线粒体还原MTT的能力下降,微管结构紊乱.结论茯苓对维持神经细胞线粒体的功能及微管结构方面有重要作用,对防治某些神经退行性疾病如老年性痴呆、血管性痴呆及帕金森氏病等,可能具有一定的应用前景.
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叠氮钠对大鼠学习记忆及海马和额叶皮层内Aβ的影响
目的:观察大鼠长期皮下注射叠氮钠后的学习记忆、中枢神经系统β-淀粉样蛋白含量的改变.方法:采用Morris水迷宫、放射免疫和透射电镜的方法.结果:大鼠出现明显的空间记忆功能障碍,海马和额叶大脑皮层内Aβ含量升高.结论:长期皮下注射叠氮钠可以制备AD模型,并导致中枢Aβ的升高.
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第20例--中毒与药物过量临床表现及救治(Internet网上病例讨论)
随着各种化合物生产的种类及使用量的增加,各种意外事故、职业暴露、误服误用、自杀等导致中毒及因中毒而死亡的人数明显增加.化学毒物种类繁多,临床用药的情况复杂,中毒和药物过量的临床表现也各不相同,病情多急骤凶险.因此,对急性中毒和药物过量的诊断和救治在急诊临床医学工作中具有十分重要的地位.先介绍1例较为少见的叠氮钠中毒病例,请对此类中毒进行讨论.
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叠氮钠对心肌细胞活力影响的研究
目的:观察叠氮钠对原代培养大鼠心肌细胞活力的影响.方法:研究不同浓度叠氮钠在不同时间内对原代培养的大鼠心肌细胞活力的影响.结果:叠氮钠对心肌细胞活力的抑制作用随浓度增加以及作用时间延长明显增加.1 mmol/L叠氮钠孵育细胞3 h,细胞发生可逆的早期凋亡,大于6 h,细胞发生不可逆的死亡.结论:低剂量叠氮钠可诱导原代培养的大鼠心肌细胞发生可逆的早期凋亡.
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海马内注射叠氮钠对大鼠行为学及类P3的影响
目的观察在大鼠海马内微量注射叠氮钠(NaN3)对其行为学及类事件相关电位(类P3)的影响.方法 SD大鼠随机分为叠氮钠海马损毁组及生理盐水对照组.前者分别在双侧海马CAI区微量注射质量分数5%NaN3 1 μl,每天1次,连续3 d.后1次注射后第3 d开始进行Morris水迷宫行为测定,之后检测类P3;后进行脑组织形态学检查.结果与对照组比较,叠氮钠海马损毁组大鼠海马神经元内线粒体数量明显减少,并伴随线粒体固缩、出现空泡等现象;而水迷宫测试平均逃避潜伏期和认知电位类P3潜伏期显著延长(P<0.05);水迷宫测试错误次数则明显增多(P<0.05).结论海马内分次微量注射NaN3可建立起一种相对快速、简便的能量代谢障碍性大鼠模型,且行为学及类P3的变化表明其有痴呆表现.
关键词： 叠氮钠 Alzheimer病 Morris水迷宫:类P3 -
海风藤对叠氮钠诱导的PC12细胞损伤的保护作用
目的：探讨海风藤水提物对叠氮钠(NaN3)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法：将叠氮钠(50mmol·L-1)与PC12细胞共孵育，采用MTT法测定细胞存活力；采用比色法测定细胞乳酸脱氢酶漏出率；采用Fura 2-AM双波长荧光扫描法测定细胞内钙离子内流的浓度。结果：50mmol·L-1叠氮钠与PC12细胞共孵育8h后，细胞存活率明显下降；0.1mg·mL-1海风藤水提物能显著性对抗叠氮钠致神经细胞存活率下降，能显著性降低细胞LDH漏出率，能显著性降低叠氮钠引起的钙离子内流。结论：海风藤对叠氮钠诱导的细胞损伤具有显著性保护作用，可能具有治疗阿尔茨海默病的作用。
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叠氮钠对培养神经细胞微管结构和细胞存活率的影响
观察线粒体呼吸链复合体Ⅳ(即细胞色素C氧化酶)抑制剂叠氮钠(NaN3)对神经细胞微管结构和细胞存活率的影响,探讨线粒体缺陷在阿尔茨海默病发病中的作用.将叠氮钠与传代培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞共同孵育,用微测量法测定线粒体复合体Ⅳ活性,MTT法测定细胞存活率,激光共聚焦显微镜和图像分析系统观察细胞微管结构.叠氮钠16～64 mmol/L与培养的神经细胞共孵育1 h,剂量依赖性地导致细胞线粒体细胞色素C氧化酶活性下降;叠氮钠(16～128 mmol/L)作用1～8 h,细胞存活率下降,呈时间及剂量依赖性;叠氮钠16,64 mmol/L作用4 h,使细胞微管结构损伤,尤以突起内为显著.叠氮钠与培养的神经细胞共孵育导致神经细胞损伤,其机制与线粒体缺陷致细胞骨架系统异常有关.
